外周血炎癥標(biāo)志物聯(lián)合T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)在新型冠狀病毒肺炎的臨床價(jià)值探討

屈滿英，孫瑞琳，劉慶峰，劉靜，李瑞璞

（廣東省第二人民醫(yī)院，廣東 廣州 510317）

2019年12月末爆發(fā)至今仍肆掠全球的由嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒2（severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2）感染的新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）是一種新發(fā)的急性呼吸道感染性疾病，具有極高的傳染性和一定的致死性，其傳染源隱蔽、傳播途徑多樣、臨床表現(xiàn)不典型、確診方法局限等特點(diǎn)[1]，人類普遍易感，尚無特效藥物。因此全球?qū)OVID-19 的防控都較棘手。如何在COVID-19 疫情流行期間更好地管理COVID-19 疑似患者，防治潛在的疑似患者或者病毒攜帶者引起繼發(fā)感染，進(jìn)行綜合防控具有重要的臨床價(jià)值和社會(huì)意義。本研究回顧性分析廣東省第二人民醫(yī)院確診的COVID-19 患者和細(xì)菌性肺炎患者的臨床資料，為臨床診斷提供參考。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

收集2019年10月1日—2020年1月31日本院收治的細(xì)菌性肺炎40 例（細(xì)菌性肺炎組），以及2020年1月25日—2020年2月28日COVID-19 患者35 例（COVID-19 組）的臨床資料。細(xì)菌性肺炎的診斷參照《中國成人社區(qū)獲得性肺炎診斷和治療指南（2016年版）》診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]，COVID-19 診斷符合《新型冠狀病毒肺炎診療方案（試行第7 版修正版）》的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。COVID-19 臨床表現(xiàn)以發(fā)熱為主（90.5%），可有干咳、咽痛、頭痛、乏力及肌痛，極少數(shù)出現(xiàn)腹瀉等癥狀；而細(xì)菌性肺炎臨床以咳嗽、咳痰為主（93.6%），可合并發(fā)熱、乏力等癥狀；兩者借助流行病學(xué)、病原學(xué)、臨床癥狀，及胸部CT、實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)等輔助診斷方法明確。兩組患者留取標(biāo)本前均排除未使用糖皮質(zhì)激素、免疫抑制劑或免疫調(diào)節(jié)劑。

1.2 方法

所有患者于入院后24 h 內(nèi)，在使用抗生素治療前采集適量靜脈血送檢，采用自動(dòng)全血細(xì)胞分析儀（日本東亞全自動(dòng)血液分析儀，SYSMEX XN-3000）檢測(cè)血常規(guī)；采集患者靜脈血5 ml，以1 500 r/min離心20 min，取上層清液備檢，采用全自動(dòng)生化分析儀（日本日立HITACHI 7600）以乳膠免疫透射比濁法及配套試劑檢測(cè)血清CRP 水平；采用全自動(dòng)免疫分析儀（法國梅里埃生物技術(shù)公司，MINI-VIDAS2.0）以酶聯(lián)熒光法及配套試劑檢測(cè)血清PCT 水平；采用流式細(xì)胞儀（美國BD 公司）檢測(cè)外周血T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+水平，計(jì)算CD4+/CD8+值，所有操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。外周血各值正常范圍：白細(xì)胞數(shù)（WBC）3.5×109～9.5×109個(gè)/L，淋巴細(xì)胞絕對(duì)值1.1×109～3.2×109個(gè)/L，CRP 0～8 mg/L，PCT＜0.05 ng/ml；T 淋巴細(xì)胞亞群各值正常范圍：CD3+絕對(duì)計(jì)數(shù)770～2 860 個(gè)/μl，CD4+絕對(duì)計(jì)數(shù)500～1 440 個(gè)/μl，CD8+絕對(duì)計(jì)數(shù)238～1 250 個(gè)/μl，CD4+/CD8+值1.00～2.47。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，比較用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例（%）表示，比較用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組一般資料比較

兩組性別構(gòu)成比、年齡、吸煙史比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見表1）。其中COVID-19 組有SARS-CoV-2 感染接觸史者32 例占91.4%，50 歲以上16 例，占45.7%。

2.2 兩組外周血炎癥標(biāo)志物比較

兩組外周血WBC、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、PCT 和CRP 水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），細(xì)菌性肺炎組均高于COVID-19 組。見表2。

表1 兩組一般資料比較

2.3 兩組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群

細(xì)菌性肺炎組和COVID-19 組外周血T 淋巴細(xì)胞亞群的CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），細(xì)菌性肺炎組高于COVID-19 組；而兩組CD4+/CD8+比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。見表3。

表2 兩組外周血WBC、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CRP、PCT 比較 （±s）

表2 兩組外周血WBC、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CRP、PCT 比較 （±s）

組別 n WBC/（×109/L） 淋巴細(xì)胞絕對(duì)值/（×109/L） PCT/（ng/ml） CRP/（mg/L）細(xì)菌性肺炎組 40 12.60±5.70 2.85±0.82 3.28±2.41 49.50±24.50 COVID-19 組 35 4.28±0.98 1.19±0.41 0.05±0.1 17.07±20.35 t 值 9.080 11.292 8.468 6.183 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000

表3 兩組的T 淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)計(jì)數(shù)及比值比較 （±s）

表3 兩組的T 淋巴細(xì)胞亞群絕對(duì)計(jì)數(shù)及比值比較 （±s）

組別 n CD3+/（個(gè)/μl） CD4+/（個(gè)/μl） CD8+/（個(gè)/μl） CD4+/CD8+細(xì)菌性肺炎組 40 1 257±354 711±281 657±215 1.98±0.75 COVID-19 組 35 433±132 253±94 164±68 1.72±0.73 t 值 13.675 9.706 13.738 1.516 P 值 0.000 0.000 0.000 0.134

3 討論

COVID-19 傳染性強(qiáng)，截至2020年5月31日全球已確診病例超600 萬，重癥病例占15%～25%[4]，累計(jì)死亡超37 萬例，嚴(yán)重者可并發(fā)呼吸衰竭、急性呼吸窘迫綜合征（ARDS），病死率高[5]。本研究結(jié)果顯示，COVID-19 組有SARS-CoV-2 感染接觸史者32例（91.4%），50 歲以上的中老年人16 例（45.7%）。目前人類對(duì)于其致病機(jī)制還未完全明確，確診方法局限，且尚無特效藥物治療。對(duì)于不能排除潛在接觸史的疑似患者，臨床癥狀不典型，影像學(xué)表現(xiàn)為肺部感染，反復(fù)多次病毒核酸陰性時(shí)，臨床診斷及鑒別診斷有一定的難度。這部分無癥狀的SARS-CoV-2 感染者成為全球疫情防控的隱形危險(xiǎn)因素[6]。臨床如何借助現(xiàn)有的檢驗(yàn)技術(shù)聯(lián)合檢測(cè)，以便快速甄別COVID-19患者和疑似病例，對(duì)防治重癥新冠病毒性肺炎繼發(fā)細(xì)菌感染問題尤為關(guān)鍵。

感染相關(guān)生物標(biāo)志物是肺部感染性疾病診斷和治療中常用實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，包括WBC、CRP、PCT 等。外周血WBC 是鑒別細(xì)菌感染的常用指標(biāo)之一，易受機(jī)體應(yīng)激反應(yīng)、藥物等因素影響，存在一定的個(gè)體差異。CRP 是由肝細(xì)胞合成的急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，可準(zhǔn)確、快速反映人體的急性感染狀況，敏感性高，臨床常用于早期感染性疾病的鑒別診斷[7]。PCT 是一種感染相關(guān)的生物標(biāo)志物，由甲狀腺C 細(xì)胞合成和分泌的降鈣素前肽物質(zhì)，不具備激素活性。PCT 的敏感性和特異性比較高，一般在人血清中很難檢測(cè)到，一旦遭受病毒、細(xì)菌、真菌等感染時(shí)將明顯升高，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)PCT 可用于臨床指導(dǎo)肺炎的診斷和抗菌藥物的使用療程[8]，而WBC、CRP、PCT 聯(lián)合檢測(cè)對(duì)細(xì)菌感染性疾病診斷及病情的評(píng)估具有一定的臨床價(jià)值[7]。本研究發(fā)現(xiàn)COVID-19 組WBC、淋巴細(xì)胞絕對(duì)值、CRP、PCT 水平均低于細(xì)菌性肺炎組，提示這些特點(diǎn)可作為肺部SARS-CoV-2 感染與細(xì)菌感染的鑒別要點(diǎn)之一。

T 淋巴細(xì)胞亞群是免疫系統(tǒng)中最重要的細(xì)胞群，其中CD3+是T 淋巴細(xì)胞表面表達(dá)分子，通過測(cè)定CD3+絕對(duì)計(jì)數(shù)可以反映T 淋巴細(xì)胞的數(shù)量；CD4+通過分泌細(xì)胞因子和表達(dá)不同的表面分子各自調(diào)節(jié)免疫網(wǎng)絡(luò)中其他細(xì)胞的生物活性，是具有輔助T、B 淋巴細(xì)胞應(yīng)答功能的Th 細(xì)胞，能優(yōu)先分化及引發(fā)吞噬細(xì)胞介導(dǎo)的宿主防御應(yīng)答，在對(duì)抗細(xì)胞內(nèi)病原體感染中發(fā)揮重要的作用；CD8+具有抑制T 淋巴細(xì)胞的細(xì)胞毒性作用；CD4+/CD8+值是直接反映宿主T 細(xì)胞免疫功能的重要指標(biāo)。機(jī)體通過T 淋巴細(xì)胞亞群相互作用，維持良好的免疫功能狀態(tài)，對(duì)呼吸系統(tǒng)感染性疾病的治療及預(yù)后尤為重要[9]。臨床監(jiān)測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群各值絕對(duì)計(jì)數(shù)及比值的改變，能夠評(píng)估和判斷重癥肺炎患者預(yù)后[10]。血淋巴細(xì)胞功能的檢測(cè)是一種判斷機(jī)體細(xì)胞免疫功能的重要方法。目前對(duì)T 細(xì)胞亞群在COVID-19 這個(gè)新發(fā)流行病的研究較少。本研究結(jié)果顯示，COVID-19 組CD3+、CD4+和CD8+細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)同步降低，均低于細(xì)菌性肺炎組，而兩組CD4+/CD8+值無差異；說明COVID-19患者外周血中T 細(xì)胞亞群其自身的變化規(guī)律；SARSCoV-2 較細(xì)菌感染明顯加劇宿主的細(xì)胞免疫功能損壞，導(dǎo)致免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)失衡。有學(xué)者提出的細(xì)胞因子風(fēng)暴學(xué)說在SARS-CoV-2 感染導(dǎo)致的ARDS 中起主要作用[11]導(dǎo)致出現(xiàn)不同程度的全身炎癥反應(yīng)綜合征（systemic inflammatory response syndrome,SIRS），若SIRS繼續(xù)加重，全身靶器官功能損害則難以避免。COVID-19 患者CD3+、CD4+、CD8+T 淋巴細(xì)胞同步下降，下降的嚴(yán)重程度可能與肺部病變有關(guān)，進(jìn)一步研究SARS-CoV-2 感染的發(fā)生機(jī)制，對(duì)重癥肺炎的早期預(yù)警、早期炎癥控制及免疫干預(yù)具有重要意義。

綜上所述，COVID-19 患者發(fā)病早期外周血炎癥標(biāo)志物水平較細(xì)菌性肺炎低，而T 淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞絕對(duì)計(jì)數(shù)均同步降低，上述特征可作為COVID-19 與細(xì)菌性肺炎的早期鑒別的重要依據(jù)之一。對(duì)SARS-CoV-2 疑似感染者應(yīng)盡早完善外周血炎癥指標(biāo)及T 淋巴細(xì)胞亞群，有利于快速識(shí)別及盡可能減少COVID-19 漏診，減少對(duì)社會(huì)的危害，也可評(píng)估有無繼發(fā)細(xì)菌感染，為全面診治、評(píng)估病情提供客觀依據(jù)，降低并發(fā)癥、改善預(yù)后、提高患者生存率等具有積極的重要意義。