兩種HIV ELISA試劑在無償獻(xiàn)血血液篩查中的應(yīng)用

陶麗芳，伍圣克

廣西壯族自治區(qū)血液中心質(zhì)量管理科，廣西柳州 545005

人類免疫缺陷病毒(HIV)主要通過母嬰傳播、血液傳播和性傳播。柳州市艾滋病疫情形勢嚴(yán)峻，為了解及篩選出更適合本實驗室的HIV檢測策略，防止HIV的漏檢，本研究對2015-2017年柳州市無償獻(xiàn)血者標(biāo)本用兩種酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)試劑進(jìn)行HIV檢測，現(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2015-2017年廣西壯族自治區(qū)血液中心檢驗科檢測的柳州市無償獻(xiàn)血者標(biāo)本共218 478份。所有獻(xiàn)血者均是柳州市街頭無償獻(xiàn)血和企事業(yè)團(tuán)體無償獻(xiàn)血者，均符合《獻(xiàn)血者健康檢查要求》2012年新國標(biāo)要求。

1.2主要儀器與試劑 儀器：ELISA篩查采用TECAN EVO 200、TECAN EVO 150全自動標(biāo)本處理系統(tǒng)，F(xiàn)AME24/30全自動酶免分析系統(tǒng)，340RT、Sunrise酶標(biāo)儀。試劑：國產(chǎn)試劑(上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn))第3代HIV-1/HIV-2抗體檢測試劑(以下簡稱上?？迫A試劑)，進(jìn)口試劑(BIO-RAD公司生產(chǎn))第4代抗原抗體檢測超敏試劑(以下簡稱BIO-RAD試劑)。所有儀器均在校準(zhǔn)有效期和正常狀態(tài)下使用，所有試劑均為批檢合格試劑，均在有效期內(nèi)使用。

1.3方法 ELISA采用兩個不同生產(chǎn)廠家試劑，兩種試劑檢測呈陽性反應(yīng)則該標(biāo)本判為篩查陽性反應(yīng)；單試劑檢測呈陽性反應(yīng)，需用原試劑雙孔重試，任一孔為陽性反應(yīng)則該標(biāo)本判為篩查陽性反應(yīng)；所有篩查陽性反應(yīng)的標(biāo)本送柳州市疾病預(yù)防控制中心(CDC)確證實驗室，采用蛋白印跡法進(jìn)行確證。所有檢測過程嚴(yán)格按照儀器及試劑盒說明書的要求進(jìn)行操作。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料以例數(shù)或百分率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計意義。

2 結(jié) 果

2.1柳州市無償獻(xiàn)血標(biāo)本的兩種ELISA試劑檢測結(jié)果情況統(tǒng)計 2015-2017年柳州市218 478份無償獻(xiàn)血者標(biāo)本中雙試劑陽性反應(yīng)132份(0.060%)，上?？迫A試劑初次陽性反應(yīng)140份(0.064%)，BIO-RAD試劑初次陽性反應(yīng)1 016份(0.465%)。不同年份間陽性反應(yīng)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 2015-2017年柳州市無償獻(xiàn)血標(biāo)本的兩種ELISA試劑檢測結(jié)果情況統(tǒng)計[n(%)]

2.2單試劑初次陽性反應(yīng)的重試結(jié)果情況統(tǒng)計 對2015-2017年單試劑初次陽性反應(yīng)進(jìn)行原試劑雙孔重試結(jié)果情況統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)上?？迫A試劑初次陽性反應(yīng)140份中有65份重試陽性反應(yīng)，重試陽性反應(yīng)率為46.429%；BIO-RAD試劑初次陽性反應(yīng)1 016份中有279份重試陽性反應(yīng)，重試陽性反應(yīng)率為27.461%；不同年份間上?？迫A試劑重試陽性反應(yīng)率差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=17.86,P<0.01)；不同年份間BIO-RAD試劑重試陽性反應(yīng)率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=5.37,P>0.05)，見表2。

表2 2015-2017年單試劑初次陽性反應(yīng)的重試結(jié)果情況統(tǒng)計

2.3兩種ELISA試劑初次陽性反應(yīng)送檢確認(rèn)陽性反應(yīng)結(jié)果統(tǒng)計情況 對2015-2017年兩種ELISA試劑陽性反應(yīng)性標(biāo)本送柳州市CDC確證實驗室的確認(rèn)陽性反應(yīng)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，結(jié)果顯示：上?？迫A試劑陽性反應(yīng)送檢65份，有0份確認(rèn)陽性反應(yīng),確認(rèn)陽性反應(yīng)率為0.000%，5份不確定，不確定率為7.692%；BIO-RAD試劑陽性反應(yīng)送檢279份，有1份確認(rèn)陽性反應(yīng)，確認(rèn)陽性反應(yīng)率為0.358%,17份不確定，不確定率為6.093%；不同年份間確認(rèn)陽性反應(yīng)符合率與不確定率差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，沒有上升或下降趨勢，見表3。

表3 2015-2017年兩種ELISA試劑初次陽性反應(yīng)送檢確認(rèn)陽性反應(yīng)結(jié)果統(tǒng)計情況

2.4兩種ELISA試劑陽性反應(yīng)落在灰區(qū)的送檢確認(rèn)結(jié)果統(tǒng)計情況 對2015-2017年兩種ELISA試劑陽性反應(yīng)落在灰區(qū)的送檢確認(rèn)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計，發(fā)現(xiàn)上?？迫A試劑陽性反應(yīng)落在灰區(qū)的占38.462%，確認(rèn)陽性反應(yīng)為0.000%，BIO-RAD試劑陽性反應(yīng)落在灰區(qū)的占47.312%，確認(rèn)陽性反應(yīng)為0.358%，見表4。

表4 2015-2017年兩種ELISA試劑陽性反應(yīng)落在灰區(qū)的送檢確認(rèn)結(jié)果統(tǒng)計情況

3 討 論

3.1柳州市無償獻(xiàn)血人群HIV感染率明顯高于全國獻(xiàn)血人群 從表1看，2015-2017年獻(xiàn)血者標(biāo)本雙試劑陽性反應(yīng)率0.060%，這與劉峭梅等[1]報道的柳州市無償獻(xiàn)血人群HIV感染率為0.058%相符，明顯高于亳州獻(xiàn)血人群HIV感染率(0.017%)[2]，也高于廣州地區(qū)無償獻(xiàn)血人群HIV感染率(29.6/10萬)[3]。

3.2BIO-RAD試劑假陽性高于上?？迫A試劑 從表1、2看，BIO-RAD試劑初次陽性反應(yīng)率遠(yuǎn)高于上?？迫A試劑，其重試陽性反應(yīng)率低于上?？迫A試劑，說明BIO-RAD試劑假陽性率高于上?？迫A試劑，原因可能為BIO-RAD試劑包被純抗原造成了一部分假陽性，另外也與BIO-RAD試劑對纖維蛋白和某些顆粒物質(zhì)有交叉反應(yīng)有關(guān)，如抗鏈球菌溶血素O、反應(yīng)蛋白、類風(fēng)濕因子、抗核抗體等對P24抗原干擾物質(zhì)[4]，還有洗液、洗板要求程度不同等方面的原因。

3.3BIO-RAD試劑靈敏度較高可減少漏檢的發(fā)生 從表3看，BIO-RAD單試劑陽性有1例(該例標(biāo)本核酸檢測結(jié)果為陰性反應(yīng))確認(rèn)為HIV P24抗原陽性，說明BIO-RAD試劑靈敏度高，如果兩種試劑均采用國產(chǎn)第3代的情況下，就會造成HIV抗原的漏檢。上?？迫A試劑陽性反應(yīng)有5份不確定；BIO-RAD試劑有17份不確定；不確定結(jié)果預(yù)示有較大的感染風(fēng)險，因沒有對不確定結(jié)果的獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤復(fù)查，因此不了解這些標(biāo)本是窗口期HIV感染還是非特異性抗體引起，需做進(jìn)一步研究調(diào)查。

3.4BIO-RAD HIV試劑靈敏度較高，且有必要設(shè)置灰區(qū) 從表4看，上?？迫A試劑陽性反應(yīng)落在灰區(qū)的25份標(biāo)本，確認(rèn)陽性反應(yīng)為0份，BIO-RAD試劑陽性反應(yīng)落在灰區(qū)的132份標(biāo)本，確認(rèn)陽性反應(yīng)1份，并利用血站信息系統(tǒng)進(jìn)行追蹤，其核酸檢測結(jié)果為陰性反應(yīng)，說明是病毒載量低的慢性或持續(xù)性感染，雖然這比率比較低，但是涉及血液的安全，本實驗室BIO-RAD試劑設(shè)立灰區(qū)是非常必要的。這與文獻(xiàn)[5-7]報道第4代抗-HIV ELISA試劑檢測不必設(shè)置灰區(qū)不同,這可能與HIV感染流行區(qū)域有關(guān)，也可能與實驗室環(huán)境有關(guān)。上?？迫A試劑可以結(jié)合核酸檢測(NAT)結(jié)果取消灰區(qū)的設(shè)立或者提高灰區(qū)的設(shè)置，以減少日常工作量和獻(xiàn)血者的誤淘汰，這與文獻(xiàn)[5-8]報道相符。

綜上所述，本研究結(jié)果表明，上?？迫A試劑受干擾因素少，交叉反應(yīng)少，因此假陽性低，減少了血液的報廢與血源的流失，降低本實驗室資源的浪費，更重要的是減輕了確證陰性獻(xiàn)血者的心理負(fù)擔(dān)和精神壓力，可以結(jié)合核酸結(jié)果取消灰區(qū)的設(shè)立或者提高灰區(qū)的設(shè)置，缺點是會造成對HIV抗原的漏檢；BIO-RAD試劑靈敏度高，可以縮短“窗口期”4～5 d[9]，提高檢出率,更好地避免漏檢，同時設(shè)立灰區(qū)也是非常必要的，特別是BIO-RAD單試劑灰區(qū)陽性反應(yīng)有1列確認(rèn)為HIV P24抗原陽性證明了這一點，但由于存在交叉反應(yīng)和干擾因素較多，使其有更高的假陽性。本研究期間有2份NAT反應(yīng)性、ELISA檢測陰性標(biāo)本，送柳州市CDC確證實驗室標(biāo)本陰性，追蹤和隨訪采樣檢測發(fā)現(xiàn)：1份CDC最終確證抗-HIV陽性，為HIV“窗口期”感染者，1份為陰性，說明病毒核酸檢測有效縮短HIV檢測的窗口期，對確保血液安全有重要意義。2019版《血站技術(shù)操作規(guī)程》也提出了新的血液檢測方法策略：HIV、乙型肝炎病毒(HBV)和丙型肝炎病毒(HCV)感染標(biāo)志物應(yīng)至少采用核酸和血清學(xué)試劑各進(jìn)行 1次檢測。這樣就對試劑提出了更大的考驗，在選擇試劑的時候一定要充分評估試劑，如果能對不確定結(jié)果的獻(xiàn)血者進(jìn)行追蹤復(fù)查和補(bǔ)充試驗檢測，將能更好地考核試劑做出選擇，對于在HIV感染高流行區(qū)和靈敏度要求高的采供血機(jī)構(gòu)實驗室，在實際工作中建議使用靈敏度高的BIO-RAD試劑和NAT結(jié)合檢測策略避免漏檢，確保血液的安全性，保證臨床用血安全。