免疫透射比濁法檢測血清鐵蛋白的性能評價*

劉 繼，童輝純，彭建明，袁春雷，葉貴誠，官燕飛

中山市博愛醫(yī)院檢驗科，廣東中山 528400

鐵蛋白(FER)是一種相對分子質量約為450×103的含鐵蛋白質，具有強大的鐵結合和儲備能力，是人體內除血紅蛋白外含鐵最豐富的蛋白質[1]，主要分布于骨髓、肝、脾內。FER在鐵缺乏疾病中降低，是診斷缺鐵性貧血最可靠和最敏感的指標[2]，特別是可極早診斷體內鐵缺乏[3]。FER在鐵超負荷疾病、炎癥、肝臟疾病及惡性腫瘤時可以顯著升高[4]，被廣泛應用于腫瘤的篩查和輔助診斷。本文對免疫透射比濁法檢測FER進行方法學評價驗證，判斷其是否能滿足臨床檢測需求。

1 材料與方法

1.1試劑與儀器 免疫透射比濁法檢測FER試劑盒、校準物、質控物均由重慶中元生物技術股份有限公司提供，儀器為美國貝克曼庫爾特AU5800型自動生化分析儀。比對系統(tǒng)為羅氏Cobas E601全自動化學發(fā)光分析儀分析系統(tǒng)及配套FER試劑盒。

1.2免疫透射比濁法檢測血清FER性能評價

1.2.2線性范圍 參考CLSI EP6-A文件，取FER水平接近10 ng/mL及1 000 ng/mL血清標本各1份，按4L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、4H的關系配制，形成系列水平梯度。將每個標本重復檢測3次，計算平均值作為實測水平(Y)，理論水平(X)與實測水平(Y)采用線性回歸進行線性評價，并計算出回歸方程及相關系數r2。

1.2.6參考范圍驗證 參照美國臨床實驗室標準化委員會C28-A2文件，選擇在本院體檢中心體檢的健康體檢者血清標本40份(男女各20例，年齡16～65歲)作為參考人群，將測定結果進行統(tǒng)計并對試劑說明書提供的參考區(qū)間進行驗證。如果參考人群的FER檢測值不超過4個落在廠家申明的參考區(qū)間外，則驗證通過。

1.3統(tǒng)計學處理 利用SPSS20.0 統(tǒng)計軟件和Microsoft Excel 2013軟件進行數據分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1精密度試驗結果 免疫透射比濁法測定FER低值、中值、高值批內CV分別為3.48%、0.97%、2.09%，批間CV分別為4.43%、2.88%、2.10%，均符合試劑廠家標明的精密度要求，見表1。

表1 FER批內及批間精密度

2.2線性試驗結果 將FER理論值作為橫坐標(X)，測量值為縱坐標(Y)進行線性回歸分析。結果顯示免疫透射比濁法檢測FER在10～1 000 ng/mL，線性良好，回歸方程Y=1.008 4X-1.679 7，r2=0.999 4，符合廠家要求，見圖1。

圖1 FER線性測定

2.3比對試驗結果 免疫透射比濁法測定FER結果與電化學發(fā)光法檢測結果相關性良好。線性回歸方程Y=0.980 7X+1.391 3，線性回歸系數r2=0.998 1。兩個檢測系統(tǒng)測定結果均值差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見圖2。

圖2 FER比對試驗

2.4回收試驗結果 回收率為96.02%～102.74%，平均回收率為99.94%，符合試驗要求，見表2。

表2 免疫透射比濁法對不同水平FER樣品的回收試驗結果

2.5干擾試驗結果 由表3可見，當標本中BIL≤498.40 μmol/L、TG≤9.90 mmol/L、Hb≤500 mg/dL時,對免疫透射比濁法無干擾。

表3 免疫透射比濁法對不同水平干擾物的回收試驗結果

2.6參考范圍驗證結果 經驗證FER水平有38個在試劑說明書提供的參考區(qū)間范圍，有2個超出所驗證的參考區(qū)間，參考區(qū)間通過驗證。

3 討 論

血清FER與骨髓鐵染色結果相關性良好[5-7]，一般認為血清FER<15 ng/mL即可診斷為鐵缺乏[8]，是反映體內鐵貯存量最有價值的參數。肝臟作為合成和儲存FER的主要場所，FER水平與肝細胞受損程度呈正相關[9]，故而FER可以作為診斷肝癌等肝臟疾病比較靈敏的指標[10]。除此之外，血清FER在肺癌、乳腺癌、卵巢癌、惡性血液病患者中也明顯增高[11-13]。

目前臨床實驗室測定FER的方法主要有化學發(fā)光法、放射免疫法等，前者檢測的靈敏度高，反應時間短，線性范圍廣，但需要特定配套的化學發(fā)光儀和試劑盒，測定的成本較高,這也限制了其在基層單位的應用；后者加樣、離心全部是手工操作，步驟較復雜，帶來誤差的環(huán)節(jié)較多，而且存在同位素的半衰期短、放射性的危害等缺點。

根據ISO15189對實驗室質量的要求，實驗室必須對檢測系統(tǒng)進行驗證。本文主要是對重慶中元生物技術股份有限公司生產的膠乳增強免疫透射比濁法FER檢測試劑盒進行性能評價。在美國貝克曼庫爾特AU5800型自動生化分析儀上，參照CLSI系列文件，結果顯示，膠乳增強免疫透射比濁法檢測FER批內和批間CV均小于5%，說明此試劑盒重復性較好，符合廠家聲明的精密度的要求；在10～1 000 ng/mL線性良好(r2=0.999 4)，能較好滿足臨床需求；比對試驗顯示，免疫透射比濁法與化學發(fā)光法相比較二者相關性好(r2=0.998 1)；96.02%～102.74%的回收率提示免疫透射比濁法具有較高的準確性；當標本中BIL≤498.40 μmol/L、TG≤9.90 mmol/L、Hb≤500 mg/dL時，對免疫透射比濁法無干擾。

綜上所述，免疫透射比濁法可應用于全自動生化分析儀檢測FER，隨機誤差小、重復性好、線性范圍廣、抗干擾能力強，能滿足臨床需求；與化學發(fā)光法比較，結果準確，費用相對較低，能減輕患者負擔，廣泛適用于臨床。