急性心力衰竭患者血清microRNA-1水平及與心功能和預(yù)后的關(guān)系

陳婉斐，陳晨

[1.臺州市中心醫(yī)院（臺州學(xué)院附屬醫(yī)院）心內(nèi)科，浙江 臺州 318000；2.臺州市立醫(yī)院心內(nèi)科，浙江 臺州 318000]

心力衰竭為心功能減退綜合征，是心臟疾病發(fā)展的終末階段。近年來隨著人口的不斷老齡化，心力衰竭的發(fā)生率和死亡率逐年升高，臨床轉(zhuǎn)歸不理想。心力衰竭發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，研究發(fā)現(xiàn)心力衰竭的發(fā)生、發(fā)展與一些基因的表達(dá)和功能異常關(guān)系密切。microRNA（miRNA）為非編碼單鏈RNA，長度為22個核苷酸，在動植物基因翻譯和轉(zhuǎn)錄調(diào)控中發(fā)揮重要作用，可調(diào)節(jié)胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖和凋亡等多個病理生理過程，并在外周血中存在，在心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要價值[1-2]。microRNA-1（miR-1）主要在心肌和骨骼肌組織中表達(dá)，在肌肉生成、發(fā)育及重塑中發(fā)揮重要的調(diào)控作用，參與心臟正常功能的維持，參與心肌肥大、心肌梗死及心力衰竭等心臟疾病的發(fā)生發(fā)展過程[3]。何芮等[4]研究發(fā)現(xiàn)，輸注miR-1 可改善異丙腎上腺素誘導(dǎo)的小鼠心力衰竭。目前關(guān)于miR-1 在心力衰竭中的作用主要集中在動物實驗和細(xì)胞研究[5]，在心力衰竭血清中的表達(dá)及意義尚需進(jìn)一步研究，本文對心力衰竭患者血清miR-1水平進(jìn)行研究，探討其與心功能和預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年1月—2018年12月在臺州市中心醫(yī)院就診的急性心力衰竭患者120例作為心力衰竭組，同期健康體檢者120例作為對照組。心力衰竭患者根據(jù)嚴(yán)重程度分為I級21例，Ⅱ級30例，Ⅲ級32例，Ⅳ級37例；根據(jù)1年內(nèi)預(yù)后情況分為預(yù)后良好組77例，預(yù)后不良組43例包括再次發(fā)生心力衰竭28例和死亡15例）。預(yù)后良好組男性39例，女性38例；年齡（65.02±6.13）歲；基礎(chǔ)疾?。喊昴ば孕呐K病24例，缺血性心臟病21例，高血壓性心臟病17，擴(kuò)張型心臟病15例。預(yù)后不良組男性22例，女性21例；年齡（64.52±5.78）歲；基礎(chǔ)疾病：瓣膜性心臟病13例，缺血性心臟病11例，高血壓性心臟病11例，擴(kuò)張型心臟病9例。預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者年齡、性別及基礎(chǔ)疾病比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。本研究通過醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。心力衰竭組與對照組年齡、性別、體重指數(shù)、血壓、總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

表1 兩組一般資料比較 （n=120）

1.1.1 心力衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)心力衰竭診斷標(biāo)準(zhǔn)參照中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會心力衰竭學(xué)組的《中國心力衰竭診斷和治療指南2018》[6]。

1.1.2 心力衰竭嚴(yán)重程度分級肢體溫暖、肺部干凈為I級；肢體溫暖、肺部濕啰音為Ⅱ級；肢體冷、肺部干凈為Ⅲ級；肢體冷、肺部啰音為Ⅳ級[7]。

1.1.3 納入標(biāo)準(zhǔn)①心力衰竭患者紐約心臟病協(xié)會（New York Heart Association,NYHA）分級≥Ⅱ級；②對照組患者體檢身體健康；③兩組年齡＞18歲；④資料完整，患者簽署知情同意書。

1.1.4 排除標(biāo)準(zhǔn)①合并其他心血管疾?。虎趪?yán)重肝腎功能異常；③惡性腫瘤；④自身免疫系統(tǒng)疾??；⑤精神病史。

1.2 方法

1.2.1 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR）測定血清miR-1心力衰竭患者于入院第2天清晨、對照組于體檢當(dāng)日清晨采集外周靜脈血5 ml，室溫下2 500 r/min 離心10 min，分離血清。向血清中加入Trizol 試劑，室溫放置20 min，4℃、2 000 r/min 離心15 min，吸取上清液，18 000 r/min離心10 min，吸取上清液，提取總RNA。PCR 反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性8 min，95℃變性15 s，58℃退火60 s，35℃延伸10 s，共40個循環(huán)，以2-ΔΔCt法計算miR-1相對表達(dá)量。miR-1 引物及逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購自上海英杰公司。

1.2.2 心功能測定采用IE33 彩色多普勒心臟超聲診斷儀（購自荷蘭飛利浦公司）測定患者左心房內(nèi)徑左心房內(nèi)徑（left atrial dimension,LAD）、左心室舒張末期內(nèi)徑（left ventricular end-diastolic dimension,LVDd），計算左心室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction,LVEF）。

1.3 隨訪

心力衰竭患者治療后隨訪1年，定期門診隨訪，由專門護(hù)士詳細(xì)登記隨訪過程中病情變化。再次發(fā)生心力衰竭或死亡為預(yù)后不良。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示，比較用t檢驗或方差分析，進(jìn)一步的兩兩比較用LSD-t檢驗，影響因素的分析用多因素Logistic回歸模型，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組血清miR-1和心功能指標(biāo)比較

心力衰竭組與對照組血清miR-1和LVEF、LAD及LVEd比較，經(jīng)t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），心力衰竭組血清miR-1和LVEF 低于對照組；而LAD、LVEd 水平高于對照組。見表2。

表2 兩組血清miR-1和心功能指標(biāo)比較 （n=120，±s）

表2 兩組血清miR-1和心功能指標(biāo)比較 （n=120，±s）

組別 miR-1 LVEF/% LAD/mm LVEd/mm對照組 1.00±0.05 65.87±5.64 31.02±10.35 44.26±5.38心力衰竭組 0.46±0.04 42.61±5.42 47.25±11.43 57.34±5.49 t值 92.383 32.574 11.530 18.641 P值 0.000 0.000 0.000 0.000

2.2 不同嚴(yán)重程度分級的心力衰竭患者血清miR-1相對表達(dá)量比較

I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ級心力衰竭患者血清miR-1相對表達(dá)量分別為（0.61±0.04）、（0.53±0.05）、（0.42±0.06）和（0.31±0.05），經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=187.257，P=0.000），且進(jìn)一步兩兩比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。不同嚴(yán)重程度分級的心力衰竭患者隨心力衰竭嚴(yán)重程度的增加，血清miR-1 降低。

2.3 不同預(yù)后的心力衰竭患者血清miR-1比較

預(yù)后良好組與預(yù)后不良組患者血清miR-1相對表達(dá)量分別為（0.55±0.04）和（0.31±0.06），經(jīng)t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=26.219，P=0.000），預(yù)后不良組低于預(yù)后良好組。

2.4 心力衰竭患者血清miR-1與心功能指標(biāo)的相關(guān)性分析

心力衰竭患者血清miR-1與LVEF 呈正相關(guān)（P＜0.05）；與LAD、LVEd 呈負(fù)相關(guān)（P＜0.05）。見表3。

2.5 心力衰竭患者預(yù)后影響因素的Logistic回歸分析

以預(yù)后為因變量，miR-1、LVEF、LAD及LVEd為自變量，進(jìn)行一般多因素Logistic回歸分析，檢驗水準(zhǔn)為0.05，以各變量的實際值賦值。結(jié)果顯示miR-1、LVEF、LAD及LVEd為心力衰竭預(yù)后的影響因素（P＜0.05）。見表4。

表3 心力衰竭患者心功能指標(biāo)與血清miR-1水平的相關(guān)性

表4 心力衰竭患者預(yù)后影響因素的Logistic回歸分析參數(shù)

3 討論

心力衰竭是由心臟收縮和舒張功能發(fā)生障礙引起的心臟循環(huán)障礙，包括急性和慢性心力衰竭。其中急性心力衰竭是由于急性心肌負(fù)荷增加，心肌負(fù)荷過重導(dǎo)致心臟排出量驟減，循環(huán)阻力增加，肺充血導(dǎo)致肺淤血、肺水腫，并且伴有組織灌注不足所引起的一種臨床綜合征。目前對急性心力衰竭的診斷比較完善，但對心力衰竭患者的療效評價及預(yù)后狀況評估主要采用心臟彩超，但心臟彩超檢查效果不完善，存在一定局限性。miRNA 在靶基因降解和調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)方面發(fā)揮重要的調(diào)節(jié)作用，參與基因活動各個層面的調(diào)節(jié)，在胚胎發(fā)育、細(xì)胞增殖、細(xì)胞死亡、細(xì)胞凋亡及脂肪代謝等生命過程中發(fā)揮重要作用[8]。miRNA的表達(dá)具有高度組織特異性和細(xì)胞特異性，在心臟中大量表達(dá)的有miR-24、miR-126、miR-133及miR-1 等多種miRNA[9]。近來研究發(fā)現(xiàn)，多種miRNA參與心肌肥厚、心肌缺血、心律失常、心肌病及心力衰竭等多種心臟疾病的病理生理過程[10-11]。

miRNA 在血清中穩(wěn)定表達(dá)，研究發(fā)現(xiàn)miR-1 在急性心肌梗死的早期診斷中具有重要價值[12-13]。本研究發(fā)現(xiàn)，心力衰竭患者血清miR-1 降低，在心力衰竭心肌組織中miR-1表達(dá)下調(diào)。miR-1為肌肉和心臟特異性miRNA，為心臟中含量比較豐富的miRNA，miR-1高表達(dá)對生長相關(guān)基因的表達(dá)具有抑制作用[14-15]，其表達(dá)下調(diào)可通過調(diào)控心肌肥大相關(guān)基因水平上調(diào)，從而介導(dǎo)心肌肥大的發(fā)生[16]。心力衰竭時miR-1表達(dá)下調(diào)，靶基因肌細(xì)胞增強(qiáng)因子-2和鈣調(diào)蛋白表達(dá)增強(qiáng)，鈣調(diào)蛋白為心肌肥大信號的重要介質(zhì)，其可活化鈣神經(jīng)素，導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子激活T細(xì)胞核因子，導(dǎo)致其活化，從而導(dǎo)致心肌肥大的產(chǎn)生[17]。故分析心力衰竭時心肌組織miR-1表達(dá)下調(diào)，通過多種途徑介導(dǎo)心力衰竭的發(fā)生；因心力衰竭時心肌組織中miR-1表達(dá)下調(diào)，其釋放入血的miR-1 也降低，故心力衰竭患者血清miR-1 降低。

本研究發(fā)現(xiàn)心功能NYHA分級越高血清miR-1越低；預(yù)后不良組患者血清miR-1 低于預(yù)后良好組；血清miR-1與LVEF 呈正相關(guān)，與LAD、LVEd 呈負(fù)相關(guān)；多因素Logistic回歸分析顯示miR-1為心力衰竭預(yù)后的獨立影響因素。心功能NYHA分級為按照誘發(fā)心力衰竭癥狀的活動程度對心功能受損狀況進(jìn)行的分級，其級別越高，表明心功能受損程度越重。LVEF 可從容積方面反映心室的射血功能，為判斷心臟功能的主要指標(biāo)之一，其值越低表明心功能越差。LAD、LVEd 也為心功能的常用指標(biāo)，其值越高表明心功能越差。故本研究結(jié)果表明miR-1 在反映心功能方面具有一定價值，其值越低在一定程度上可反映心功能越差；miR-1為心力衰竭不良預(yù)后的獨立影響因素，其值越低心力衰竭的預(yù)后越差。

綜上所述，急性心力衰竭患者血清miR-1 降低，檢測血清miR-1 對評估患者心功能和預(yù)后具有一定的參考價值。