肝硬化患者血清脂聯(lián)素、脂多糖、基質(zhì)金屬蛋白酶-2水平及其診斷價(jià)值

（滄州市中心醫(yī)院 消化內(nèi)二科，河北 滄州 061000）

肝硬化是由一種或多種病因長(zhǎng)期反復(fù)作用導(dǎo)致的肝病終末期[1]。其主要臨床表現(xiàn)為腹脹、消瘦、下肢水腫、貧血等，隨著病情進(jìn)展，可出現(xiàn)腹水、肝性腦病、消化道出血等嚴(yán)重并發(fā)癥導(dǎo)致多臟器功能衰竭，甚至死亡[2-3]。我國(guó)肝硬化發(fā)病原因主要是病毒性肝炎，其中以乙型肝炎和丙型肝炎最為常見(jiàn)。我國(guó)每年肝硬化發(fā)病率約1.7‰，大多為20～50歲男性，50～60歲男性患者的病死率約1.12‰。全球每年因肝硬化死亡的人數(shù)高達(dá)120萬(wàn)，嚴(yán)重危害患者的生命健康[4]。因此，肝硬化患者進(jìn)行早期診斷及治療對(duì)延緩患者病情發(fā)展、提高患者生活質(zhì)量具有重要意義。脂聯(lián)素（Adiponectin,APN）是由脂肪細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，具有調(diào)節(jié)糖脂代謝、增加胰島素敏感性、抗炎、抗氧化等作用[5]。脂多糖（Lipopolysaccharides,LPS）是革蘭陰性菌胞壁內(nèi)毒素的主要成分，可促進(jìn)肝纖維化的發(fā)生并導(dǎo)致肝損傷[6]?；|(zhì)金屬蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）是降解膠原類的特異性蛋白因子，可對(duì)肝纖維化程度造成直接影響，是參與降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的重要因子[7]。然而，APN、LPS及MMP-2 能否用于診斷肝硬化的研究較少見(jiàn)。本研究旨在探討肝硬化患者血清APN、LPS及MMP-2水平及三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)肝硬化的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年6月—2019年6月滄州市中心醫(yī)院消化內(nèi)科診斷為肝硬化的患者90例作為觀察組。其中，男性53例，女性37例；平均年齡（51.79±6.46）歲；乙型肝炎肝硬化39例，丙型肝炎肝硬化20例，酒精性肝硬化15例，膽源性肝硬化12例，其他肝硬化4例；Child-Pugh分級(jí)分為A級(jí)31例，B級(jí)32例，C級(jí)27例?；颊呔细斡不\斷標(biāo)準(zhǔn)[8]。排除標(biāo)準(zhǔn)：①嚴(yán)重凝血功能障礙者；②惡性腫瘤者。選取同期本院健康體檢者30例作為對(duì)照組。其中，男性20例，女性10例；平均年齡（52.42±7.65）歲。兩組年齡及性別比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究通過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，研究對(duì)象或家屬均簽署知情同意書(shū)。

1.2 方法

清晨抽取研究對(duì)象空腹靜脈血5 ml，3 500 r/min離心10 min，取上清液于-70℃保存待測(cè)。經(jīng)DL-ET 32 微生物動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)采用定量動(dòng)態(tài)濁度法檢測(cè)血清LPS水平。測(cè)定時(shí)，解凍樣品30 min，置于75℃水浴10 min，預(yù)熱內(nèi)毒素定量測(cè)定儀，于樣品中加入鱟試劑后進(jìn)行測(cè)定。采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)血清APN和MMP-2水平。試劑盒購(gòu)于美國(guó)R&D公司，測(cè)定時(shí)，在室溫中解凍樣品20 min，ELISA試劑盒在室溫中放置30 min。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差 （±s）表示，比較用t檢驗(yàn)或方差分析，進(jìn)一步兩兩比較用SNK-q法，繪制ROC曲線，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者血清APN、LPS及MMP-2比較

兩組患者血清APN、LPS及MMP-2比較，經(jīng)t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），觀察組較對(duì)照組高。見(jiàn)表1。

表1 兩組血清APN、LPS及MMP-2比較 （±s）

表1 兩組血清APN、LPS及MMP-2比較 （±s）

組別 n APN/（μg/L）LPS/（pg/ml）MMP-2/（ng/ml）對(duì)照組 30 694.73±107.38 34.23±16.16 0.96±0.08觀察組 90 975.71±169.33104.89±76.35 1.72±0.51 t值 4.525 3.897 4.234 P值 0.036 0.047 0.043

2.2 不同Child-Pugh分級(jí)患者血清APN、LPS及MMP-2水平比較

不同Child-Pugh分級(jí)患者血清APN 水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。不同Child-Pugh分級(jí)患者血清LPS、MMP-2水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），B、C級(jí)較A級(jí)高，C級(jí)較B級(jí)高。見(jiàn)表2。

2.3 血清APN、LPS及MMP-2 對(duì)肝硬化的診斷價(jià)值

繪制血清APN、LPS、MMP-2 單獨(dú)或三者聯(lián)合診斷肝硬化的ROC曲線，結(jié)果顯示：血清APN 診斷肝硬化的最佳截?cái)嘀禐?.228時(shí)，敏感性和特異性分別為75.0%（95%CI：0.687，0.816）和47.8%（95%CI：0.416，0.533）；血清LPS診斷肝硬化的最佳截?cái)嘀禐?.249時(shí)，敏感性和特異性分別為79.2%（95%CI：0.728，0.875）和45.7%（95%CI：0.409，0.517）；血清MMP-2 診斷肝硬化的最佳截?cái)嘀禐?.363時(shí)，敏感性和特異性分別為66.7%（95%CI：0.594，0.734）和69.6%（95%CI：0.651，0.750）；3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合診斷肝硬化的最佳截?cái)嘀禐?.645時(shí)，敏感性和特異性分別為66.7%（95%CI：0.603，0.742）和97.8%（95%CI：0.951，0.985）。見(jiàn)表3和圖1。

表2 不同Child-Pugh分級(jí)患者血清APN、LPS及MMP-2水平比較 （±s）

表2 不同Child-Pugh分級(jí)患者血清APN、LPS及MMP-2水平比較 （±s）

注：①與A級(jí)比較，P＜0.05；②與B級(jí)比較，P＜0.05。

Child-Pugh分級(jí) n APN/（μg/L）LPS/（pg/ml）MMP-2/（ng/ml）A級(jí) 31 913.97±143.21 87.89±57.32 1.49±0.61 B級(jí) 32 942.20±153.59 105.89±62.15① 1.75±0.10①C級(jí) 27 895.18±150.32 119.89±75.22①② 1.91±0.13①②F值 0.530 4.253 3.369 P值 0.578 0.042 0.035

表3 血清APN、LPS及MMP-2 診斷肝硬化的ROC曲線參數(shù)

圖1 血清APN、LPS及MMP-2 單獨(dú)或聯(lián)合診斷肝硬化的ROC曲線

3 討論

肝硬化是各種肝病的終末期臨床表現(xiàn)，大多由慢性肝炎引起[9]。由于感染、消化道出血、肝功能異常等原因，疾病反復(fù)發(fā)作，病情逐漸惡化或加重，從而出現(xiàn)肝衰竭、門靜脈高壓等嚴(yán)重并發(fā)癥，可進(jìn)展為原發(fā)性肝癌，對(duì)患者生命造成威脅[10-13]。因此，積極尋找準(zhǔn)確有效的臨床標(biāo)志物，早期對(duì)肝硬化進(jìn)行診斷、治療及評(píng)估預(yù)后具有重要的意義。

APN是由成熟脂肪細(xì)胞分泌的一種特有的細(xì)胞因子，可改善胰島素抵抗，并發(fā)揮抗炎、抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用，在調(diào)節(jié)糖脂代謝中扮演關(guān)鍵角色[14-16]。本研究中，肝硬化患者血清APN 水平高于健康人群，但未隨著Child-Pugh分級(jí)加重而升高。其原因可能為肝硬化患者肝臟對(duì)APN的代謝清除減少，且受損肝細(xì)胞APN 基因及蛋白表達(dá)升高，從而升高血清APN水平[17]。因此，血清APN表達(dá)升高與肝硬化的發(fā)生密切關(guān)系。此外，由革蘭陰性菌產(chǎn)生的LPS是具有生物活性的熱穩(wěn)定物質(zhì)[18]。健康人群血清中的LPS 主要來(lái)自于腸道，經(jīng)肝臟代謝，而肝硬化患者的腸道菌群紊亂，腸道細(xì)菌過(guò)度生長(zhǎng)，可導(dǎo)致腸道陷入淤血狀態(tài)，從而造成LPS 增加[19]。腸道菌群的改變及其產(chǎn)生的LPS 在肝硬化的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。同時(shí)，MMP-2是MMPs 酶系家族中參與降解細(xì)胞外基質(zhì)成分的重要成員，活化后能降解變性膠原和纖維連接蛋白，而肝硬化是細(xì)胞外基質(zhì)成分過(guò)多而肝纖維化持續(xù)增生引起的。因此，血清MMP-2水平隨著患者病情嚴(yán)重程度的增加而升高[20-21]。本研究結(jié)果顯示，肝硬化患者血清LPS、MMP-2水平明顯增高，且隨Child-Pugh分級(jí)加重而升高。結(jié)果表明，血清LPS、MMP-2水平與肝細(xì)胞損害程度關(guān)系密切，可作為肝硬化患者病情嚴(yán)重程度的診斷指標(biāo)。臨床上應(yīng)盡早對(duì)肝硬化患者進(jìn)行診斷治療，防止病情進(jìn)一步加重，有效控制并發(fā)癥的發(fā)生。

ROC曲線結(jié)果顯示，血清APN、LPS、MMP-2診斷肝硬化的AUC分別為0.617、0.609和0.708，三者聯(lián)合診斷肝硬化的AUC為0.872。結(jié)果表明，血清APN、LPS及MMP-2 對(duì)肝硬化診斷、治療及預(yù)后有一定價(jià)值，三者聯(lián)合診斷較單一指標(biāo)檢測(cè)效果更好，具有更高的臨床價(jià)值。

綜上所述，肝硬化患者血清APN、LPS及MMP-2水平顯著升高，且APN、LPS及MMP-2 對(duì)肝硬化診斷、治療和預(yù)后有一定價(jià)值，三者聯(lián)合診斷肝硬化具有更高的臨床價(jià)值。