牙齦卟啉單胞菌檢測在食管鱗癌診斷及預后評估中的應用

馬立宇 李銳鋒 位俊敏

食管癌屬于1種惡性腫瘤，在臨床較為常見，位居第八位，在癌癥死因中位居第六位，亞洲是高發(fā)地區(qū)，中國是高發(fā)國家[1-2]。食管癌主要有鱗癌、腺癌兩種組織學亞型，臨床較難早期診斷，患者具有較高的病死率[3]。本研究探討了牙齦卟啉單胞菌檢測在食管鱗癌診斷及預后評估中的應用。

1 材料與方法

1.1 一般資料

隨機選取2016年6月至2018年4月我院內科食管鱗癌患者43例，另取和癌組織相距至少3 cm的相應癌旁組織，另取胃鏡檢查時的正常食管粘膜組織活檢標本40例。

1.2 納入和排除標準

納入標準：①均接受手術治療；②均經病理學檢查確診為食管鱗癌；③均知情同意。排除標準：①術前接受放化療治療；②有手術禁忌癥；③具有模糊的意識。

1.3 方法

連續(xù)切片，厚度為4 μm，采用福州邁新公司生產的SP超敏免疫組織化學試劑盒進行免疫組織化學SP法染色，應用美國路易斯維爾大學實驗室提供的兔抗人PG蛋白多克隆抗體對PG感染進行檢測。將陰性對照設定為正常鼠IgG、抗兔IgG。稀釋PG原始抗體濃度為1∶1000。

1.4 觀察指標

依據陽性細胞百分率對結果進行評定，0～9%、10%～29%、30%～59%、60%～100%分別評定為0分、1分、2分、3分。PG染色陽性的標準為評分≥2分[3]。

1.5 統(tǒng)計學分析

計數(shù)資料用率表示，用χ2檢驗。用Kaplan-Meier法進行生存分析，用Log-rank檢驗，用COX回歸分析生存狀態(tài)影響因素。采用SPSS 21.0，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 不同組織中PG蛋白表達比較

食管鱗癌組織中PG蛋白表達陽性率[58.1%(25/43)]均顯著高于食管鱗癌旁組織、正常食管粘膜(P<0.05)，食管鱗癌旁組織中PG蛋白表達陽性率[14.0%(6/43)]又均顯著高于正常食管粘膜0(P<0.05)。具體見表1。

表1 不同組織中PG蛋白表達比較(例,%)

2.2 食管鱗癌組織中PG蛋白表達與臨床病理參數(shù)的相關性分析

TNM分期Ⅲ期、有淋巴結轉移患者的食管鱗癌組織中PG蛋白表達陽性率分別顯著高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移患者(P<0.05)，高分化、中分化、低分化患者的食管鱗癌組織中PG蛋白表達陽性率均逐漸升高(P<0.05)，即食管鱗癌組織中PG蛋白表達與TNM分期、淋巴結轉移、分化程度均呈顯著正相關關系(P<0.05)，但不同性別、年齡、吸煙史患者的食管鱗癌組織中PG蛋白表達陽性率之間的差異均不顯著(P>0.05)，即食管鱗癌組織中PG蛋白表達與性別、年齡、吸煙史均無相關性(P>0.05),見表2。

表2 食管鱗癌組織中PG蛋白表達與臨床病理參數(shù)的相關性分析(例,%)

2.3 食管鱗癌組織中不同PG蛋白表達患者的1年生存率比較

食管鱗癌組織中PG蛋白表達陽性患者的1年生存率(44.0%，11/25)顯著低于陰性患者(72.2%,13/18)(P<0.05)。COX回歸多因素分析顯示，食管鱗癌患者累積生存率的獨立預后因素為淋巴結轉移(Wald χ2=9.231，P<0.05)。

3 討論

牙齦卟啉單胞菌是1種非酵解糖的革蘭氏陰性厭氧球桿菌，是研究廣泛且證據充足的重要牙周致病菌之一。牙齦卟啉單胞菌，英文名為 Porphyromonas gingivalis，定義為非酵解糖的革蘭氏陰性厭氧球桿菌，屬于重要牙周致病菌之一。牙齦卟啉單胞菌進入已經患有血管基礎疾病的患者的血液中時，會跟血液中的血小板結合，讓血小板越積越多，形成血栓[4]。當攜帶牙齦卟啉單胞菌的血小板，到了已經存在狹窄的血管，它就會附著在血管壁上，就會使原本已經狹窄的血管堵塞，甚至是完全堵死豐富的革蘭陰性厭氧菌存在于慢性牙周病的微生物群中，其中牙齦卟啉單胞菌(PG)占有重要地位，其屬于一種口腔致病菌，會向上皮細胞侵入，對宿主免疫反應及細胞周期造成干擾[5]。流行病學研究顯示，口腔癌、胰腺癌等一些癌癥與牙齒缺失、牙周病相關[6-7]。PG在口腔鱗癌細胞中能夠為細胞遷移提供良好的前提條件，途徑為將PAR2/NF-kB、p38/HSP27、ERK1/2-Etsl通路激活，進而對MMP-9表達進行誘導[8-9]。由于在組織學上，食管粘膜類似于口腔粘膜，因此相關醫(yī)學學者認為[10]，食管感染可能在口腔疾病的作用下發(fā)生，進而可能引發(fā)食管癌。相關醫(yī)學學者為了對食管粘膜中PG表達與食管鱗癌診斷及預后的相關性進行了解[11]，運用免疫組織化學SP法對食管鱗癌組織、癌旁組織、正常食管粘膜中PG表達進行了檢測，對食管鱗癌臨床特征與PG感染的相關性進行了分析，發(fā)現(xiàn)食管鱗癌組織中PG陽性表達率分別為60%，癌旁組織中PG表達率為15%，正常食管粘膜中PG陽性表達率為0，TNM分期、分化程度、淋巴結轉移均與PG感染呈顯著的正相關關系，以此認為食管鱗癌患者的食管上皮細胞感染PG，同時對食管鱗癌的進展造成了影響，在食管鱗癌的診斷中可能能夠作為一種生物標志物，將口腔病原菌根治可能能夠促進食管鱗癌發(fā)生的減少。

本研究結果表明，食管鱗癌組織中PG蛋白表達陽性率顯著高于食管鱗癌旁組織、正常食管粘膜，食管鱗癌旁組織中PG蛋白表達陽性率又顯著高于正常食管粘膜。TNM分期Ⅲ期、有淋巴結轉移患者的食管鱗癌組織中PG蛋白表達陽性率分別顯著高于TNM分期Ⅰ+Ⅱ期、無淋巴結轉移患者，分化程度高分化、中分化、低分化患者的食管鱗癌組織中PG蛋白表達陽性率均逐漸升高，即食管鱗癌組織中PG蛋白表達與TNM分期、淋巴結轉移、分化程度均呈顯著的正相關關系，食管鱗癌組織中PG蛋白表達呈顯著的正相關關系。食管鱗癌組織中PG蛋白表達陽性患者的12個月生存率分別顯著低于陰性患者。COX回歸多因素分析顯示，食管鱗癌患者累積生存率的獨立預后因素為淋巴結轉移，和上述相關醫(yī)學研究結果一致。

總之，牙齦卟啉單胞菌檢測在食管鱗癌診斷及預后評估中的應用價值高，值得推廣。