CXCL12在多發(fā)性骨髓瘤骨髓中表達(dá)及與預(yù)后的相關(guān)性

李 濤 王化齊 張 廷

多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma，MM)為漿細(xì)胞病的1種，是1種原發(fā)于骨髓的克隆性漿細(xì)胞異常的增殖疾病。該病的發(fā)病率一直位居血液系統(tǒng)惡性腫瘤中第二位[1]。當(dāng)前隨著藥物治療技術(shù)的發(fā)展，多發(fā)性骨髓瘤的死亡率顯著提高，5年生存率在50%左右[2]。不過該病預(yù)后因素復(fù)雜，其臨床表現(xiàn)、療效、生存期具有很大差異，其中細(xì)胞遺傳學(xué)異常與骨髓微環(huán)境改變與患者的預(yù)后顯著相關(guān)[3]。為此找到診斷治療多發(fā)性骨髓瘤的新靶點(diǎn)，尋求更簡單、有效的診療方式，對改善患者預(yù)后具有重要價值[4]。CXC類趨化因子受體(CXCL)12含有4個保守的半胱氨酸，人類CXCL12基因定位于10q[5]。CXCL12在正常組織與異常組織中均有表達(dá)，其在骨髓中可骨髓中各成分相互作用發(fā)揮其生理功能。CXCL12也被稱為基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(SDF)-1是趨化因子的一員，通過與特異性配體CXCR4相互作用，在調(diào)控造血干/祖細(xì)胞遷移、動員、歸巢等方面具有非常重要的作用[6-7]，并且后者的表達(dá)水平與腫瘤局部復(fù)發(fā)、5年存活率、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[8-9]。有研究表明CXCL12參與癌細(xì)胞播散轉(zhuǎn)移的全部過程，阻斷CXCL12信號通路可有效防止惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移[10-11]。本文具體探討了CXCL12在多發(fā)性骨髓瘤骨髓中表達(dá)及與預(yù)后的相關(guān)性，以明確CXCL12的分子靶向與預(yù)后調(diào)控作用?，F(xiàn)總結(jié)報告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對象

2014年2月至2019年1月選擇在榆林市第二醫(yī)院診治的多發(fā)性骨髓瘤骨髓活檢標(biāo)本78例(觀察組)與正常骨髓活檢標(biāo)本78例(其他非腫瘤性疾病需性骨髓檢查的正常骨髓標(biāo)本，對照組)，納入標(biāo)準(zhǔn)：所有觀察組患者都符合多發(fā)性骨髓瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)；有相對完整的臨床及病理資料；所有標(biāo)本均來自我院血液內(nèi)科住院患者；均未進(jìn)行治療的初診患者；年齡20～80歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：合并嚴(yán)重凝血功能障礙、彌散性血管內(nèi)凝血和嚴(yán)重精神病不能配合骨髓活檢者。兩組患者的性別、年齡、體重指數(shù)等對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表1。

表1 兩組一般資料對比

在觀察組78例患者中，輕鏈類型：Κ鏈36例，λ鏈42例；ISS分期：Ⅰ期35例，Ⅱ期25例，Ⅲ期18例；免疫球蛋白分型：IgG54例、IgA4例、輕鏈型20例；危險分型：低危56例，中高危22例。

1.2 骨髓CXCL12表達(dá)檢測

采集所有患者的骨髓4～8 ml于EDTA紫管中，然后加入等量的Ficoll液，形成明顯分界，3 000 rpm/min離心20 min，取中間白色霧層(骨髓單個核細(xì)胞)，采用PBS稀釋，室溫3 000 rpm/min離心10 min，棄上清，收集細(xì)胞沉淀并計數(shù)。采用免疫組化法檢測CXCL12表達(dá)水平，小鼠抗人CXCR12單克隆抗體(abl89048)美國abcam公司。在病理科醫(yī)生指導(dǎo)下隨機(jī)選5個視野觀察著色情況及著色細(xì)胞數(shù)，染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分率計分結(jié)果相加小于2分為陰性，≥2分為陽性。

1.3 預(yù)后隨訪

查看患者既往住院病歷、門診隨訪情況，記錄性別、年齡、體重指數(shù)、輕鏈類型、ISS分期、免疫球蛋白分型、危險分型等資料，同時隨訪患者的生存情況。

1.4 統(tǒng)計方法

應(yīng)用SPSS Statistics 20.00軟件對本研究所有數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，計數(shù)資料則用例數(shù)來表示，對比方法為t檢驗(yàn)與卡方分析等，用COX回歸模型進(jìn)行多因素分析，P<0.05視為具有統(tǒng)計學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 骨髓CXCL12表達(dá)陽性率對比

觀察組的骨髓CXCL12表達(dá)陽性率為85.9%，顯著高于對照組的12.8%(P<0.05)，見表2。

表2 兩組骨髓CXCL12表達(dá)陽性情況對比

2.2 骨髓CXCL12表達(dá)陽性率與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

在78例多發(fā)性骨髓瘤患者中，骨髓CXCL12表達(dá)陽性率與ISS分期、危險分層、輕鏈類型呈正相關(guān)關(guān)系，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，而與性別、年齡、免疫球蛋白分型等無相關(guān)性(P>0.05)，見表3。

表3 多發(fā)性骨髓瘤患者的骨髓CXCL12表達(dá)陽性與臨床病理參數(shù)的關(guān)系(例，%)

2.3 預(yù)后情況

觀察組患者隨訪到2019年8月，死亡病例21例，存活病例57例，死亡率為26.9%。

2.4 影響因素分析

在觀察組中，以預(yù)后死亡作為自變量，以ISS分期、危險分層、輕鏈類型、CXCL12作為自變量納入COX回歸模型。多因素分析結(jié)果顯示，ISS分期、危險分層、輕鏈類型、CXCL12等都是影響多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后死亡的因素(P<0.05)，見表4。

表4 影響多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后死亡的因素

3 討論

多發(fā)性骨髓瘤是最常見血液腫瘤之一，占全部腫瘤的1.5%左右，約占所有血液惡性腫瘤的13%[12]。該病是1種以血尿中大量單克隆免疫球蛋白存在為特點(diǎn)的漿細(xì)胞腫瘤，在臨床上主要表現(xiàn)為感染、高鈣血癥、貧血、骨痛、腎功損害等[13]。當(dāng)前隨著硼替佐米、來那度胺、自體干細(xì)胞移植技術(shù)的發(fā)展，該病患者中位生存年齡顯著提高，但是目前仍不可治愈，因此迫切需要其他新的治療方法改善其預(yù)后[14]。

現(xiàn)代研究顯示多發(fā)性骨髓瘤的瘤細(xì)胞分化、增殖、遷移等生理病理學(xué)特性與所處的骨髓微環(huán)境密切相關(guān)，細(xì)胞生長擴(kuò)張幾乎全在骨髓微龕中，骨髓微環(huán)境由細(xì)胞和非細(xì)胞共同組成[15]。骨髓瘤細(xì)胞也可以表達(dá)和分泌多種粘附分子、細(xì)胞因子，骨髓微環(huán)境也可支持骨髓瘤細(xì)胞的生長、浸潤。同時骨髓是主要的造血器官，多發(fā)性骨髓瘤會影響正常的體內(nèi)平衡，并重塑骨髓微環(huán)境[16]。趨化因子是一大群由機(jī)體內(nèi)間質(zhì)細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等多細(xì)胞分泌的低分子量細(xì)胞因子，與相應(yīng)的趨化因子受體結(jié)合后可參與多種生理和病理過程，比如調(diào)節(jié)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移等[17]。CXCR12是屬于G蛋白偶聯(lián)受體超家族中的1種CXCR類趨化因子受體，其與CXCR4結(jié)合后可使CXCR4結(jié)構(gòu)改變而激活細(xì)胞內(nèi)多種分子信號通路，從而影響腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲等生物學(xué)行為[18]。目前研究表明，CXCR12基因在多種惡性腫瘤組織中呈高表達(dá)狀態(tài)，其表達(dá)與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，且與患者預(yù)后相關(guān)[19-20]。本研究顯示觀察組的骨髓CXCL12表達(dá)陽性率為85.9%，顯著高于對照組的12.8%；在78例多發(fā)性骨髓瘤患者中，的骨髓CXCL12表達(dá)陽性率與ISS分期、危險分層、輕鏈類型呈正相關(guān)關(guān)系，而與性別、年齡、免疫球蛋白分型等無相關(guān)性，表明多發(fā)性骨髓瘤患者中的骨髓CXCL12呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，且與患者的病理特征顯著相關(guān)。

當(dāng)前隨著我國城市化進(jìn)程的加快，多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病率顯著升高[21]。不過該病的增殖與侵襲是一個多步驟、多因素相互作用的復(fù)雜過程，具體的機(jī)制尚不清楚，明確多發(fā)性骨髓瘤的轉(zhuǎn)移與侵襲機(jī)制是當(dāng)前研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)[22]。盡管自體干細(xì)胞移植等治療方法的使用改善了多發(fā)性骨髓瘤患者預(yù)后，但是該病的預(yù)后生存率依然還處于比較低的水平[23]。CXCL12過度表達(dá)可顯著地刺激bFGF、VEGF、SCF等基因和蛋白表達(dá)，顯著促進(jìn)血管生成，進(jìn)而形成了較長的毛細(xì)管狀結(jié)構(gòu)，從而可加速癌細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移，導(dǎo)致預(yù)后變化[24-25]。本研究觀察組患者隨訪到2019年8月，死亡病例21例，存活病例57例，死亡率為26.9%；多因素分析結(jié)果顯示，ISS分期、危險分層、輕鏈類型、CXCL12等都是影響多發(fā)性骨髓瘤預(yù)后死亡的因素，表明CXCL12的表達(dá)可能影響患者的預(yù)后。不過本研究隨訪時間短，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集存在差異，可能也會影響結(jié)果的準(zhǔn)確性，將在后續(xù)研究中深入分析。

總之，多發(fā)性骨髓瘤患者中的骨髓CXCL12呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，且與患者的病理特征顯著相關(guān)，也是影響患者預(yù)后的重要因素。