新生兒缺氧缺血性腦病血清高遷移率族蛋白B1水平及與炎癥反應(yīng)和神經(jīng)損傷的相關(guān)性

王洪蓉，湯晶晶

（寧波市鄞州人民醫(yī)院 兒科 浙江 寧波 315000；2. 寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科 浙江 寧波 315020）

新生兒缺氧缺血性腦病（neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy, HIE）主要由圍生期窒息缺氧引起，可導(dǎo)致新生兒神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙，嚴重者可導(dǎo)致患兒死亡，給社會和家庭帶來沉重負擔。免疫炎癥反應(yīng)在HIE 的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用，炎癥細胞因子由免疫細胞和炎癥細胞產(chǎn)生，具有調(diào)節(jié)細胞功能的作用。研究發(fā)現(xiàn)在HIE 中，炎癥細胞因子白細胞介素-6（interleukin-6, IL-6）、腫瘤壞死因子-ɑ（tumor necrosis factor-ɑ, TNF-ɑ）等可啟動或擴大炎癥反應(yīng)，促進HIE 缺血缺氧導(dǎo)致的神經(jīng)損傷[1-2]。高遷移率族蛋白B1（high mobility group protein B1, HMGB1）為一種重要的炎癥介質(zhì)，在多種炎癥免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用[3-4]。但HMGB1 在HIE 炎癥反應(yīng)中的作用尚不清楚，本文研究HIE 新生兒血清HMGB1 水平及其與炎癥細胞因子（IL-6、TNF-ɑ）及反映腦損傷程度指標[神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase,NSE）、S100B 蛋白]的相關(guān)性，探討HMGB1 在HIE中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2008年1月—2018年12月寧波市鄞州人民醫(yī)院和寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科收治的120 例HIE 新生兒作為HIE 組，另取同期本院健康新生兒120 例作為對照組。HIE 新生兒根據(jù)嚴重程度分為輕度61 例，中度39 例，重度20 例。本研究經(jīng)寧波市鄞州人民醫(yī)院倫理委員會審批通過。

診斷標準： HIE 診斷和分度依據(jù)2005 中華醫(yī)學(xué)會兒科學(xué)分會新生兒學(xué)組制定的《新生兒缺氧缺血性腦病診斷標準》[5]。

納入標準： 母親孕前身體健康，新生兒體重2 500～4 000 g，胎齡37～41 周，資料完整，家屬均簽署知情同意書。

排除標準： 排除妊娠期高血壓疾病、妊娠期糖尿病、妊娠期感染性疾病等可能影響新生兒HMGB1 水平的母親產(chǎn)科疾病者，先天性心臟病者，中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育畸形者，新生兒呼吸系統(tǒng)疾病者，新生兒寒冷損傷綜合征者，遺傳代謝性疾病者，新生兒感染性疾病者。

1.2 研究方法

采集HIE 新生兒入院當日（出生后0～3 d）及對照組新生兒（0～3 d）股靜脈血2 ml，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）測定血清HMGB1、IL-6、TNF-α及S100B 水平[試劑盒購自奧林巴斯（中國）有限公司、上海科順生物科技有限公司]，采用電化學(xué)發(fā)光免疫法測定NSE 水平[試劑盒購自奧林巴斯（中國）有限公司、上海滬震實業(yè)有限公司]。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 20.0 統(tǒng)計軟件。計量資料以均數(shù)±標準差（±s）表示，比較用t檢驗或方差分析，進一步兩兩比較用LSD-t檢驗；相關(guān)分析用Pearson法，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組臨床資料比較

對照組和HIE 組新生兒性別、出生體重、日齡、胎齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

2.2 兩組血清HMGB1、IL-6、TNF-α、NSE、S100B 水平比較

兩組血清HMGB1、IL-6、TNF-α、NSE、S100B水平比較，經(jīng)t檢驗，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），HIE 組高于對照組。見表2。

2.3 不同嚴重程度HIE 患兒血清HMGB1、IL-6、TNF-α、NSE、S100B 水平比較

不同嚴重程度HIE 患兒血清HMGB1、IL-6、TNF-α、NSE、S100B 水平比較，經(jīng)方差分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。中度和重度HIE 患兒血清HMGB1、IL-6、TNF-α、NSE、S100B 水平高于輕度（P＜0.05），重度HIE 患兒血清HMGB1、IL-6、TNF-α、NSE、S100B 水平高于中度（P＜0.05）。見表3。

2.4 HIE患兒血清HMGB1 與IL-6、TNF-α、NSE、S100B 的相關(guān)性

HIE患兒血清HMGB1 與IL-6、TNF-α、NSE及S100B 呈正相關(guān)（P＜0.05）。見圖1和表4。

表1 兩組臨床資料比較 （n =120）

表2 兩組血清HMGB1、IL-6、TNF-α、NSE、S100B 水平比較 （n =120，±s）

表2 兩組血清HMGB1、IL-6、TNF-α、NSE、S100B 水平比較 （n =120，±s）

組別 HMGB1/（ng/ml） IL-6/（ng/L） TNF-α/（ng/L） NSE/（μg/L） S100B/（μg/L）對照組 11.35±0.24 52.12±11.17 117.49±23.61 9.46±2.53 0.28±0.07 HIE 組 14.87±0.32 73.68±13.13 168.67±24.45 28.49±2.74 0.75±0.12 t 值 96.399 13.701 16.495 55.897 37.060 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

表3 不同嚴重程度HIE 患兒血清HMGB1、IL-6、TNF-α、NSE、S100B 水平比較 （±s）

表3 不同嚴重程度HIE 患兒血清HMGB1、IL-6、TNF-α、NSE、S100B 水平比較 （±s）

注： ①與輕度組比較，P ＜0.05；②與中度組比較，P ＜0.05。

組別 n HMGB1/（ng/ml） IL-6/（ng/L） TNF-α/（ng/L） NSE/（μg/L） S100B/（μg/L）輕度 61 13.02±0.31 63.48±12.35 144.16±25.62 21.35±2.36 0.53±0.10中度 39 15.13±0.28① 75.64±13.67① 166.19±22.37① 29.73±2.82① 0.77±0.13①重度 20 17.94±0.36①② 86.18±11.06①② 181.06±26.49①② 34.76±3.02①② 0.91±0.15①②F 值 2013.154 28.003 20.308 244.57 95.908 P 值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000

圖1 HIE 患兒血清HMGB1 與IL-6、TNF-α、NSE、S100B 的相關(guān)性

表4 HIE 患兒血清HMGB1 與IL-6、TNF-α、NSE、S100B 的相關(guān)性

3 討論

HIE 新生兒血腦屏障通透性增加，導(dǎo)致血清中炎癥細胞因子水平升高，檢測HIE 新生兒血清炎癥細胞因子水平可用于評估患兒腦損傷程度。IL-6、TNF-α 為常用的炎癥細胞因子，在HIE 新生兒病情評估中具有重要意義。IL-6 具有調(diào)節(jié)機體免疫應(yīng)答和抗損傷的作用，在維持腦細胞正常生理功能中發(fā)揮重要作用[6]；IL-6 在正常新生兒腦組織中含量較低，當腦組織發(fā)生缺血缺氧損傷時，IL-6 升高，且和其他炎癥細胞因子協(xié)同作用，共同參與缺血缺氧性腦損傷的病理過程，加重腦組織炎癥反應(yīng)[7-8]。TNF-α 由星型細胞和小膠質(zhì)細胞合成[9]，星型細胞和小膠質(zhì)細胞均為重要的神經(jīng)膠質(zhì)細胞，在腦組織免疫調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。這2 種細胞未受外來刺激時處于靜止狀態(tài)，當腦組織受到損傷時這2 種膠質(zhì)細胞體積增大，轉(zhuǎn)化為有活性的膠質(zhì)細胞；當腦組織受缺血缺氧損傷后可刺激膠質(zhì)細胞增加TNF-α 的合成和釋放；TNF-α可誘導(dǎo)合成急性期反應(yīng)蛋白，促進炎癥細胞產(chǎn)生，造成腦組織損傷[10-11]。

HMGB1 為一種炎癥介質(zhì)，可在細胞核和細胞質(zhì)之間穿梭，細胞核中的HMGB1 參與維持染色體的穩(wěn)定，參與DNA 修復(fù)、重組、復(fù)制、基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)[12-13]。細胞核中乙酰化HMGB1 轉(zhuǎn)移到細胞質(zhì)后，可促進血小板活化、促進神經(jīng)軸突生長，還可調(diào)節(jié)機體固有免疫功能[14]。HMGB1 在多種炎癥性疾病的發(fā)病過程中發(fā)揮促炎因子作用，在炎癥性疾病中，中性粒細胞、單核細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞等免疫細胞均可分泌HMGB1，HMGB1 通過招募相關(guān)的炎癥因子啟動機體免疫炎癥反應(yīng)[15-17]。HMGB1 在HIE 新生兒血清中的水平及與其他炎癥細胞因子水平、腦損傷的關(guān)系尚不清楚。本文對其進行研究，發(fā)現(xiàn)HIE 新生兒血清HMGB1 水平升高，隨著HIE 病情嚴重程度的增加，血清HMGB1 呈升高趨勢；血清HMGB1 與IL-6、TNF-α、NSE、S100B 呈正相關(guān)。IL-6、TNF-α 為HIE 常用的炎癥細胞因子，可反映機體炎癥反應(yīng)狀態(tài)。本研究中HMGB1 水平升高，與IL-6、TNF-α 呈正相關(guān)，表明HMGB1 可能通過與IL-6、TNF-α 相互作用，參與HIE 的發(fā)生、發(fā)展過程。分析在HIE 發(fā)病過程中，腦組織受缺血缺氧損傷后可刺激膠質(zhì)細胞增加IL-6、TNF-α 等炎癥細胞因子的分泌和釋放，導(dǎo)致IL-6、TNF-α 等炎癥細胞因子水平升高；同時炎癥細胞也分泌HMGB1，導(dǎo)致HMGB1 水平升高，IL-6、TNF-α 和HMGB1 相互作用造成腦組織損傷。檢測血清HMGB1 水平可反映HIE 新生兒機體炎癥反應(yīng)程度和病情嚴重程度。NSE、S100B 為常用的腦損傷指標，可反映腦損傷的嚴重程度[18-19]，HMGB1 與NSE、S100B 呈正相關(guān)表明檢測血清HMGB1 水平可反映HIE 新生兒腦損傷的嚴重程度。HMGB1 作為促炎因子，在HIE 發(fā)病中促進炎癥反應(yīng)的發(fā)生，炎癥反應(yīng)可導(dǎo)致腦損傷，炎癥反應(yīng)程度越重對腦損傷的影響越大，HMGB1 水平越高表示炎癥反應(yīng)程度越高，對腦組織的損害越大。

綜上所述，HIE 新生兒血清HMGB1 水平升高，檢測血清HMGB1 水平在評估病情嚴重程度、炎癥反應(yīng)程度、腦損傷嚴重程度方面具有一定價值。