早期肺腺癌中TGF-β1、p53、E-cadherin的表達(dá)及其相關(guān)性

仲 林，關(guān)宏偉，張朋新，馮 璐，祁文靜

2011年肺腺癌多學(xué)科分類共識(shí)意見重新定義原位腺癌、微浸潤性腺癌和附壁生長為主型的浸潤性腺癌(lepidic predominant adenocarcinoma, LPA)的病理類型[1]。然而在臨床上的特殊組織學(xué)特征的不典型腺瘤樣增生(atypical adenomatous hyperplasia, AAH)及微浸潤性腺癌給病理醫(yī)師的診斷帶來較大困擾。因此，探討早期肺腺癌的分子生物學(xué)特征具有重要意義。轉(zhuǎn)化生長因子-β1(transforming growth factor-β1, TGF-β1)是多功能的細(xì)胞因子，在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[2]。p53是重要的抑癌基因，其功能喪失是惡性腫瘤發(fā)生的重要基礎(chǔ)[3]。E-cadherin是重要的黏附分子，是上皮-間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化中的重要信號(hào)標(biāo)志[4]。本文著重探討TGF-β1、p53、E-cadherin蛋白在早期肺腺癌中的表達(dá)及其相關(guān)性，為早期肺腺癌的臨床診斷、治療提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2012年9月～2013年12月大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院手術(shù)切除的肺部腫瘤標(biāo)本97例，其中男性23例，女性74例，年齡48～76歲，平均(58.65±9.57)歲，腫瘤直徑5～20 cm，平均(8.82±4.38) cm。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有病理切片均經(jīng)高年資病理醫(yī)師確診；(2)患者首次發(fā)病，臨床資料完整；(3)患者術(shù)前未行放、化療等，未服用免疫制劑。按2011年肺腺癌系統(tǒng)分類標(biāo)準(zhǔn)將其分為AAH 16例、原位腺癌33例、微浸潤性腺癌22例、LPA 26例。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)我院倫理委員會(huì)同意，患者及家屬均簽署知情同意書。

1.2 方法應(yīng)用免疫組化MaxVision法對(duì)組織中TGF-β1、p53、E-cadherin蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測(cè)，免疫組化試劑盒購自福州邁新公司，鼠抗人TGF-β1、p53、E-cadherin多克隆抗體均購自北京中杉金橋公司。所有標(biāo)本均4 μm厚連續(xù)切片，經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，自來水沖洗，PBS清洗，高溫高壓抗原修復(fù)，3%過氧化氫甲醇消化內(nèi)源性過氧化物酶，加入山羊血清進(jìn)行封閉，滴加生物學(xué)一抗，室溫孵育60 min，PBS清洗，滴加生物學(xué)二抗，室溫孵育15 min，PBS清洗，DAB顯色、蘇木精復(fù)染、梯度乙醇脫水，制片封閉等。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，以試劑盒說明書提供樣本作為陽性對(duì)照，鏡下觀察。

1.3 結(jié)果判定TGF-β1陽性定位于細(xì)胞質(zhì)，p53陽性定位于細(xì)胞核，E-cadherin陽性定位于細(xì)胞膜，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計(jì)分[5]。(1)按細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分：未著色為0分，淺黃色為1分，棕黃色為2分，黃褐色為3分；(2)按陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)計(jì)分：無陽性細(xì)胞為0分，1%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，76%～100%為4分；將兩項(xiàng)得分結(jié)果相乘：總分≤3分為(-)，>3分為(+)。

2 結(jié)果

2.1 AAH、原位腺癌、微浸潤性腺癌及LPA中TGF-β1、p53、E-cadherin的表達(dá)在早期肺腺癌中隨組織病理學(xué)分級(jí)增高TGF-β1、p53蛋白陽性率升高，E-cadherin蛋白陽性率降低，TGF-β1、p53、E-cadherin在AAH、原位腺癌、微浸潤性腺癌及LPA中的陽性率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表1)。

2.2 微浸潤性腺癌、LPA中浸潤成分和非浸潤成分TGF-β1、p53、E-cadherin的表達(dá)在微浸潤性腺癌及LPA浸潤成分中TGF-β1、p53陽性率高于非浸潤成分，E-cadherin陽性率低于非浸潤成分(P<0.05，表2、3，圖1～6)。

①②③④⑤⑥

表1 AAH、原位腺癌、微浸潤性腺癌及LPA中TGF-β1、p53、E-cadherin的表達(dá)[n(%)]

表2 微浸潤性腺癌中浸潤成分和非浸潤成分中TGF-β1、p53、E-cadherin的表達(dá)[n(%)]

表3 LPA中浸潤成分和非浸潤成分TGF-β1、p53、E-cadherin的表達(dá)[n(%)]

2.3 早期肺腺癌中TGF-β1、p53、E-cadherin表達(dá)的相關(guān)性Spearman相關(guān)分析顯示，在AAH、原位腺癌中TGF-β1與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.673，rs=-0.608，P=0.008，P=0.012)；在微浸潤性腺癌和LPA非浸潤成分中TGF-β1與E-cadherin表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.508，rs=-0.467，P=0.017,P=0.022)。

3 討論

目前，對(duì)肺腺癌多學(xué)科分類共識(shí)意見中形態(tài)學(xué)改變和分子生物學(xué)指標(biāo)的研究十分有限。本實(shí)驗(yàn)對(duì)各組TGF-β1、p53、E-cadherin蛋白表達(dá)進(jìn)行分析。TGF-β1在調(diào)控細(xì)胞增殖、分化、凋亡和組織修復(fù)中起重要作用[6]。Sakai等[7]報(bào)道顯示，在非小細(xì)胞肺癌患者中TNM分期較晚的患者血清TGF-β1水平較高，預(yù)后較差。石丹等[8]報(bào)道TGF-β1高表達(dá)可以增加肺癌細(xì)胞的遷移能力，腫瘤浸潤性較高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在早期肺腺癌中隨著組織病理學(xué)分級(jí)增高TGF-β1蛋白陽性率升高，與Sakai等報(bào)道相符。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在微浸潤性腺癌及LPA非浸潤成分中TGF-β1陽性率也高于AAH、原位腺癌，提示TGF-β1上調(diào)可能早于形態(tài)學(xué)中腫瘤細(xì)胞浸潤和破壞肺泡壁。p53是重要的抑癌基因，對(duì)細(xì)胞分裂起監(jiān)控作用[9]。當(dāng)p53基因發(fā)生突變后可以導(dǎo)致細(xì)胞惡變。本實(shí)驗(yàn)p53蛋白隨組織病理學(xué)分級(jí)增高，其陽性率升高；在微浸潤性腺癌及LPA中浸潤成分p53陽性率顯著高于非浸潤成分,提示p53突變蛋白參與原位腺癌發(fā)展為微浸潤性腺癌的過程，同時(shí)p53突變也促進(jìn)早期肺腺癌的浸潤過程。E-cadherin是上皮細(xì)胞間的黏附分子，可保持上皮細(xì)胞間的同質(zhì)黏附作用。研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌、乳腺癌中存在E-cadherin的低表達(dá)[10]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，在早期肺腺癌中E-cadherin蛋白隨組織病理學(xué)分級(jí)的增高，其陽性率降低；在微浸潤性腺癌及LPA的浸潤成分中E-cadherin陽性率低于非浸潤成分。推測(cè)E-cadherin表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞間連接降低，肺上皮細(xì)胞發(fā)生癌變，并促進(jìn)癌細(xì)胞浸潤。通過相關(guān)性分析，作者認(rèn)為TGF-β1與E-cadherin可能存在共同的調(diào)控通路，促進(jìn)早期肺腺癌的發(fā)生、發(fā)展，其確切關(guān)系有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。臨床通過對(duì)早期肺腺癌TGF-β1、p53、E-cadherin的檢測(cè)，也可以為肺腺癌的分型、預(yù)后判斷提供依據(jù)。

綜上所述，早期肺腺癌中TGF-β1、p53蛋白隨組織病理學(xué)分級(jí)增高，其陽性率升高；而E-cadherin蛋白陽性率降低，在微浸潤性腺癌及LPA浸潤成分中TGF-β1、p53陽性率高于非浸潤成分，E-cadherin陽性率低于非浸潤成分，三者參與早期肺腺癌的發(fā)生和浸潤。