肺腺癌中C-met和Cox-2的表達及預后意義

李雄峰，郗彥鳳，史玉潔，魏晶晶

肺癌的發(fā)病率和病死率位居惡性腫瘤之首，其中80%～85%為非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)，而肺腺癌占40%[1]，大多數(shù)患者就診時已處中晚期。國內(nèi)外對于肺癌發(fā)展及預后的相關影響因素已進行廣泛研究，以往研究報道顯示，C-met信號通路和環(huán)氧化酶2(Cox-2)參與了腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。目前國內(nèi)對于C-met、Cox-2在其他腫瘤中的研究較多，但關于肺癌中C-met及Cox-2的相關研究較少，尤其是肺腺癌。為進一步探究肺腺癌的發(fā)生機制，本實驗主要探討肺腺癌中C-met和Cox-2的表達并分析兩者表達的相關性及對患者預后的影響，以期為臨床治療和評估預后提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料選取2012年1月～2013年1月山西省腫瘤醫(yī)院病理科確診且具有完整臨床病理資料的肺腺癌140例，其中男性61例，女性79例；年齡28～77歲，平均54.3歲；有吸煙史者56例，無吸煙史者84例；有淋巴結轉移者58例，無淋巴結轉移者82例；病理分級：Ⅰ+Ⅱ級46例，Ⅲ+Ⅳ級94例；按第7版國際肺癌pTNM分期標準：T1+T2期63例，T3+T4期77例。隨訪時間截至2017年1月，或由于復發(fā)、轉移及其他原因導致的死亡日期為止。

1.2 方法所有病例均經(jīng)兩位經(jīng)驗豐富的病理醫(yī)師共同確診，遇有意見分歧的病例協(xié)商討論后最后確定。免疫組化染色采用EnVision兩步法，每例標本3 μm厚切片，經(jīng)常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水洗滌、高壓鍋抗原修復、用3%H2O2封閉阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，加一抗4 ℃過夜，二抗孵育、經(jīng)PAS沖洗、DAB顯色、蘇木精復染、1%鹽酸乙醇數(shù)秒分化、梯度乙醇脫水、二甲苯透明封固。陽性對照采用淋巴結切片，陰性對照用PAS替代一抗。C-met兔抗人單抗和Cox-2兔抗人單抗均購自北京中杉金橋公司。

1.3 結果判讀C-met蛋白表達定位于細胞膜或細胞質，呈棕黃色，C-met免疫組化評分標準[2]：腫瘤細胞染色結果依據(jù)染色強度及范圍分為0～3分，即無反應或<10%的腫瘤細胞出現(xiàn)細胞膜反應為0分,≥10%的腫瘤細胞出現(xiàn)微弱/難以察覺的細胞膜反應或細胞的部分細胞膜有反應為1分，≥10%的腫瘤細胞出現(xiàn)微弱至中等強度的完整、基底側或側膜反應為2分,≥10%的腫瘤細胞出現(xiàn)高強度的完整、基底外側或側膜反應為3分。其中0～1分為低表達組，2～3分為高表達組。Cox-2表達定位于細胞質，呈棕黃色至深棕黃色，若只有細胞核著色，細胞質不著色或細胞核、細胞質均不著色定義為陰性。

1.4 統(tǒng)計學分析采用SPSS 22.0軟件進行統(tǒng)計學分析，以χ2檢驗和Fisher確切概率法分析C-met和Cox-2表達與肺腺癌臨床病理特征的關系，相關性分析采用Spearman等級相關分析法，Kaplan-Meier生存曲線法描述患者的生存狀態(tài)，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 肺腺癌中C-met和Cox-2的表達與臨床病理特征的關系140例肺腺癌中，C-met高表達31例(22.1%)(圖1、2)，C-met高表達與淋巴結轉移、病理分級、臨床分期有關(P<0.05)，與患者性別、吸煙史、年齡無關(P>0.05，表1)。140例肺腺癌中，Cox-2陽性86例(61.4%)(圖3)，Cox-2表達與吸煙史、淋巴結轉移、病理分級、臨床分期有關(P<0.05)，與患者性別、年齡無關(P>0.05，表1)。

①②③

表1 肺腺癌中C-met和Cox-2蛋白表達與臨床病理特征的關系

2.2 肺腺癌中C-met和Cox-2表達的相關性統(tǒng)計分析結果顯示，肺腺癌中C-met和Cox-2的表達無相關性(rs=-0.143，P=0.092，表2)。

表2 肺腺癌中C-met和Cox-2表達的相關性

2.3 C-met、Cox-2表達與肺腺癌患者預后的關系140例肺腺癌患者Kaplan-Meier生存曲線表明，C-met低表達組者總生存期高于C-met高表達組，Cox-2陰性組的總生存期高于陽性組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05，圖4、5)。Cox多因素分析表明，肺腺癌病理分級、臨床分期、C-met高表達及Cox-2陽性為影響患者預后的獨立危險因素。

3 討論

肺癌具有發(fā)病隱匿，癥狀不明顯，病死率高等特點，病理分型常被作為預測治療效果的重要指標。隨著人類對肺癌研究的推進，對相關腫瘤標志物的作用認識逐漸清晰，研究相關腫瘤標志物可以更好的為治療提供依據(jù)，評估預后，而對于患者而言，治療重點在于延長生存期，因而提高患者生存期就成為臨床醫(yī)師越來越關注的焦點。

圖4 C-met表達與肺腺癌患者總生存期的關系

圖5 Cox-2表達與肺腺癌患者總生存期的關系

C-met作為Met家族成員，屬于酪氨酸激酶受體，表達于各種上皮細胞的表面[3]，在正常生理狀態(tài)下，C-met可以調節(jié)胚胎生長，促進組織再生及生長愈合；但在病理狀態(tài)下，C-met可以促進癌細胞增殖，阻止凋亡，促進多種類型腫瘤(如肝癌、結直腸癌、乳腺癌、肺癌等)的進展[4]。Tretiakova等[5]研究發(fā)現(xiàn)C-met在NSCLC中高表達，本組中C-met高表達率為22.1%，與Tretiakova等的研究結果相近。本實驗發(fā)現(xiàn)，C-met高表達與淋巴結轉移、病理分級、臨床分期有關(P<0.05)，與患者性別、吸煙史、年齡等無關。艾婷等[6]認為C-met蛋白表達與病理分級之外的其他病理特征均無關，導致結果不同的原因可能與各實驗使用的檢測方法或采用的檢測試劑不同及判讀差異等影響因素有關，而最重要的原因可能是HGF/C-met信號通路在腫瘤細胞進行轉錄及翻譯過程中受其他信號通路(如KRAS-MAPK信號通路)或其他基因(如T790M)的作用有關，該信號通路同樣可以促進腫瘤細胞增殖、轉移，在信號傳導過程中可能與HGF/C-met信號通路競爭細胞膜內(nèi)相應的酪氨酸激酶區(qū)域。C-met高表達患者的總生存期低于低表達患者，分析可能原因：C-met具有誘導血管生成的功能，可以增加腫瘤的惡性程度，從而使腫瘤更易發(fā)生侵襲和轉移，導致預后差。因此C-met高表達患者提示預后不良，可作為判斷預后的一個指標，早期檢測C-met蛋白表達狀態(tài)可以為臨床治療提供更多的參考。

Cox-2作為一種可誘導的環(huán)氧合酶，是前列腺素生產(chǎn)過程中的重要限速酶，其蛋白的誘導表達可增加前列腺素的產(chǎn)生和分泌[7]，進而激活生長通路，抑制細胞凋亡通路。通過回顧性分析，Cox-2在大量腫瘤基因中處于高表達狀態(tài)，如鄭玲玲等[8]發(fā)現(xiàn)，乳腺癌中Cox-2陽性率高達71.43%，有助于腫瘤的形成和生長。Cox-2在30%的良性息肉和80%～85%的腺癌中過表達[7,9]。本實驗中Cox-2的陽性率為61.4%，低于Ranjbar等[9]的結果，分析原因可能為：(1)本組樣本數(shù)量較少缺乏大數(shù)據(jù)分析，結果波動幅度較大；(2)采用的試劑不同及診斷醫(yī)師主觀分析差異等所致。盡管研究結果已表明，Cox-2表達在肺癌的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮著重要作用，然而Cox-2在NSCLC中的表達及對其發(fā)生、發(fā)展和預后的影響卻存在很多爭議[10-11]。本實驗結果顯示，Cox-2表達與肺腺癌患者吸煙史、淋巴結轉移、病理分級、臨床分期有關，Cox-2陰性者的總生存期高于陽性者，與費賢樹等[12]的研究結果相似；提示隨著病程的延長，病理分級及臨床分期越高，Cox-2蛋白陽性程度越高，Cox-2可能具有促進腫瘤細胞增殖轉化，提高腫瘤細胞侵襲的能力，參與肺癌進程的發(fā)展。Turk等[13]研究發(fā)現(xiàn)肺腺癌中Cox-2的陽性率為55%，Cox-2表達與臨床分期、組織類型、生存率之間無顯著相關性，Cox-2表達非肺癌患者預后評估的指標。孫曉艷等[14]研究表明Cox-2蛋白在NSCLC中高表達，影響因素可能為病理類型及淋巴結轉移。Jiang等[15]分析顯示，Cox-2蛋白表達是NSCLC的預后因素且與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及預后有關。這些不同的研究結果表明，Cox-2在NSCLC中發(fā)揮的具體作用還存在很大的不確定性，仍需要更多研究者繼續(xù)深入探究。

以往薈萃分析表明，C-met和Cox-2在乳腺癌和胃癌等多數(shù)腫瘤中具有相互作用。Kuang等[16]研究證實C-met可以誘導Cox-2表達的增加從而參與乳腺癌的發(fā)生。Chen等[17]認為在治療胃癌時可根據(jù)腫瘤細胞中C-met的表達水平來評估Cox-2抑制劑用量的標準。這些研究結果均表明，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程中，C-met和Cox-2之間具有相互作用。同理類推，在肺癌中，C-met和Cox-2之間也應該存在某種關系，本組Spearman相關性分析顯示，C-met與Cox-2蛋白表達無相關性(rs=-0.143，P=0.092)。分析原因可能為本實驗樣本量較少，導致結果有一定偏移；不同實驗組采用的研究方法和判讀標準的不同也會導致誤差結果的出現(xiàn)，更深入的原因可能為HGF/C-met信號通路的激活途徑與Cox-2蛋白誘導所致的生長通路的激活方式不同有關。關于肺腺癌中C-met和Cox-2的相關性仍需更多實驗數(shù)據(jù)的進一步論證。受實驗條件限制，本組實驗尚未分析兩種蛋白在基因表達層面的關系，有待后續(xù)通過分子檢測進一步完善資料。

綜上所述，C-met和Cox-2在肺腺癌中具有一定的作用，盡管本實驗未發(fā)現(xiàn)兩者表達的相關性，但單從各個基因來看，其表達通常提示預后較差，因此作者建議要盡早同時檢測C-met和Cox-2的表達，評估患者預后，從而為肺腺癌患者治療提供更多的理論依據(jù)和臨床選擇。