銀川市興慶區(qū)漢、回族新生兒常見耳聾基因突變特點研究*

顧潔 王寶珍 趙娟萍 陳璠 王楊 任雪琴

引起耳聾的因素有很多，其中遺傳因素是最主要的致聾原因，約占60%，包括常染色體隱/顯性遺傳、X-連鎖顯/隱性遺傳、線粒體母系遺傳[1]。截止目前，已發(fā)現超過200個基因與耳聾相關[1，2]。流行病學調查發(fā)現GJB2、SLC26A4、mtDNA12SrRNA等基因為中國人群常見致聾基因[2]，但不同地區(qū)、不同種族人群攜帶的熱點突變存在差異[3，4]，通過大量開展耳聾基因篩查，分析不同地域、民族耳聾基因突變位點特點，對當地政府制定有效的耳聾預防、干預措施具有指導作用。

寧夏回族自治區(qū)地處西北半干旱地區(qū)，同時也是我國主要的少數民族(回族)聚集區(qū)，為初步了解該地區(qū)的常見耳聾基因突變位點分布特征，本研究采用微陣列基因芯片技術，對銀川市興慶區(qū)近年來出生的漢、回族新生兒開展4個常見遺傳性耳聾基因15個熱點突變檢測，報告如下。

1 資料與方法

1.1研究對象 選擇2018年3月21日至2019年4月29日期間出生于銀川市婦幼保健院、銀川市第一人民醫(yī)院、寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院、銀川市第三人民醫(yī)院等銀川市興慶區(qū)十二家助產機構的5 579例新生兒為研究對象，其中漢族4 712例，回族867例，男2 838例，女2 741例。對家屬和產婦進行知情告知，并簽署知情同意書。

1.2研究方法

1.2.1血液樣本以及新生兒信息采集 新生兒出生48～72小時后，采集足跟血制成含有三個直徑大于8 mm血斑的干血片，由采血人員填寫新生兒信息，包括母親姓名、聯系方式、新生兒出生日期、性別、民族。

干血片自然晾干后獨立密封包裝，保存于2～8 ℃冰箱中。如母親患有肝炎、梅毒、艾滋病者，血斑標本單獨晾干、并標記疾病名稱、單獨塑料袋密封包裝。運送至寧夏長生醫(yī)院(血片集中點)，由專人對血片進行驗收，對不合格的樣本退回重新采集。驗收合格血片當日運送至銀川市婦幼保健院遺傳學實驗室進行檢測。

1.2.2遺傳性耳聾基因檢測方法 打血斑以及核酸提?。河么蚩灼髟跒V紙干血斑標本上打取1個直徑6 mm的干血斑，采用博奧生物干血斑基因組DNA提取試劑盒(產品編號：DP334)進行核酸提取，具體操作參照《干血斑基因組 DNA 提取標準操作規(guī)程》。采用賽默飛公司的Nanodrop對提取的DNA進行濃度測定，被檢基因組DNA需滿足濃度為5～25 μg/ul，OD260/OD280為1.8～2.0。

耳聾基因檢測：本研究采用耳聾基因微陣列芯片法(晶芯十五項遺傳性耳聾基因檢測劑盒，北京博奧晶典生物技術有限公司)對4個常見耳聾基因15個熱點突變位點進行檢測，即GJB2基因的c.35 del G、c.176 del 16、c.235 del C和c.299～300 del AT 4個位點，GJB3基因的 c.538 C > T 位點，SLC26A4 基因的 c.2168 A > G、c.1174 A > T、c.1226 G > A、c.1229 C > T、c.1975 G > C 、c.2027 T > A、c.1707+5G>A和c.919-2 A>G，mtDNA12SrRNA基因的m.1494 C > T和m.1555 A > G。采用激光共聚焦技術(晶芯LuxScanTM10K/B微陣列芯片掃描儀，北京博奧晶典生物技術有限公司)和檢測芯片判別系統(晶芯十五項遺傳性耳聾基因檢測芯片判別系統)進行檢測結果的掃描判讀，具體操作參考《晶芯十五項遺傳性耳聾相關基因檢測試劑盒(微陣列芯片法)標準操作規(guī)程》。

1.3統計學方法 采用SPSS19.0軟件進行統計分析，組間比較采用Pearson 卡方檢驗或Fisher確切概率法檢驗，檢驗水準α= 0.05。

2 結果

2.14個耳聾基因15個突變位點總體分布 5 579例新生兒中，255例攜帶遺傳性耳聾基因位點突變，攜帶率為4.57%(255/5 579)，其中GJB2基因雜合突變115例，突變率為2.06%，GJB3基因突變9例，突變率為0.16%；SLC26A4基因位點雜合突變115例，突變率為2.06%，mtDNA12SrRNA基因1555異質突變12例，突變率為0.22%；雙基因雜合突變4例，占0.07%(表1)。

2.24個耳聾基因突變在回、漢民族新生兒中的檢出率 5 579例新生兒中，漢族攜帶4個常見耳聾基因位點突變192例，總檢出率4.07%(192/4 712)；回族攜帶4個常見耳聾基因位點突變63例，總檢出率7.27%(63/867)，前者低于后者，差異有統計學意義(χ2= 18.69，P=0.001)(表2)。

表2 回、漢族新生兒4個耳聾基因突變檢出率分布

2.3漢、回族新生兒4個耳聾基因突變位點分布 由表3可見，GJB2基因的c.176 del 16，c.235 del C、c.299 del AT突變位點，SLC26A4基因c.2168 A >G、c.919-2 A >G突變位點以及mtDNA12SrRNA基因的m.1555 A >G突變位點在漢族、回族人群中的攜帶率差異有統計學意義(P<0.05)。

表3 耳聾基因突變位點在回、漢民族中的分布(例，%)

3 討論

耳聾的原因復雜，其中遺傳是最主要的原因[5,6]。不同基因突變導致不同的耳聾臨床表型，如：GJB2基因突變通常導致先天性耳聾，SLC26A4基因突變通常導致遲發(fā)性耳聾，部分患者表現為先天性聾；不同類型基因突變導致的耳聾有不同的治療、干預措施[5]。

研究表明我國常見耳聾基因突變總體攜帶率在2%～6%之間，本研究結果顯示銀川市興慶區(qū)新生兒常見耳聾基因突變攜帶率為4.57%，與全國總體水平相符，但略低于陜西的5.17%[6]、高于新疆的3.56%[7]。我國遺傳性聾主要是由GJB2、SLC26A4、mtDNA12SrRNA、GJB3四個基因的突變導致，GJB2基因是第一位致聾基因，SLC26A4基因是我國第二位致聾基因[6]。本研究中5 579例新生兒中，GJB2、SLC26A4基因突變攜帶率分別為2.06%、2.06%，SLC26A4基因突變總體攜帶率高于全國水平(0.55%～2.04%)[8]。SLC26A4基因突變與大前庭水管綜合征有關，患者可能因感冒、頭外傷等導致顱內壓力增高后致聽力損失[9，10], 因此，攜帶SLC26A4基因突變的新生兒要注意日常防護，避免 “一巴掌”致聾。mtDNA12SrRNA基因突變屬于母系遺傳，常見的兩種突變類型是m.1555A>G和m.1494C>T，且存在同質性和異質性突變，其母系子代均為該基因突變的攜帶者，攜帶者出生時通常聽力表現正常，在使用氨基糖苷類藥物后導致不可逆轉的聽力損失[11]。mtDNA12SrRNA基因攜帶率通常在0～0.29%[6]，本研究，發(fā)現12例新生兒攜帶m.1555A>G位點突變，攜帶率0.22%，與上述文獻報道一致。

寧夏回族自治區(qū)深處內陸，位于中國西北部的黃河中上游地區(qū)，是我國回族長居人口最多的地區(qū)。研究表明耳聾基因的分布存在一定的地域性和民族差異性，在不同的地域和民族聚居人群中，耳聾基因的突變譜存在很大的不同[3]。本研究結果顯示，在銀川市漢、回族新生兒中均能檢測到GJB2、GJB3、SLC26A4、mtDNA12SrRNA基因突變，且在回族中總體檢出率顯著高于漢族。而寧夏以及新疆分別對2 702、3 122例新生兒進行四個常見耳聾基因9個突變位點篩查，發(fā)現回族新生兒耳聾基因攜帶率低于漢族新生兒[12，13]，與本研究結果不一致，可能與篩查人數以及篩查位點不同有關。其次，寧夏是古絲綢之路的重要通道，不同人種遷徙以及婚配造成了較廣泛的基因交流，且寧夏封閉的地理環(huán)境和兩個民族小聚居的特點也可能是其耳聾基因突變譜不同的原因之一。

從本研究結果看，漢、回族新生兒中GJB2與SLC26A4基因突變攜帶率最高，其次是GJB3和線粒體DNA12SrRNA基因，與文獻報道一致[6]； 但在回族新生兒中，SLC26A4基因突變攜帶率(3.70%)略高于GJB2基因(3.23%)，且mtDNA12SrRNA基因突變攜帶率顯著低于漢族，與文獻報道不一致[12]；Du等[14]發(fā)現在西北五省的回族耳聾人群中，SLC26A4基因突變攜帶率高于GJB2基因, 可能與回族人群人種來源以及婚配方式有關，具體原因需要進一步分析。

文中結果顯示，GJB2基因在回族和漢族新生兒中均以c.235delC突變?yōu)橹?，其次是c.176del16與c.299_300delAT突變位點，與文獻報道一致[14～16]； c.176del16是猶太人最常見的突變形式[17]；而c.299_300delAT是東亞地區(qū)耳聾人群較常見的突變[7]。本研究顯示GJB2基因的常見突變位點c.176del16和c.299_300delAT在回族新生兒中的攜帶率顯著高于漢族，可能是因為猶太人與阿拉伯人同源，我國寧夏地區(qū)回民是由阿拉伯國家遷移而來，由此導致突變位點c.176del16和c.299_300delAT 在回族人群中高發(fā)[18]。本研究中，SLC26A4基因在回族和漢族新生兒中均以c.919-2 A >G突變位點為主，與文獻報道一致[19]。本研究876例回族新生兒中未發(fā)現SLC26A4基因c.2168A>G位點突變，c.2168A>G位點突變是韓國人和日本人中最主要的突變形式，中國、韓國、日本同屬蒙古人種[20]，因此c.2168A>G突變位點常見。研究報道m(xù)tDNA12SrRNA基因中m.1555 A >G突變的攜帶率可能因種族不同而呈現差異，也與地域和環(huán)境相關[14]。本研究中，漢族新生兒mtDNA12SrRNAm.1555 A >G位點突變攜帶率顯著高于回族，與文獻報道不一致[17]，因此，寧夏銀川地區(qū)，漢族與回族常見耳聾基因突變特點存在明顯差異，其原因可能與篩查樣本數量以及篩查位點覆蓋面有關，也可能與回族人群的人種來源、人口遷徙、婚配、飲食文化、氣候等因素有關，需要進一步研究分析。

綜上所述，銀川市興慶區(qū)回族新生兒中四個常見耳聾基因突變率高于漢族，GJB2和SLC26A4是銀川地區(qū)新生兒突變率最高的耳聾基因，且SLC26A4基因突變攜帶率高于全國水平，漢、回族新生兒中分別以GJB2基因c.235delC以及SLC26A4基因c.919-2A>G突變?yōu)橹鳎一刈逍律鷥旱臄y帶率明顯高于漢族，四個常見耳聾基因其他突變位點也呈現出一定的地域與民族特點。