我國土榨花生油黃曲霉毒素B1及圓弧偶氮酸毒素污染調(diào)查

楊博磊，張秀娟，王 剛，張晨曦，耿海榮，李 麗，劉 陽

(中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品加工研究所，農(nóng)業(yè)部農(nóng)產(chǎn)品加工綜合性重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100193)

隨著生活水平的提高，我國居民對植物油的人均年需求從20世紀(jì)80年代的2.2 kg提升到了2016年的24.8 kg，其中花生油占植物油的8%[1]。我國是世界第一大花生生產(chǎn)國，年產(chǎn)量達(dá)1 700萬t左右，其中52%左右的花生用于榨油，約占我國自產(chǎn)植物油的25%[2]?；ㄉ秃胸S富的不飽和脂肪酸，其中的油酸可在不破壞對健康有利的高密度脂蛋白膽固醇的同時(shí)降解對健康有害的總膽固醇和低密度脂蛋白膽固醇[3]，同時(shí)油酸還具有提高自身免疫力、預(yù)防肥胖、抗炎癥、預(yù)防衰老、預(yù)防動(dòng)脈粥樣硬化等作用[4-5]，但花生油存在的安全問題不容忽視。

目前，花生油存在的主要安全問題為黃曲霉毒素B1(AFB1)超標(biāo)。王君等[6]通過對我國部分食品中AFB1監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，花生為AFB1污染的主要原料。AFB1是由黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的有毒次級代謝產(chǎn)物，具有很強(qiáng)的致癌性、致畸性和致突變性[7]。AFB1的主要靶器官是肝臟，攝入AFB1可引起肝炎、肝硬化，嚴(yán)重時(shí)甚至引發(fā)肝癌[8]，被世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機(jī)構(gòu)劃定為最強(qiáng)致癌物之一[9]。圓弧偶氮酸(Cyclopiazonic acid,CPA)是由黃曲霉產(chǎn)生的另一種有毒代謝產(chǎn)物，早在1985年Rao等[10]就報(bào)道了由CPA引起的人類真菌毒素中毒的安全問題。CPA可引起大鼠的肝、腎臟及免疫系統(tǒng)損傷。由于CPA與黃曲霉毒素(AFT)同時(shí)存在，CPA的毒性往往被AFT中毒掩蓋，未能引起人們的重視[11-12]。目前，國內(nèi)外對CPA的致病性研究尚未成熟，相關(guān)組織尚未頒布CPA限量標(biāo)準(zhǔn)。

本文從全國12省20市小作坊生產(chǎn)的土榨花生油及市售品牌花生油開展花生油AFB1和CPA含量分析，以了解不同地區(qū)土榨花生油和不同品牌花生油中真菌毒素污染情況，為花生油安全監(jiān)督提供科學(xué)依據(jù)，為群眾理性選擇花生油提供參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1 原料與試劑

2018年10—12月在全國12省20市共采集土榨花生油126份，從商城購買品牌花生油27份。樣品采集后4℃保存，采樣后1月內(nèi)完成AFB1和CPA含量檢測。

甲醇和乙腈，色譜純，美國Fisher公司；AFB1和CPA標(biāo)準(zhǔn)品，青島普瑞邦生物工程有限公司；PBS緩沖液，北京索萊寶科技有限公司；黃曲霉毒素免疫親和柱，中檢環(huán)貿(mào)生物技術(shù)(北京)有限公司；碳酸氫鈉、正己烷、氯化鉀、鹽酸、氯仿、乙酸銨等，均為分析純。

1.1.2 儀器與設(shè)備

安捷倫1260高效液相色譜儀，美國Agilent公司；Genius 3渦旋混合器，德國IKA公司；HF2500光化學(xué)衍生器，北京華安麥科生物技術(shù)有限公司；Angel氮吹儀，杭州奧盛儀器有限公司；高速離心機(jī)，美國Sigma公司；YP3002電子天平，上海越平科學(xué)儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 花生油中AFB1和CPA提取及測定

1.2.1.1 AFB1的提取及測定

根據(jù)GB 5009.22—2016《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》做適當(dāng)調(diào)整。稱取5 g花生油樣品于50 mL離心管中，加入15 mL 84%乙腈，渦旋混勻，置于超聲波中超聲30 min，濾紙過濾收集濾液，備用。取2 mL提取液利用黃曲霉毒素免疫親和柱提取AFB1，用0.5 mL甲醇洗脫AFB1兩次，氮吹儀吹干，用1 mL 70%甲醇復(fù)溶，過0.22 μm濾器，收集濾液于液相瓶中，待高效液相色譜儀檢測AFB1含量。HPLC條件：Agilent TC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫30℃；流動(dòng)相為70%甲醇，流速1 mL/min；進(jìn)樣量20 μL；激發(fā)波長360 nm，發(fā)射波長440 nm；配備光化學(xué)衍生器。

1.2.1.2 CPA的提取及測定

取5 g花生油樣品，加入20 mL甲醇-2%碳酸氫鈉水溶液(體積比7∶3)，大于200 r/min振蕩30 min，取出10 mL溶液至分液漏斗，并加入20 mL正己烷萃取，振蕩分層后棄去正己烷層，隨后加入10 mL 10%氯化鉀溶液，混合均勻后加入0.4 mL 6.0 mol/L 鹽酸溶液酸化，用10 mL氯仿提取兩次CPA，收集氯仿層，取1 mL用氮?dú)獯蹈珊髲?fù)溶于1.0 mL乙腈-0.05 mol/L乙酸銨水溶液(體積比8∶2，pH=5)，用高效液相色譜儀檢測CPA含量[13]。HPLC條件：Agilent TC-C18色譜柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，柱溫30℃；流動(dòng)相為乙腈-0.05 mol/L乙酸銨水溶液(體積比8∶2，pH=5)，流速0.6 mL/min，進(jìn)樣量20 μL；檢測波長284 nm。

1.2.2 數(shù)據(jù)處理

根據(jù)GB 2761—2017《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中真菌毒素限量》規(guī)定，花生油樣品中AFB1含量大于20 μg/kg，視為超標(biāo)；由于我國尚未頒布CPA限量標(biāo)準(zhǔn)，因此本次調(diào)查只做檢出分析。采用Excel 2010和SPSS 17統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 花生油中真菌毒素總體污染情況(見表1)

表1 153份花生油樣品中真菌毒素污染情況

由表1可知：153份花生油樣品中，56份樣品檢出AFB1，檢出率為36.60%，含量范圍為1.12～55.63 μg/kg，中位數(shù)為5.96 μg/kg，14份樣品檢出AFB1超標(biāo)，超標(biāo)率為9.15%；9份樣品檢出CPA，檢出率為5.88%，含量范圍為24.28～1 054.21 μg/kg，中位數(shù)為299.01 μg/kg。國內(nèi)學(xué)者針對不同地區(qū)花生油AFB1污染也開展了一系列調(diào)查。徐文靜等[14]對四川、廣西、云南等8省216份花生油AFB1污染進(jìn)行調(diào)查，結(jié)果顯示AFB1的檢出率為57.41%，超標(biāo)率為11.57%。殷國英等[15]對廣東惠州126份花生油AFB1污染進(jìn)行調(diào)查，發(fā)現(xiàn)AFB1檢出率達(dá)88.1%，超標(biāo)率為11.9%。周子焱等[16]對浙江省345份花生油進(jìn)行AFB1監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)AFB1檢出率為5.2%，未檢測到AFB1超標(biāo)樣品。何建忠等[17]對廣西貴港市459份花生油AFB1進(jìn)行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)AFB1檢出率達(dá)12.9%，超標(biāo)率為6.8%。駱建祥等[18]對福建惠安縣花生油AFB1進(jìn)行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)AFB1超標(biāo)率為13.2%。何景等[19]對北京市食用油AFB1進(jìn)行監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)花生油中AFB1檢出率為26.67%。綜上所述，我國各地均存在花生油AFB1污染情況，形勢不容樂觀，應(yīng)引起監(jiān)管部門重視。由于國家尚未頒布CPA限量標(biāo)準(zhǔn)，國內(nèi)尚未開展花生油中CPA監(jiān)測，但其對器官、神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)同樣存在較強(qiáng)毒性，仍需引起關(guān)注。

2.2 不同類別花生油中真菌毒素污染情況(見表2)

表2 不同類別花生油中真菌毒素污染情況

由表2可知：56份土榨花生油檢出AFB1，檢出率為44.44%，14份土榨花生油AFB1超標(biāo)，超標(biāo)率為11.11%，9份土榨花生油檢出CPA，檢出率為7.14%；品牌花生油中未檢出AFB1和CPA。土榨花生油AFB1和CPA污染情況顯著高于品牌花生油。宋博才[20]對部分市售品牌花生油和土榨花生油品質(zhì)調(diào)查發(fā)現(xiàn)，品牌花生油質(zhì)量合格，而土榨花生油AFB1含量超標(biāo)率較高。陳濤[21]對福建省市售品牌花生油和土榨花生油黃曲霉毒素污染監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，土榨花生油黃曲霉毒素含量均高于品牌花生油。劉輝等[22]研究發(fā)現(xiàn)，土榨花生油AFB1超標(biāo)率高于品牌花生油。土榨花生油一般都為小作坊或者非正規(guī)廠家生產(chǎn)，儲(chǔ)藏加工環(huán)境較差，容易引起花生黃曲霉菌生長并產(chǎn)生毒素，同時(shí)由于小作坊加工工藝比較落后，生產(chǎn)人員技術(shù)水平相對較低，缺乏去除黃曲霉毒素的加工工藝，因此造成了土榨花生油黃曲霉毒素污染嚴(yán)重的情況。監(jiān)管部門應(yīng)加強(qiáng)花生黃曲霉毒素防控宣傳，提高加工人員安全意識(shí)，加強(qiáng)監(jiān)管力度，避免黃曲霉毒素污染花生油流入市場。

2.3 不同地區(qū)土榨花生油中AFB1污染情況(見表3)

表3 不同地區(qū)土榨花生油中AFB1污染情況

由表3可知，河南、福建、廣西和山東土榨花生油AFB1污染較為嚴(yán)重，檢出率分別為55.17%、63.64%、53.33%和40.00%，且均檢出AFB1超標(biāo)樣品，4個(gè)省份土榨花生油中AFB1檢出最高值達(dá)到國標(biāo)限值的1.76～2.78倍，其中廣西檢出土榨花生油中AFB1最高含量為55.63 μg/kg。田洪蕓等[23]對山東地區(qū)土榨花生油進(jìn)行監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，AFB1檢出率達(dá)80.00%，超標(biāo)率為19.10%。盧宇芳等[24]對廣西地區(qū)植物油中AFB1進(jìn)行監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，土榨花生油中AFB1超標(biāo)率為18.18%。林強(qiáng)等[25]對福州市小作坊花生油進(jìn)行AFB1污染情況分析發(fā)現(xiàn)，AFB1超標(biāo)率達(dá)66.1%。以上研究表明各地土榨花生油AFB1污染嚴(yán)重。本調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，全國各地花生油AFB1污染不容樂觀，河南、山東、廣西和福建更為嚴(yán)重。分析其原因可能為：河南、山東兩省為花生種植大省，原料儲(chǔ)藏充足，而小作坊環(huán)境衛(wèi)生及通風(fēng)情況較差，容易造成黃曲霉菌生長和產(chǎn)毒；廣西、福建兩地氣候濕熱，更易造成黃曲霉毒素污染。

2.4 不同地區(qū)土榨花生油中CPA污染情況(見表4)

表4 不同地區(qū)土榨花生油中CPA污染情況

由表4可知，湖北、湖南、山西、山東、廣西和福建6省土榨花生油中均檢出CPA，檢出率分別為21.43%、25.00%、20.00%、6.67%、6.67%和4.55%。土榨花生油中CPA最高檢出含量為1 054.21 μg/kg，最低檢出含量為24.28 μg/kg。土榨花生油中CPA的污染情況遠(yuǎn)輕于AFB1，僅個(gè)別省份少量檢出，檢出率最高的為湖南，檢出率為25.00%，檢出份數(shù)為2份；湖北檢出率為21.43%，檢出份數(shù)為3份；其他省僅檢出1份。Oliveira等[26]研究了巴西圣保羅市的牛奶中黃曲霉毒素M1(AFM1)和CPA的污染情況，發(fā)現(xiàn)牛奶中AFM1的檢出率為77.1%，而CPA的檢出率遠(yuǎn)低于AFM1，僅為4.2%，此結(jié)果與本研究結(jié)果類似。目前，國內(nèi)外對花生產(chǎn)品中CPA的污染調(diào)查以及CPA和AFB1污染相關(guān)性研究較少。本次研究發(fā)現(xiàn)土榨花生油中AFB1污染與CPA污染無顯著相關(guān)性。

3 結(jié) 論

通過對我國土榨花生油及市售品牌花生油中AFB1和CPA污染調(diào)查發(fā)現(xiàn)：品牌花生油未檢出AFB1和CPA污染；土榨花生油存在真菌毒素污染安全隱患，AFB1檢出率為44.44%，超標(biāo)率為11.11%，CPA檢出率為7.14%，其中河南、福建、廣西和山東土榨花生油AFB1污染嚴(yán)重，個(gè)別省份土榨花生油檢出CPA污染。土榨花生油一般由小作坊生產(chǎn)，小作坊衛(wèi)生環(huán)境相對較差，防霉防潮措施不到位，容易引起花生黃曲霉毒素污染。為全面提高土榨花生油質(zhì)量安全，建議監(jiān)管部門加大對花生原料及土榨花生油生產(chǎn)、流通環(huán)節(jié)的監(jiān)管，加大對黃曲霉毒素危害的宣傳力度，加強(qiáng)對花生油加工作坊生產(chǎn)人員安全培訓(xùn)。本次污染調(diào)查雖在各省市采集樣品較少，覆蓋不夠全面，但在一定程度上能夠體現(xiàn)我國土榨花生油和品牌花生油的質(zhì)量狀況。