不同濃度酒精對(duì)雌鼠卵巢功能的影響

鄧雪冰，張江霖，廖 英，鄒 艷，尹艷華，陶曉群

（1.湖南中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，株洲 412007；2.湖南省婦幼保健院婦?？?，長(zhǎng)沙 410000）

卵巢衰老是卵巢儲(chǔ)備功能逐漸下降直至最后衰竭的過(guò)程，受多種因素的影響[1-3]。除年齡外，外界環(huán)境、遺傳因素、生活方式、社會(huì)心理、免疫等都可通過(guò)直接或間接途徑影響卵巢功能，導(dǎo)致卵巢功能下降。近年來(lái)，發(fā)現(xiàn)卵巢早衰和卵巢儲(chǔ)備下降的病人呈不斷上升及年輕化的趨勢(shì)［4-6］。原因之一可能是女性對(duì)內(nèi)分泌疾病的重視及臨床診斷水平的提高，其二可能是與現(xiàn)代女性生活方式有關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)吸煙、飲酒、吸毒是影響女性卵巢儲(chǔ)備功能的常見(jiàn)因素［7-9］。但目前各種行為方式對(duì)卵巢功能的影響權(quán)重及影響機(jī)制仍不明確，如何去趨利避害以最大限度保護(hù)女性卵巢功能具有重要的研究意義。因此本實(shí)驗(yàn)予不同濃度酒精灌胃雌鼠不同的時(shí)間，制造雌鼠飲酒模型，通過(guò)檢測(cè)外周血清性激素含量和稱量卵巢濕重，從而探討酒精對(duì)卵巢功能損傷的規(guī)律及機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物40只健康成年SD雌性大鼠，采購(gòu)于湖南長(zhǎng)沙斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，體重為200～220g之間，給予足夠的水和食物。飼養(yǎng)條件：房間溫濕度適宜，持續(xù)日光燈照射，溫度為24℃，濕度為60%。

1.1.2 試劑與設(shè)備試劑為10%、20%、30%的酒精（配置方法：10%酒精：15mL 99%酒精加135mL 蒸餾水配至150mL ；20%酒精：30mL 99%酒精加120mL 蒸餾水配至150mL ；30%酒精：45mL 99%酒精加105mL 蒸餾水配至150mL ）；卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）、抗苗勒管激素（AMH）、抑制素B（INH-B）試劑檢測(cè)盒，購(gòu)自上海酶聯(lián)生物科技有限公司。主要儀器設(shè)備：DNM-9606型酶標(biāo)分析儀、ES-1000E電子天平。

1.2 方法

1.2.1 分組按隨機(jī)數(shù)字法將40只大鼠分為 4 組，分別為10%酒精組（低濃度組）、20%酒精組（中濃度組）、30%酒精組（高濃度組）及對(duì)照組（蒸餾水組）。

1.2.2 動(dòng)物模型制備研究組大鼠予 10%、20%、30%酒精2mL灌胃，早晚各1次，對(duì)照組予等體積的蒸餾水灌胃，方法與研究組相同。灌胃4周后每組隨機(jī)處死5只SD大鼠，余下的20只大鼠繼續(xù)灌胃至8周處死。

1.3 組織標(biāo)本制備［10］雌鼠飲酒模型建立后，四組SD大鼠在麻醉的狀況下斷頭摘眼球后取血，取血5mL于促凝管中，室溫下自然凝固，離心機(jī)離心，取上方血清，用ELISA法（雙抗夾心法）測(cè)定抗苗勒試管激素（AMH）、抑制素B（INH-B）、 卵泡刺激素（FSH）、雌二醇（E2）；然后取大鼠的臟器雙側(cè)卵巢，用電子天平稱重。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。組間比較采用多樣本t檢驗(yàn)，組內(nèi)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)均輸入SPSS 18.0 軟件，通過(guò)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，P＜0.05為有顯著差異性。

2 結(jié)果

2.1 不同濃度酒精灌胃對(duì)大鼠血清FSH、E2的影響

灌胃4周時(shí)，30%酒精組的血FSH、E2水平顯著高于其他三組（P＜0.05），10%、20%酒精組血FSH、E2無(wú)顯著變化（P＞0.05）。灌胃8周時(shí)，三種酒精組的FSH均升高，且較同濃度組4周時(shí)高（P＜0.05）。30%酒精組E2水平較灌胃4周時(shí)顯著下降（P＜0.05）；而10%和20%酒精組E2水平較4周時(shí)顯著升高（P＜0.05），且較對(duì)照組和同期30%酒精組明顯升高（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 不同濃度酒精灌胃雌鼠后血清FSH、E2水平比較（n=5）

2.2 不同濃度酒精灌胃后對(duì)大鼠血清AMH、INH-B的影響灌胃4周時(shí)，20%、30%酒精組血AMH、INH-B明顯低于對(duì)照組（P＜0.05），而10%的酒精組AMH、INH-B無(wú)顯著變化（P＞0.05）。灌胃8周時(shí)，三種濃度酒精組 AMH、INH-B 均顯著降低（P＜0.05），且比灌胃4周時(shí)更低（P＜0.05），見(jiàn)表 2。

表2 不同濃度酒精灌胃雌鼠后血清AMH、 INH-B水平比較（n=5）

2.3 不同濃度酒精灌胃對(duì)卵巢濕重的影響灌胃4周時(shí)，30%酒精組的雙側(cè)卵巢濕重明顯高于其他三組（P＜0.05），而灌胃8周時(shí)，大鼠雙側(cè)卵巢濕重較4周時(shí)減輕（P＜0.05）；灌胃8周時(shí)10%和20%酒精組雙側(cè)卵巢濕重較4周時(shí)顯著升高（P＜0.05），并且高于同期 30%酒精組和對(duì)照組的卵巢濕重，有顯著性差異（P＜0.05），見(jiàn)表3。

表3 不同濃度組大鼠卵巢濕重情況比較及同濃度組內(nèi)前后比較（n=5）

3 討論

臨床上評(píng)價(jià)卵巢儲(chǔ)備功能的指標(biāo)主要有：年齡、AMH、卵巢體積、雙側(cè)竇卵泡數(shù)目、FSH、E2、INH-B等［11］。年齡一直被認(rèn)為是預(yù)測(cè)卵巢儲(chǔ)備功能最重要指標(biāo)之一，隨著年齡增長(zhǎng)，女性卵巢儲(chǔ)備能力不斷下降［12］。卵巢體積、質(zhì)量及竇卵泡數(shù)也是反映卵巢功能的重要指標(biāo)，國(guó)際上普遍用竇卵泡數(shù)量來(lái)評(píng)定卵巢功能，卵巢體積、質(zhì)量與竇卵泡數(shù)量有相關(guān)性［13］。血清FSH、E2水平是臨床上評(píng)價(jià)卵巢儲(chǔ)備能力的常用指標(biāo)［14］，卵巢功能減退的早期表現(xiàn)E2水平上升，隨之出現(xiàn)下降，血FSH水平上升，較其它癥狀出現(xiàn)較早。INH-B是由竇前卵泡和竇卵泡分泌的糖蛋白類激素，臨床研究表明，INH-B的下降早于FSH的升高，能更早期反應(yīng)卵巢儲(chǔ)備功能，在臨床運(yùn)用越來(lái)越廣泛［15］。AMH和女性卵巢儲(chǔ)備功能關(guān)系密切，并具有一定的穩(wěn)定性，是目前被認(rèn)為反映卵巢功能最佳的內(nèi)分泌學(xué)指標(biāo)［16］。

本實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)灌胃4周后30%酒精組血FSH水平明顯高于其他三組，AMH、 INH-B明顯低于其他三組，這表明酒精攝入可影響垂體促性腺激素和血清性激素的水平，其影響程度與攝取酒精的濃度有相關(guān)性，短時(shí)間內(nèi)只有高濃度酒精出現(xiàn)該效應(yīng)，血液酒精濃度越高，血清FSH水平升高得越明顯，而AMH、INH-B降低的越明顯，這與隨璐［17］等人的研究結(jié)果基本上一致。灌胃8周時(shí)，10%和20%酒精組的血清FSH水平較灌胃4周時(shí)顯著升高，較對(duì)照組也明顯升高。這表明低濃度酒精短時(shí)間刺激對(duì)卵巢功能影響不大，只有長(zhǎng)時(shí)間刺激才引起卵巢功能下降，從而導(dǎo)致FSH升高。20%酒精灌胃雌鼠4周，F(xiàn)SH與對(duì)照組比較無(wú)顯著差別，但AMH、INH-B卻降低，說(shuō)明AMH、INH-B預(yù)測(cè)卵巢儲(chǔ)備功能比FSH更加敏感。

本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)灌胃4周后30%酒精組血E2水平明顯高于其他三組，但灌胃8周后10%和20%酒精組的E2水平和較4 周時(shí)顯著升高，且明顯高于同期30%酒精組和對(duì)照組，但30%酒精組灌胃8周后，E2明顯降低。這和王慶學(xué)研究的低濃度酒組使雌鼠E2升高，高濃度酒組使E2水平降低得研究結(jié)果基本一致［18］。E2是由卵巢合成和分泌的，E2水平越低，卵巢功能越差［5］。本研究還發(fā)現(xiàn)卵巢濕重的變化和E2水平基本保持一致，少量或短時(shí)間飲酒可能刺激卵巢，引起卵巢生長(zhǎng)發(fā)育，從而導(dǎo)致卵巢質(zhì)量增加，而大劑量的酒精刺激可能對(duì)卵巢產(chǎn)生毒性，導(dǎo)致卵巢萎縮，卵巢質(zhì)量減輕，卵巢縮小，竇卵泡數(shù)目減少，因此E2水平降低。這和LINA［19］及王正朝［20］的研究結(jié)果基本一致。而林兵等人［21］研究發(fā)現(xiàn)只要連續(xù)飲酒4周就可以改變成年大鼠的營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)，并使大鼠體重下降，但研究未發(fā)現(xiàn)對(duì)卵巢質(zhì)量有影響，和我們的研究結(jié)果也基本基本一致。

通過(guò)本研究發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)時(shí)間、過(guò)量飲酒會(huì)對(duì)卵巢產(chǎn)生毒性，導(dǎo)致女性生殖內(nèi)分泌紊亂，加快卵巢的衰老，但其損傷機(jī)制有待進(jìn)一步探索和研究。因此做好女性健康教育，崇尚健康生活方式，提醒婦女有節(jié)制飲酒，可以促進(jìn)人類生殖健康。