HS-SPME-GC-MS分析仙茅及酒仙茅的揮發(fā)性成分

王文通 江漢美 張智婧

摘要：采用頂空固相微萃取法（HS-SPME）結合氣質(zhì)聯(lián)用技術（GC-MS）對生仙茅（Curculigo orchioides Gaertn. ）及酒仙茅的揮發(fā)性成分進行分析鑒定，并計算各成分相對百分含量。結果表明，生仙茅中分離出22個峰，鑒定出16種成分，占揮發(fā)性成分的72.73%，其中含量最高的為右旋萜二烯，占總揮發(fā)性成分的16.22%;從酒仙茅中分離出28個峰，鑒定出24種成分，占揮發(fā)性成分的85.71%，其中含量最高的為壬醛，占總揮發(fā)性成分的10.09%。仙茅酒制后部分揮發(fā)性成分消失，同時也增加了一些新的揮發(fā)性成分，為仙茅藥材開發(fā)利用和臨床運用提供科學依據(jù)。

關鍵詞：仙茅（Curculigo orchioides Gaertn. ）;HS-SPME;GC-MS;揮發(fā)性成分

Abstract： Headspace solid phase microextraction （HS-SPME） combined with gas chromatography-mass spectrometry （GC-MS） was used to analyze the volatile components of Curculigo orchioides and wine-processed， and the relative contents of each component were calculated. The? results showed that 22 peaks were isolated from the volatile components of Curculigo orchioides， and 16 components were identified， accounting for 72.73% of the volatile components， of which the highest was dextroterpene， accounting for 16.22% of the total volatile components. 28 peaks were isolated from the volatile components of Curculigo orchioides， and 24 components were identified， accounting for 85.71% of the volatile components， the highest of which was nonanal， accounting for 10.09% of the total volatile components. Part of the volatile components disappeared and some new volatile components were added after the production of Curculigo orchioides. It can provide scientific basis for the development， utilization and clinical application of Curculigo orchioides.

Key words： Curculigo orchioides Gaertn.; HS-SPME; GC-MS; volatile components

仙茅系石蒜科植物仙茅（Curculigo orchioides Gaertn.）的干燥根莖，歷年版的《中華人民共和國藥典》均有收載。四川、云南、貴州是中國仙茅的主要產(chǎn)區(qū)[1]，仙茅中的主要成分為仙茅素A、仙茅素B、仙茅素C[2]，仙茅皂苷A、仙茅皂苷B、仙茅皂苷C、仙茅皂苷D[3，4]和黃酮類[5]等，具溫腎陽、壯筋骨、治陽痿精冷等功效[6]，仙茅具有耐缺氧、抗炎、雄性激素樣等藥理作用[7]。仙茅性熱，味辛，有毒，對部分寒癥有治療作用[8]。對仙茅藥性物質(zhì)的認識不僅要分析其水溶性、脂溶性成分，亦應對其揮發(fā)性成分加以認識。

目前國內(nèi)外尚無對仙茅炮制品采用HS-SPME-GC-MS分析其揮發(fā)性成分研究的報道，主要研究的是仙茅生品的揮發(fā)性成分，還有水蒸氣蒸餾提取法與HS-SPME-GC-MS法對比從仙茅中提取揮發(fā)成分的研究[9]。試驗對仙茅的揮發(fā)性成分是否有影響還有待于進一步研究。本試驗將仙茅的酒制品與其生品用HS-SPME-GC-MS法進行揮發(fā)性成分對比，觀察兩者揮發(fā)性成分的相同與不同點，再次觀察其揮發(fā)性成分對藥性是否有影響。

1 材料與方法

1.1 試藥

仙茅購于武漢聚草堂藥業(yè)有限公司，產(chǎn)地為四川省，經(jīng)由湖北中醫(yī)藥大學生藥教研室鑒定，此藥為石蒜科植物仙茅的干燥根莖。

1.2 儀器

Agilent6890/5973型氣-質(zhì)聯(lián)用儀，Hewlett-Packard公司;JY1002型電子天平，上海浦春計量儀器有限公司，d=0.01 g;手動固相微萃取裝置，IKA公司;頂空瓶，15 mL;65 μm PDMS/DVB萃取纖維頭，Supelco 公司。

1.3 方法

1.3.1 酒仙茅的制備 參照2015版《中華人民共和國藥典》四部炮制通則中的炮制方法：取干凈的仙茅段，與黃酒拌勻，悶潤至酒被吸盡，再將藥物置于炒制容器中，用文火炒干，至顏色加深，再取出晾干，篩去碎屑。

1.3.2 GC-MS色譜與質(zhì)譜條件

1）GC條件。HP-5MS石英毛細管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）;升溫程序，以10 ℃/min 由50 ℃升至230 ℃，100 ℃平衡10 min，萃取20 min，解析? 4 min。載氣為高純He，流速1.2 mL/min，進樣口溫度230 ℃。

2）MS條件。EI 源;離子源溫度230 ℃，電離能70 eV;四級桿溫度150 ℃;掃描質(zhì)量范圍35～550? m/z。

1.3.3 頂空固相微萃取條件 綜合考察后確定了仙茅的頂空固相微萃取條件：精密稱定仙茅粉末（過40目篩）0.8 g，置于15 mL頂空瓶中，再將65 μm PDMS/DVB萃取纖維頭的手動進樣器插入其中，預平衡10 min（溫度100 ℃），再頂空萃取20 min，取出手動進樣器后立即插入色譜儀進樣口中，解吸4 min（溫度230 ℃），不分流進樣。酒仙茅試驗條件同上。

2 結果與分析

經(jīng)化學工作站對試驗數(shù)據(jù)處理，再用面積歸一法對生仙茅及酒仙茅的兩個總離子流計算樣品中各成分的相對百分含量。然后利用NIST08質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫對各質(zhì)譜峰進行檢索并確定各成分。具體結果見圖1、圖2及表1。由表1可知， 生仙茅中檢測出22個峰，鑒定出16種成分，占揮發(fā)性成分的72.73%，其中含量最高的為右旋萜二烯（16.22%），其次為萜品烯（8.31%）、α-衣蘭烯（7.06%）、壬醛（6.69%）、苯酚（6.43%）等。含量最高的右旋萜二烯又名D-檸檬烯， 是一種天然活性單萜， 具有鎮(zhèn)痛、抑菌、鎮(zhèn)靜、抗腫瘤、增香、抗癌、止咳、平喘等生理功能[10]， 已被廣泛應用于食品、香料、日化、醫(yī)藥等行業(yè)[11]。萜品烯有一定的抗氧化作用，其機理是可以保護SOD、GSH-Px和CAT等抗氧化酶的活性，在一定程度上恢復由過氧化氫引發(fā)的細胞損傷， 起到抗氧化作用[12]。酒仙茅中檢測出28個峰，其中鑒定出24種成分，占揮發(fā)性成分的85.71%，其中含量最高的為壬醛（10.09%），其次為右旋萜二烯（8.06%）、萜品烯（6.89%）、苯酚（6.70%）、2-正戊基呋喃（6.70%）等。壬醛是一種具有清香、油香、脂香風味[13]的飽和醛， 可用作食品添加劑，也可用于調(diào)制橙花、玫瑰等香精。有抑菌、鎮(zhèn)痛作用的右旋萜二烯和有抗氧化作用的萜品烯經(jīng)過酒制后含量有所降低。經(jīng)過酒制后苯酚和2-正戊基呋喃等有毒揮發(fā)性物質(zhì)增加。

3 討論

研究結果表明，生仙茅與其酒制后的樣品揮發(fā)性成分色譜峰形相似，不易區(qū)別。仙茅酒制前后共有的揮發(fā)性成分有右旋萜二烯、壬醛、萜品烯、正己醛、樟腦萜、正己酸、苯酚、2-正戊基呋喃、4-異丙基甲苯等15種，其中壬醛含量明顯增加，右旋萜二烯含量相對減少。將仙茅生品經(jīng)過炮炙后，3，5-二氯-4-羥基苯甲酸未在酒仙茅中檢測到，推測在炮制文火炒過程中該刺激性物質(zhì)可能不耐高溫，大量消失或轉化，與生仙茅相比，酒仙茅中新增了異戊醇（4.98%）、正丁酸（2.07%）、5-甲基呋喃醛（1.67%）、苯乙醇（2.50%）、苯甲醛（2.32%）、1，2-二甲氧基苯（2.37%）、正辛醛（1.92%）等9種成分，增加的大部分物質(zhì)都是對人體有刺激性或是有害的揮發(fā)性成分。生仙茅和酒仙茅中揮發(fā)性成分具有一定的差異，酒仙茅揮發(fā)性成分總量有所增加。仙茅中揮發(fā)油含量很低，這些成分決定了仙茅藥材的氣味，但是否與其藥性（熱性）有關，還有待于進一步研究。要充分利用仙茅的多種藥理活性，挖掘其更大的潛在市場。

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