雙水相體系分離純化杜仲總黃酮和綠原酸的研究

張亦琳 延永 張琴

摘要：采用雙水相萃取法輔助醇提法來提取純化杜仲（Eucommia ulmoides Oliver）中的總黃酮和綠原酸。通過單因素試驗(yàn)和Box-Behnken響應(yīng)面法確定最佳提取工藝，利用乙醇/無機(jī)鹽雙水相體系將杜仲提取物中的總黃酮和綠原酸進(jìn)行有效分離。結(jié)果表明，在最佳提取條件下，杜仲總黃酮的最佳雙水相萃取體系為乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%、K2HPO4的質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%，此時(shí)，相比R為2.93，分配比D為10.35，杜仲總黃酮的萃取率達(dá)77.94%。綠原酸的最佳雙水相萃取體系為乙醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)60%、K2HPO4的質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%，此時(shí)，相比R為3.43，分配比D為12.32，杜仲綠原酸的萃取率達(dá)78.22%。開發(fā)條件溫和、成相穩(wěn)定、用時(shí)較短的雙水相萃取技術(shù)，對(duì)杜仲的開發(fā)利用有重要意義。

關(guān)鍵詞：杜仲（Eucommia ulmoides Oliver）;總黃酮;綠原酸;雙水相體系;純化

Abstract： In this study， the two-phase extraction method was used to assist the extraction of total flavonoids and chlorogenic acid in Eucommia ulmoides Oliver. The optimal extraction process was determined by single factor and Box-Behnken response surface method test， and the total flavonoids and chlorogenic acid in Eucommia ulmoides extract were separated by ethanol/inorganic salt aqueous two-phase system. The results showed that under the optimal extraction conditions， the best aqueous two-phase extraction system for total flavonoids in Eucommia ulmoides was 50% ethanol content with 20% mass fraction of K2HPO4， the phase ratio R was 2.93 and the distribution ratio D was 10.35， and the extraction ratio could reach 77.94%. The best aqueous two-phase extraction system for chlorogenic acid was 60% ethanol with 20% K2HPO4 in water， the phase ratio R was 3.43 and the distribution ratio D was 12.32 with the extraction ratio up to 78.22%. The dual aqueous phase extraction technology with mild development conditions， stable phase and short time is great significant for the development and utilization of Eucommia ulmoides.

Key words： Eucommia ulmoides Oliver; total flavonoids; chlorogenic acid; aqueous two-phase system; purification

杜仲（Eucommia ulmoides Oliver），落葉喬木，高可達(dá)20 m，樹皮灰褐色、粗糙，芽體卵圓形，外面發(fā)亮，紅褐色，葉橢圓形、卵形或矩圓形，薄革質(zhì)，長6～15 cm，寬3.5～6.5 cm，在中國有著悠久的歷史，是中國獨(dú)有的一種珍稀樹種，被列為國家二級(jí)保護(hù)野生藥材物種。其性溫，味甘，歸肝、腎經(jīng)，具有補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、安胎的功效[1]，在醫(yī)療、保健和食品領(lǐng)域，杜仲都有著良好的開拓空間。杜仲提取物主要活性成分有總黃酮和綠原酸，總黃酮具有降血壓、降血脂、抗氧化、抗腫瘤和調(diào)節(jié)骨代謝等廣泛的藥理作用[2-5]，綠原酸具有降血壓、增高白血球、抗菌、抗病毒和腫瘤、增強(qiáng)免疫力、清除體內(nèi)自由基等功效[6-9]。因此，對(duì)杜仲總黃酮和綠原酸的提取工藝研究有著良好的發(fā)展前景。

目前，杜仲總黃酮和綠原酸常用的提取方法有水提法、酶解法和醇提取等。水提法提取液黏度大，過濾濃縮困難，提取物容易發(fā)生霉變;酶解法所需要的反應(yīng)時(shí)間長，所用的儀器與設(shè)備要求比較高，且酶是蛋白質(zhì)，受溫度影響比較大，容易引起含糖成分的過濾困難;醇提法提取物成分復(fù)雜，有效成分分離難度較大，但提取率相對(duì)較高，如何將所需要的活性成分從其提取物中分離出來就顯得尤為重要。雙水相萃取技術(shù)是利用親水有機(jī)溶液的水溶液形成的雙水相，利用被分離物在兩相中溶解度的差異進(jìn)行兼具提取和分離雙重功能的高效分離技術(shù)[10，11]。利用雙水相體系可以為生物物質(zhì)提供良好的生物環(huán)境[12]，可實(shí)現(xiàn)杜仲有效成分的提取分離[13，14]。

本研究以陜西省地道藥材杜仲為研究對(duì)象，采用雙水相萃取法輔助醇提法提取純化杜仲中的總黃酮和綠原酸。通過單因素試驗(yàn)和Box-Behnken響應(yīng)面法確定最佳提取工藝，再經(jīng)有機(jī)相與無機(jī)鹽形成的雙水相體系將杜仲中的總黃酮和綠原酸有效分離，運(yùn)用相平衡原理分析總黃酮和綠原酸在各類不同的無機(jī)鹽與有機(jī)相乙醇形成的雙水相體系中的分配性質(zhì)[15]，實(shí)現(xiàn)杜仲總黃酮和綠原酸的分離與初步純化。