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    豬瘟疫苗的研究進(jìn)展

    2018-02-15 03:38:43楊森溫書香李君艷
    畜牧獸醫(yī)科學(xué) 2018年1期
    關(guān)鍵詞:野毒毒力毒株

    楊森,溫書香,李君艷

    (1.漯河市郾城區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心, 河南 漯河 462300;2.漯河市動物疫病預(yù)防控制中心,河南 漯河 462300)

    1 弱毒苗和滅活苗

    弱毒苗和滅活苗均為傳統(tǒng)疫苗,1988年Koenen等人認(rèn)為,用結(jié)晶紫滅活苗免疫豬只,疫苗的安全性和免疫保護(hù)效果都存在一定的局限性,對豬瘟的防控效果不是很理想。后來,科研工作者對豬瘟病毒進(jìn)行兔體反復(fù)傳代和致弱,在傳至250代和800代時分別獲得了ROVAC株和高度致弱的LPC株。經(jīng)過大量的實驗驗證,LPC株的免疫效果和免疫保護(hù)力要比ROVAC株好得多。其中LPC株在我國臺灣地區(qū)廣泛應(yīng)用。1954~1955年我國科學(xué)家周泰沖及其研究團(tuán)隊將豬瘟強(qiáng)毒株在兔體內(nèi)傳到214代成功研制出兔化弱毒疫苗,而后繼續(xù)傳代到480次,選育出的一株毒株對豬基本沒有毒力,但仍然具有較好的免疫原性。我國將其命名為“54-III系兔化毒”,我國自行研制的豬瘟疫苗弱毒株的推廣應(yīng)用表明,單次免疫就可以起到很好的免疫保護(hù)作用?!?4-III系兔化毒”疫苗其超高的免疫保護(hù)力、安全性、以及在斷奶仔豬、懷孕母豬、免疫抑制病的豬只身上都不會引起發(fā)病等優(yōu)點,被世界各國認(rèn)可。

    此外其他國家也在致力于研發(fā)豬瘟弱毒疫苗。例如日本用豬瘟野毒ADL株通過鼠腎細(xì)胞傳代142次,牛的睪丸細(xì)胞傳代26次進(jìn)行病毒毒力的弱化,得到了在低溫條件下繁殖的細(xì)胞培養(yǎng)弱毒株。法國研究者用豬瘟的Alfort毒株致弱的Thiveral株具有較好的免疫效果,且弱毒株毒力不反強(qiáng)。

    傳統(tǒng)疫苗具有較好的免疫原性、安全高效,遺傳穩(wěn)定等特點。在我國仍然以弱毒疫苗免疫來控制豬瘟的爆發(fā)流行。但弱毒疫苗免疫在后期的血清學(xué)檢測中存在一個問題,也即是無法鑒別診斷出是疫苗免疫還是野毒感染造成的抗體陽性。這對豬瘟的防控也是不利的。此外,免疫的弱毒疫苗也可能與野毒株進(jìn)行基因重組,造成毒力反強(qiáng),毒力反強(qiáng)毒株可以通過垂直傳播造成母豬產(chǎn)死胎,弱仔等現(xiàn)象。因此,要研制出既能產(chǎn)生較好免疫力,又可以鑒別診斷出野毒感染和疫苗免疫的疫苗仍然有一定的難度。

    2 基因工程疫苗

    2.1 亞單位疫苗

    亞單位疫苗主要是將病原體自身的一個組成部分進(jìn)行人工克隆、純化,制備的一種疫苗。亞單位疫苗具有安全、可靠、特異性強(qiáng)、易于規(guī)模化生產(chǎn)等優(yōu)點。豬瘟亞單位疫苗的研發(fā)主要針對Ems和E2為基礎(chǔ)進(jìn)行的。生產(chǎn)亞單位疫苗的表達(dá)系統(tǒng)有原核表達(dá)系統(tǒng)和真核表達(dá)系統(tǒng)。研究表明真核表達(dá)系統(tǒng)在表達(dá)蛋白的過程中,其加工和修飾過程與哺乳動物類似,表達(dá)的蛋白在免疫效果和穩(wěn)定性等諸多方面都優(yōu)越于表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)的蛋白。此外,用E2和E0亞單位疫苗免疫豬,可以有效區(qū)分豬只是免疫接種還是感染野毒產(chǎn)生的抗體,這對于規(guī)?;B(yǎng)豬場檢測是否有豬瘟野毒感染非常重要。但隨著對亞單位疫苗的不斷深入研究發(fā)現(xiàn),亞單位疫苗也存在著諸多問題,例如,E2亞單位疫苗需要對豬群進(jìn)行兩次免疫才能起到免疫保護(hù)作用,且免疫后需要15~30d才能產(chǎn)生免疫保護(hù)。另外,隨之而生的亞單位的鑒別診斷試劑盒的敏感性不高,這些因素大大限制了亞單位疫苗的應(yīng)用。

    2.2 基因缺失苗

    基因缺失疫苗中研發(fā)較為成熟的是豬偽狂犬病基因缺失疫苗,在豬偽狂犬基因缺失苗的免疫后,用鑒別診斷試劑盒能夠有效區(qū)分疫苗免疫和野毒感染。因此可以通過基因工程技術(shù)或者自然流失技術(shù)將豬瘟病毒毒力基因缺失,從而獲得弱毒苗,2000年Widjojoatmodjo等人構(gòu)建了兩株C株缺失突變株FLc22和FLc23,建立了能夠表達(dá)豬瘟E2蛋白和Ems蛋白的細(xì)胞系SK6,用這兩種毒株免疫的豬只可以抵抗豬瘟強(qiáng)毒株的攻擊。Van Gennip的等人將E2基因的全部基因,部分基因進(jìn)行缺失、構(gòu)建了3種缺失株。免疫效力實驗表明,這3種毒株的免疫效力均無法與Ems基因缺失株相比,但是Flc4能夠抵抗強(qiáng)毒致死量的攻擊,其他兩個毒株只能提供免疫保護(hù)。

    2.3 活載體疫苗

    豬瘟病毒活載體疫苗的制作過程主要是將目標(biāo)基因植入載體中,通過激活插入抗原的體液免疫和細(xì)胞免疫應(yīng)答,從而誘導(dǎo)產(chǎn)生長時間的免疫反應(yīng)。重組病毒活載體疫苗的一個最大的優(yōu)點就是可以通過鑒別診斷試劑盒區(qū)分野毒感染和免疫接種。常用于豬瘟病毒活載體疫苗的靶基因主要有E2和Ems,而活載體主要有低毒力的痘苗、偽狂犬病毒和牛病毒性腹瀉病毒。痘苗病毒的遺產(chǎn)物質(zhì)是雙鏈DNA,他的一個優(yōu)點是許多基因可以缺失,但并不干擾該病毒的復(fù)制,因此是病毒活載體的良好材料。然而,該病毒能夠引起給動物接種的人員的感染和發(fā)病。考慮到公共安全問題,痘病毒載體的應(yīng)用受到了大大的限制。豬瘟-豬偽狂犬病毒載體疫苗對于已經(jīng)感染或者已經(jīng)免疫過豬瘟疫苗的動物不產(chǎn)生免疫保護(hù),所以,豬偽狂犬病毒載體的使用仍然受限。牛病毒性腹瀉病毒與豬瘟病毒具有明顯的交叉反應(yīng)。

    在豬瘟疫苗的研發(fā)過程中,新的疫苗不斷涌現(xiàn)。除了上述介紹的常見疫苗外,還有一些CDNA、DNA疫苗、表位苗等。新的疫苗若想取代傳統(tǒng)疫苗,主導(dǎo)市場,科研力量、人才、資金等方面都需要加大力度。

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