草魚幼體耳石的茜素紅S標(biāo)記效果研究

闕江龍 李彩剛 賀剛 華崇新 傅培峰 王昌來

摘要：在水溫26℃～29℃下，利用不同濃度組（0 mg/L、50 mg/L、75 mg/L、100 mg/L、125 mg/L）的茜素紅S溶液對平均體長為5.7～6.1 cm的草魚（Ctenopharyngodon idellus）幼苗分別浸泡12 h、24 h和36 h，分析茜素紅S的染色效果。結(jié)果表明：當(dāng)溶液濃度達(dá)125 mg/L時，染液對草魚具有較強(qiáng)的毒性，幼魚絕大部分死亡，當(dāng)濃度不高于100 mg/L時，幼魚全部存活。茜素紅S能在草魚幼體上形成紅色標(biāo)記環(huán)，在安全濃度范圍內(nèi)，濃度越高，染色越明顯，24 h染色效果優(yōu)于12 h，而浸泡36 h耳石顏色未出現(xiàn)明顯加深。草魚幼體的最佳染色方式為24 h、100 mg/L。

關(guān)鍵詞：草魚;茜素紅S;耳石;標(biāo)記

中圖分類號：S932 ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

草魚是典型的草食性魚類，棲息于平原地區(qū)的江河湖泊，一般喜居于水的中下層和近岸多水草區(qū)域。性活潑，游泳迅速，常成群覓食。草魚幼魚期則食幼蟲，藻類等，在干流或湖泊的深水處越冬，生殖季節(jié)親魚有溯游習(xí)性[1]。草魚是優(yōu)良的養(yǎng)殖魚類，也是中國傳統(tǒng)的四大淡水養(yǎng)殖魚類之一，經(jīng)濟(jì)價值較高。

目前環(huán)境污染、沿江堤壩建設(shè)，破壞了草魚生長環(huán)境，阻隔其溯河洄游產(chǎn)卵[2]，江河湖泊草魚資源衰退嚴(yán)重。江西省高度重視漁業(yè)資源種群的恢復(fù)，多年來堅持“四大家魚”增殖放流工作，草魚作為主要放流品種，僅2019年放流達(dá)1億尾。為合理評估放流效果，完善放流結(jié)構(gòu)與方式，需對放流苗種進(jìn)行標(biāo)記跟蹤監(jiān)測，而探尋合理的標(biāo)記方法是目前追蹤放流魚類的一大難題[3]。

本文利用茜素紅S染液對草魚幼苗浸泡，觀察耳石標(biāo)記效果，探索該熒光染料標(biāo)記草魚的最適濃度及浸泡時間，旨在尋找出一合理可行的標(biāo)記方法，為大規(guī)模增殖放流評估工作提供技術(shù)支撐。

1 ?材料和方法

1.1 ?材料

將50日齡草魚幼魚（200尾）在盛有曝氣48h的自來水玻璃缸中暫養(yǎng)1 d。實驗試劑茜素紅S分子式為C14H7NaO7S，中文別名為茜素磺酸鈉;茜素S;茜素紅S;茜素胭脂紅;1，2-二羥基蒽醌-3-磺酸鈉（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

1.2 ?方法

茜素紅S浸泡液濃度和浸泡時間見表1，設(shè)定4個茜素紅S標(biāo)記濃度：50 mg/L、75 mg/L、100 mg/L、125 mg/L和一個空白對照組。試驗在透明的的玻璃水族箱中進(jìn)行，開始時隨機(jī)在各濃度溶液（10L）中加入10尾草魚，浸泡過程中向水體中充氣，浸泡結(jié)束后將幼魚撈出。

耳石的摘取和測定：在Mshot解剖鏡（MD50）下，用解剖鑷子和解剖針快速取出耳石，蒸餾水洗滌，95%乙醇脫水，光學(xué)顯微鏡下觀察標(biāo)記效果，并拍照。按照無（–）、可見（+）、明顯（++）、強(qiáng)烈（+++）記錄耳石熒光反應(yīng)強(qiáng)度[4]。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?標(biāo)記安全濃度

當(dāng)茜素紅S溶液濃度在50～100 mg/L、水溫26℃～29℃、浸泡時間12～36 h時，草魚幼魚成活率為100%，當(dāng)濃度升至125 mg/L時，染液對草魚具有較強(qiáng)的毒性，幼魚全部死亡（表1）。

2.2 ?標(biāo)記效果

解剖鏡可見光下觀察耳石，未染色的草魚耳石呈透明灰色。經(jīng)茜素紅s浸染的耳石表面可見紅色環(huán)。在安全濃度范圍內(nèi)，隨著染液濃度的升高，標(biāo)記顏色越明顯。三個浸泡時間組中，耳石標(biāo)志強(qiáng)度均表現(xiàn)為100 mg/L>75 mg/L>50 mg/L。12 h浸泡時，50 mg/L濃度組中未見標(biāo)記色，75 mg/L和100 mg/L溶液組可見標(biāo)記色。24 h和36 h浸泡下，50 mg/L和75 mg/L下可見標(biāo)記色，達(dá)100 mg/L濃度時，草魚耳石標(biāo)記色明顯。

3 ?討論

3.1 ?最佳染色條件

草魚在各時期對茜素紅s的耐受性及敏感度不一樣[5]，[6]，最適染色條件也不同。由表1可知，當(dāng)茜素紅s濃度在0～100 mg/L時，各濃度組草魚幼苗未出現(xiàn)死亡，當(dāng)染液濃度達(dá)到125 mg/L，12 h和36 h組幼魚全部死亡，24 h組只有一條存活，表明茜素紅S濃度為125 mg/L時對草魚幼魚有明顯的致死作用，濃度不高于100 mg/L的浸泡液對其無明顯的致死作用，50日齡草魚幼魚的茜素紅S安全濃度為100 mg/L。

浸泡24 h的各濃度組耳石染色效果比12 h明顯，尤其是100 mg/L濃度組，能見明顯標(biāo)記環(huán)（圖2～圖3）。染色時間延長至36 h，50 mg/L和75 mg/L濃度組的耳石標(biāo)記環(huán)仍為可見，75 mg/L濃度組為明顯，相較于24h染色效果，36 h未發(fā)生明顯變化。因此，12 h染色時間較短，效果不明顯，36 h染色效果沒有明顯增加，所以草魚幼魚的最佳染色時間為24 h。

綜上所述，50日齡草魚幼魚的最佳茜素紅S標(biāo)記方案為100 mg/L溶液浸泡24 h。

3.2 ?在增殖放流中的應(yīng)用

用于標(biāo)記魚類的熒光染料有多種[7]，應(yīng)用較多的主要由茜素絡(luò)合物和茜素紅S[7]-[13]，筆者之前也嘗試過利用茜素絡(luò)合物標(biāo)記幼魚，但效果不佳，一方面是該染料對幼魚的毒性較大，較低濃度就能對幼魚產(chǎn)生致死效應(yīng);另一方面耳石染色程度較淡，只在耳石邊緣行成標(biāo)記環(huán)[14];最后茜素絡(luò)合物較昂貴，單價遠(yuǎn)高于茜素紅S?？傮w上來說，茜素紅S更適用于大規(guī)模增殖放流標(biāo)記。

茜素紅S通過與耳石上的鈣鹽以鰲和方式形成在解剖鏡下可見的紅色復(fù)合物而達(dá)到染色的效果，各種類之間最佳染色濃度存在差異。筆者利用茜素紅S標(biāo)記鳙魚幼體，標(biāo)記效果明顯，耳石染色度可達(dá)強(qiáng)烈，但最佳浸泡液時間和濃度和草魚一致，亦為24 h、100 mg/L。因此，在大規(guī)模進(jìn)行四大家魚放流時，鳙、草魚可采用相同的茜素紅S浸泡方式。

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