熒光染色法聯(lián)合KOH 濕片法在皮膚淺部真菌檢查中的效果評(píng)價(jià)

任潤(rùn)霞

（聯(lián)勤保障部隊(duì)第940 醫(yī)院皮膚科 甘肅 蘭州 730050）

皮膚淺部真菌感染是一種臨床發(fā)病率較高的皮膚疾病，多數(shù)該病患者均需參考其真菌檢驗(yàn)結(jié)果方可進(jìn)行最終的臨床診斷。當(dāng)前，臨床方面較為常用的真菌檢驗(yàn)方法包括培養(yǎng)法、直接涂片鏡檢法、KOH 濕片法等，其中以KOH 濕片法最為常用，但該檢驗(yàn)方法所得到的檢驗(yàn)結(jié)果具有一定的主觀性及干擾性，進(jìn)而易出現(xiàn)誤檢或漏檢的情況[1]。近年來(lái)，隨著檢驗(yàn)技術(shù)水平的不斷提升，熒光染色法現(xiàn)已在真菌檢查中得到了有效應(yīng)用，該檢驗(yàn)方法可通過(guò)使真菌細(xì)胞壁的纖維素及幾丁質(zhì)與染色劑結(jié)合，進(jìn)而使菌體有效著色，并于熒光顯微鏡下進(jìn)行真菌結(jié)構(gòu)的有效觀察[2-3]。本次研究主要探討了熒光染色法聯(lián)合KOH 濕片法在皮膚淺部真菌檢查中的應(yīng)用效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1. 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019 年1 月—2020 年1 月期間于本院就診的80 例疑似皮膚淺部真菌感染患者作為研究對(duì)象，并于患者的疑似淺部真菌感染部位進(jìn)行標(biāo)本取材，取材內(nèi)容包括皮屑70 例，甲屑7例，毛發(fā)3 例，上述取材標(biāo)本均為一式兩份，并對(duì)取材標(biāo)本分別進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)完畢后，將KOH 濕片法檢驗(yàn)結(jié)果納入對(duì)照組，將KOH 濕片法聯(lián)合熒光染色法檢驗(yàn)結(jié)果納入觀察組。

1.2 方法

（1）標(biāo)本采集：①毛發(fā)：對(duì)標(biāo)本采集部分進(jìn)行酒精消毒后，使用鑷子將病損處毛發(fā)拔出；②皮屑：消毒完畢后，應(yīng)用鈍刀片對(duì)皮損部位邊緣處皮屑進(jìn)行刮取收集；③甲屑：消毒完畢后，應(yīng)用鈍刀對(duì)病甲及健甲交匯部位處進(jìn)行采集，甲屑標(biāo)本應(yīng)盡量接近甲下深處病損部位。

（2）材料準(zhǔn)備：①10%KOH 溶液：將劑量為10g 的KOH 置于100ml 的純水中混勻；②熒光染色試劑由珠海貝索生物技術(shù)有限公司提供；③顯微鏡為日本奧林巴斯公司生產(chǎn)的奧林巴斯CX31 顯微鏡，增加熒光模塊。

（3）檢驗(yàn)方法：①KOH 濕片法：將一份檢驗(yàn)標(biāo)本放置于載玻片中心位置，滴一滴10%KOH 溶液，之后覆蓋蓋玻片，并將氣泡去除，應(yīng)用酒精燈進(jìn)行微加熱處理后，將溢出溶液用棉簽拭去，然后應(yīng)用普通光學(xué)顯微鏡進(jìn)行觀察。②熒光染色法：將另一份檢驗(yàn)標(biāo)本放置于載玻片中心，滴一滴熒光染色試劑，之后覆蓋蓋玻片，去除氣泡，將溢出溶液用棉簽拭去后，靜置2min 左右，然后應(yīng)用熒光顯微鏡進(jìn)行觀察及圖像采集。

1.3 觀察指標(biāo)

對(duì)比兩組不同部位標(biāo)本的檢驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性率。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

應(yīng)用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)文中數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以標(biāo)準(zhǔn)差形式（±s）表示，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以% 形式表示，采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 代表數(shù)據(jù)對(duì)比差異存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2. 結(jié)果

觀察組的各部位標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果及合計(jì)結(jié)果陽(yáng)性率（88.8%）均高于對(duì)照組（70.0%），差異顯著（P＜0.05），見表1。

表1 兩組不同部位標(biāo)本的檢驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性率對(duì)比[n（%）]

3. 討論

皮膚淺部真菌病是感染性皮膚疾病中較為常見的疾病類型之一，目前，臨床方面多采用直接圖片鏡檢法進(jìn)行真菌感染檢查，而KOH 濕片法作為應(yīng)用范圍最為廣泛的直接鏡檢法，具有檢驗(yàn)操作便捷、價(jià)格低廉等優(yōu)勢(shì)，但由于該檢驗(yàn)方法具有一定的主觀性，進(jìn)而可導(dǎo)致檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性顯著降低，從而易造成誤檢或漏檢的情況[4]。熒光染色法是一種含有熒光素物質(zhì)的復(fù)合溶液，熒光素可通過(guò)對(duì)幾丁質(zhì)重組酶進(jìn)行有效標(biāo)記，并與真菌細(xì)胞壁中的多糖物質(zhì)進(jìn)行結(jié)合，從而形成強(qiáng)熒光復(fù)合物，進(jìn)而可致使真菌發(fā)出亮色熒光，以增加菌絲及孢子的可識(shí)別度，該檢驗(yàn)方法的操作步驟相對(duì)簡(jiǎn)單，且檢驗(yàn)過(guò)程中無(wú)需對(duì)標(biāo)本進(jìn)行額外的加熱處理，從而有效減少了檢驗(yàn)耗時(shí)[5-6]。

在本次研究中，通過(guò)對(duì)80 例疑似皮膚淺部真菌感染患者的各部位標(biāo)本組織進(jìn)行真菌檢驗(yàn)分析后發(fā)現(xiàn)，觀察組的各部位標(biāo)本檢驗(yàn)結(jié)果及合計(jì)結(jié)果陽(yáng)性率均高于對(duì)照組（P＜0.05）。進(jìn)而說(shuō)明，熒光染色法聯(lián)合KOH 濕片法在提升皮膚淺部真菌陽(yáng)性檢出率方面更具有優(yōu)勢(shì)。

綜上所述，在皮膚淺部真菌檢查中聯(lián)合應(yīng)用熒光染色法及KOH 濕片法，有助于提升皮膚淺部真菌檢出率，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。