山西省某養(yǎng)殖場蛋雞H7N9 流感暴發(fā)調(diào)查

胡明明，白艷艷，王治維，圖門巴雅爾，孫 杰，寧 艷，雷 沖，王 錦，趙 凱，左 曉，曾邦權(quán)，雷宇平，王仲兵

（1.山西省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，山西太原 030027；2.榆林市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，陜西榆林 719000；3.云南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南昆明 650201）

H7N9 流感病毒是甲型流感病毒中的一種，屬正黏病毒科甲型流感病毒屬，為有囊膜的分節(jié)段單股負(fù)鏈RNA 病毒，除可感染禽外，還可感染人、豬、馬、水貂和海洋哺乳動(dòng)物等。H7N9 流感病毒在我國流行初期對禽類的致病性較弱，使感染禽類不表現(xiàn)明顯臨床癥狀[1-2]，但隨著毒力變化，對禽類致病性增強(qiáng)，可引起禽類嚴(yán)重發(fā)病死亡[3]，對我國養(yǎng)禽業(yè)造成重大影響。

2018年3月30日，山西省臨汾市洪洞縣某養(yǎng)殖戶報(bào)告其飼養(yǎng)的蛋雞出現(xiàn)大量異常死亡。經(jīng)國家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室確診，證實(shí)該起疫情為H7N9 流感暴發(fā)。為查明病因，了解疫情分布，通過現(xiàn)場剖檢、實(shí)驗(yàn)室診斷、問卷調(diào)查、周邊排查等方式，對該起疫情進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查，尋找可能的風(fēng)險(xiǎn)因素，進(jìn)而提出防控建議，評估防控效果。

1 方法

1.1 病例定義

1.1.1 可疑病例 個(gè)體水平：2018年3月27—31日，疫情養(yǎng)殖場出現(xiàn)的病死蛋雞；場群水平：3月27日—4月30日，洪洞縣出現(xiàn)禽類死亡數(shù)量異常增多的養(yǎng)殖場戶。

1.1.2 確診病例 經(jīng)國家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室檢測為H7N9 流感病毒核酸陽性的可疑病例。

1.2 調(diào)查方式

1.2.1 現(xiàn)場問卷調(diào)查 采用問卷調(diào)查方式，對場內(nèi)基本情況、雞群免疫情況、病死情況、飼養(yǎng)管理情況、調(diào)運(yùn)情況等進(jìn)行調(diào)查。通過現(xiàn)場入戶調(diào)查和全縣養(yǎng)禽場戶逐戶排查，了解疫情空間分布和周邊易感動(dòng)物分布。

1.2.2 現(xiàn)場剖檢 剖檢病死和發(fā)病蛋雞，觀察病理變化。

1.2.3 實(shí)驗(yàn)室診斷

1.2.3.1 血清學(xué)檢測 采集雞血清進(jìn)行血凝抑制（HI）試驗(yàn)，檢測H5、H7 亞型抗體。采用哈爾濱國生生物科技股份有限公司生產(chǎn)的H5 亞型抗原、H7 亞型抗原進(jìn)行檢測，批號分別為2017042、2017007。判定標(biāo)準(zhǔn)為：HI 效價(jià)≤3log2，判為陰性；等于4log2，為可疑，需重復(fù)試驗(yàn)；≥5log2，為陽性。

1.2.3.2 病原學(xué)檢測 采集雞咽/泄殖腔拭子、組織樣品進(jìn)行H5、H7 亞型流感病毒熒光定量PCR病原學(xué)檢測。采用廣州維伯鑫生物科技有限公司生產(chǎn)的H5、H7 亞型流感病毒實(shí)時(shí)熒光RT-PCR 檢測試劑盒進(jìn)行檢測，批號分別為AIVH520180211P、AIVH720171220P。H5 亞型判定標(biāo)準(zhǔn)為：Ct ≤30并出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，為陽性；30 ＜Ct ＜37并出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線，為可疑，需重復(fù)試驗(yàn)，如仍是可疑，判定為陽性；Ct ≥37 為陰性。H7 亞型判定標(biāo)準(zhǔn)為：Ct ≤30 并出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線為陽性；30 ＜Ct ＜35 并出現(xiàn)特異性擴(kuò)增曲線為可疑，需重復(fù)試驗(yàn)，如仍是可疑，則判定為陽性；Ct ≥35 為陰性。

1.3 數(shù)據(jù)來源與分析

通過養(yǎng)殖場主口述，結(jié)合現(xiàn)場排查，獲得蛋雞死亡時(shí)間、死亡數(shù)量、撲殺時(shí)間等相關(guān)數(shù)據(jù)；用Excel 進(jìn)行整理，并繪制流行病學(xué)曲線。

2 調(diào)查結(jié)果

2.1 基本情況

2.1.1 飼養(yǎng)情況 該養(yǎng)殖場位于臨汾市洪洞縣龍馬鄉(xiāng)，為自家庭院養(yǎng)殖；3 棟雞舍位于住宅東側(cè)，雞舍間距為4 m；發(fā)病舍位于北側(cè)，中間為空舍，南側(cè)舍未發(fā)病（圖1）。該養(yǎng)殖場養(yǎng)殖環(huán)境差，無糞污清理設(shè)施、通風(fēng)設(shè)施。疫情發(fā)生前，全場共存欄蛋雞1 794 只，其中發(fā)病雞舍812 只（315日齡）、未發(fā)病雞舍982 只（260日齡）。養(yǎng)殖場主個(gè)人負(fù)責(zé)飼喂。

圖1 養(yǎng)殖場禽舍分布

2.1.2 引種情況 2017年5月15日，該場從洪洞縣某養(yǎng)殖場引進(jìn)商品蛋雞海蘭褐1 000 只至北側(cè)雞舍（發(fā)病舍）；2017年7月10日，從山西省某養(yǎng)殖場引進(jìn)商品蛋雞海蘭褐1 000 只至南側(cè)雞舍。

2.1.3 免疫情況 2017年9月23日，該場對兩棟雞舍免疫了H5 亞型二價(jià)滅活疫苗（Re-6 株+Re-8株）；2018年3月5日，對南側(cè)雞舍免疫了H5+H7 亞型二價(jià)滅活苗（H5N1Re-8 株+H7N9Re-1株），而未對北側(cè)雞舍免疫。

2.1.4 飼料和飲水情況 該場蛋雞飼料一直由當(dāng)?shù)啬筹暳喜抗?yīng)，最近于3月20日購進(jìn)1.5 t；所用水源來自自打井。

2.1.5 人員和車輛進(jìn)出情況 2018年3月20日，運(yùn)料車到過該場；3月25日，雞蛋銷售商到過該場。同村另一養(yǎng)殖場（Y 場，排查時(shí)發(fā)現(xiàn)H7 亞型流感病原學(xué)陽性）場主與該養(yǎng)殖場場主來往密切，3月6—26日共進(jìn)場8次，且未進(jìn)行任何消毒便進(jìn)入雞舍。

2.1.6 活雞調(diào)出、調(diào)入和雞蛋銷售情況 該場近期無活雞調(diào)出、調(diào)入，3月25日銷售雞蛋112.5 kg。

2.2 發(fā)病死亡情況

2018年3月27日，北側(cè)雞舍部分成年蛋雞出現(xiàn)精神萎靡、食欲減退、體溫升高、腹瀉等癥狀，并零星死亡。至3月31日，共死亡蛋雞699 只，襲擊率為86.08%。

2.2.1 時(shí)間分布 自2018年3月27日養(yǎng)殖場內(nèi)出現(xiàn)死亡病例，到3月31日介入調(diào)查并進(jìn)行撲殺期間，單日死亡數(shù)量呈現(xiàn)持續(xù)增長態(tài)勢（圖2）。

圖2 養(yǎng)殖場蛋雞疫情流行曲線

2.2.2 群間和空間分布 從養(yǎng)殖場內(nèi)部看，疫情具有明顯的空間和群間分布特征。發(fā)病死亡蛋雞全部為位于北側(cè)雞舍，為315日齡蛋雞；南側(cè)雞舍未發(fā)病，為260日齡蛋雞。養(yǎng)殖場只有簡單的手動(dòng)噴霧消毒器，無規(guī)范的消毒滅源制度，外來人員、車輛進(jìn)入場內(nèi)及雞舍無消毒措施，每月不定期對雞舍消毒1～2 次。從發(fā)病情況看，具有明顯的聚集性，發(fā)病場（X 場）和排查陽性場（Y 場）為相鄰場（圖3），其余5 個(gè)蛋雞場均為陰性場。

圖3 疫情養(yǎng)殖場及周邊養(yǎng)殖場分布

2.3 疫情診斷

2.3.1 臨床癥狀 發(fā)病雞精神萎靡、食欲減退、呼吸困難、體溫升高；部分病雞肉髯水腫，呼吸伴有啰音，排綠色、黃綠色稀便；病程短，死亡快，個(gè)別病例無癥狀突然死亡。

2.3.2 剖檢變化 病死雞氣管不同程度出血；肝臟有灰白色壞死灶，質(zhì)脆易碎；胰腺腫大、出血；腺胃和肌胃交界處呈點(diǎn)狀出血；十二指腸出血或壞死；盲腸扁桃體腫大、出血；泄殖腔出血。

2.3.3 實(shí)驗(yàn)室診斷 采集23 份血清學(xué)樣品（發(fā)病舍11 份、未發(fā)病舍12 份），53 份病原學(xué)樣品（發(fā)病舍20 份咽/泄殖腔拭子、11 份臟器，未發(fā)病舍20 份咽/泄殖腔拭子、2 份臟器），分別進(jìn)行H5、H7 亞型抗體檢測和病原學(xué)檢測。所有血清樣品H5 亞型抗體全部為陽性；發(fā)病舍H7 亞型血清樣品抗體全部為陰性，未發(fā)病舍全部為陽性。所有病原學(xué)樣品均為H5 亞型陰性；發(fā)病舍病原學(xué)樣品H7 亞型陽性率為93.55%（29/31），未發(fā)病舍病原學(xué)樣品全部為陰性（表1）。4月3日，國家禽流感參考實(shí)驗(yàn)室確診病原為H7N9 流感病毒，其HA與NA 基因與2018年3月引發(fā)陜西省H7N9 感疫情的病原同源率較高，分別為99.8%和99.9%。

3 病因假設(shè)與分析

3.1 未免疫H7 亞型禽流感疫苗

兩棟雞舍除免疫情況不同外，其他飼養(yǎng)條件基本相同。發(fā)病雞舍未免疫H7N9 流感疫苗可能是導(dǎo)致疫情發(fā)生的直接原因。

3.2 人員物理性帶入病毒

疫情發(fā)生后進(jìn)行監(jiān)測排查發(fā)現(xiàn)，同村Y 養(yǎng)殖場為H7 亞型流感病原學(xué)陽性場。這兩個(gè)養(yǎng)殖場場主來往密切，疫情暴發(fā)前20 d 內(nèi)，有頻繁互相串門行為，且進(jìn)入養(yǎng)殖場前未采取消毒等生物安全措施。Y 養(yǎng)殖場雖監(jiān)測發(fā)現(xiàn)病原學(xué)陽性，但因其進(jìn)行了H7N9 流感免疫，所以未發(fā)生蛋雞大量死亡。綜合考慮這些因素，推測人員物理性帶入病毒，引發(fā)疫情的可能性較大。

3.3 車輛引入病毒

疫情養(yǎng)殖場所在村的7 個(gè)蛋雞養(yǎng)殖場由同一個(gè)飼料商、同一輛運(yùn)輸車供應(yīng)飼料。蛋雞發(fā)病死亡前7 d，飼料運(yùn)輸車曾進(jìn)入該場，時(shí)間與高致病性禽流感的潛伏期相吻合。疫情養(yǎng)殖場對飼料運(yùn)輸車輛無任何消毒措施，且與另一H7N9 病原學(xué)陽性場（Y 場）有流行病學(xué)關(guān)聯(lián)。綜合考慮，通過飼料運(yùn)輸車輛交叉感染引入病毒的風(fēng)險(xiǎn)較高。

3.4 野生鳥類

該場周邊是大片楊樹林（圖3），適宜鳥類繁衍棲息。雞舍沒有防鳥網(wǎng)等設(shè)施，野鳥可以隨便飛入。在現(xiàn)場排查及疫情處置中，能看到雞舍及庭院樹上有成群野鳥棲息、飛行和采食雞飼料現(xiàn)象?，F(xiàn)場雖未發(fā)現(xiàn)有野鳥死亡，但不排除野鳥傳入病毒的可能。

3.5 飼料和飲水

疫點(diǎn)所在村共有7 個(gè)蛋雞養(yǎng)殖場，均由當(dāng)?shù)赝伙暳喜抗?yīng)飼料。除發(fā)病場（X 場）與Y 養(yǎng)殖場外，其他5 個(gè)場的H7 亞型流感病原學(xué)檢測均為陰性。對發(fā)病場的飼料樣品和水樣品進(jìn)行H7 亞型流感病原學(xué)檢測，均為陰性。因此，通過飼料和飲水傳入疫情的可能性較低。

4 疫情處置

4.1 限制移動(dòng)

劃定該養(yǎng)殖場和Y 養(yǎng)殖場為疫點(diǎn)；以疫點(diǎn)為中心，周圍3 km 內(nèi)的12 個(gè)行政村為疫區(qū)。對疫點(diǎn)進(jìn)行隔離，對疫區(qū)實(shí)行封鎖；在疫區(qū)設(shè)置12 個(gè)臨時(shí)動(dòng)物防疫消毒站卡，限制家禽及其產(chǎn)品移動(dòng)。

4.2 撲殺、無害化處理

對疫點(diǎn)內(nèi)家禽全部撲殺，共撲殺蛋雞5 675 羽，全部進(jìn)行焚燒后深埋處理。

4.3 緊急消毒

對疫點(diǎn)、疫區(qū)環(huán)境實(shí)施嚴(yán)格消毒，對污染物進(jìn)行無害化處理，累計(jì)消毒95.9 萬m2。

表1 實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果 單位：份

4.4 緊急排查

對全縣轄區(qū)內(nèi)2 511 個(gè)家禽養(yǎng)殖場戶開展疫情排查，共排查367.65 萬余只家禽。受威脅區(qū)內(nèi)，采取到場問詢和采樣檢測相結(jié)合的方式進(jìn)行排查；受威脅區(qū)外，采取現(xiàn)場問詢方式進(jìn)行排查。未發(fā)現(xiàn)其他H7N9 亞型流感疫情。

4.5 緊急免疫

對全縣家禽免疫情況進(jìn)行摸排，對已過保護(hù)期和未免疫的35.47 萬只家禽全部采用H5+H7 二價(jià)滅活苗（H5N1Re-8 株+H7N9Re-1 株）進(jìn)行緊急免疫。

5 討論

5.1 局限性

該起疫情由于發(fā)病急、死亡率高，發(fā)病數(shù)不易統(tǒng)計(jì)，因此調(diào)查中用死亡數(shù)代替發(fā)病數(shù)，用于計(jì)算襲擊率和繪制流行曲線。因疫情發(fā)生緊急，為將疫情釋放風(fēng)險(xiǎn)降到最低，現(xiàn)場以處置疫情為首要任務(wù)，未對排查出的陽性場（Y 場）進(jìn)行進(jìn)一步溯源調(diào)查。養(yǎng)殖場無完善的養(yǎng)殖檔案，部分情況只是從場主口述中獲取，存在一定的信息偏倚。

5.2 啟示

獸醫(yī)主管部門應(yīng)加強(qiáng)對全縣養(yǎng)禽場的強(qiáng)制免疫監(jiān)管，督促養(yǎng)殖場戶使用與當(dāng)?shù)亓餍卸局昶ヅ湟呙邕M(jìn)行免疫；同時(shí)要做好抗體監(jiān)測，對不合格的群體及時(shí)補(bǔ)免，以建立起有效免疫屏障[4-5]。

6 結(jié)論

通過現(xiàn)場調(diào)查、臨床診斷、病理解剖和實(shí)驗(yàn)室檢測，確定此次暴發(fā)為H7N9 流感。病原通過人員、車輛、野鳥帶毒傳入的可能性較大；養(yǎng)殖場因未進(jìn)行H7N9 亞型流感疫苗免疫，從而導(dǎo)致疫情暴發(fā)。建議使用與當(dāng)?shù)亓餍卸局昶ヅ湟呙邕M(jìn)行免疫，同時(shí)加強(qiáng)人員、車輛和野鳥的生物安全控制。