• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    解脂亞羅酵母Y-2對葡萄采后病害及赭曲霉毒素A的控制作用

    2020-09-01 01:57:48張曉云顧香玉趙利娜鄭香峰楊紅娟張紅印
    中國食品學(xué)報 2020年8期
    關(guān)鍵詞:傷口處酵母葡萄

    張曉云 顧香玉 趙利娜 鄭香峰 楊紅娟 李 軍 張紅印*

    (1 江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院 江蘇鎮(zhèn)江212013 2 江蘇科技大學(xué)糧食學(xué)院 江蘇鎮(zhèn)江212003)

    葡萄皮薄多汁, 在貯藏和運(yùn)輸過程中極易受到病原菌的侵染而引起腐爛變質(zhì), 降低其食用品質(zhì)和商業(yè)價值,并造成嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。純綠青霉(Penicillium verrucosum)[1-2]、 赭曲霉(Aspergillus ochraceus)[3]、炭黑曲霉(A. carbonarius)[4-6]以及黑曲霉(A. niger)[5-6]等致病菌不僅能引起葡萄采后腐爛, 還會產(chǎn)生有毒的次級代謝產(chǎn)物——赭曲霉毒素A(OTA)。OTA 主要以其腎毒性而聞名,此外還具有肝毒性、致癌性、致畸性、免疫以及遺傳毒性等[7]。 葡萄被產(chǎn)OTA 的病原菌侵染后,不僅造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失, 還會對人類健康造成極大的危害[8-9],必須采取有效的措施控制葡萄采后病害及OTA 污染??刂芆TA 產(chǎn)生菌的生長是控制葡萄及其制品OTA 污染的最有效措施[10-11]。 利用化學(xué)殺菌劑可有效控制OTA 產(chǎn)生菌的生長, 從而控制OTA 的污染。 然而,化學(xué)殺菌劑長期、大量的使用會使致病菌產(chǎn)生耐藥性,造成環(huán)境污染,其殘留和積累還會對人類健康造成危害[8,12]。 利用拮抗酵母進(jìn)行生物防治的方法逐漸引起國內(nèi)外研究人員的重視并呈現(xiàn)良好的應(yīng)用前景。

    微皺籃狀菌(Talaromyces rugulosus)O1 是本實(shí)驗(yàn)室從葡萄上分離、篩選到的能夠產(chǎn)生OTA 的致病菌[13],而解脂亞羅酵母(Yarrowia lipolytica)Y-2 是從葡萄上分離、 篩選到的1 株能夠體外降解OTA 的酵母菌株[14]。 本文以該酵母菌株為研究對象, 考察其對不同品種葡萄由微皺籃狀菌O1引起的采后病害以及OTA 積累的控制效果,以期為拮抗酵母在葡萄采后病害和OTA 控制中的應(yīng)用提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 主要設(shè)備與儀器

    全自動高壓蒸汽滅菌器,美國zealway 醫(yī)療器械有限公司;Eppendorf 5810R 高速冷凍離心機(jī),德國Eppendorf 公司;LRH-250 生化培養(yǎng)箱,上海一恒科技有限公司; 安捷倫1260 高效液相色譜儀,Agilent Technologies 公司。

    1.2 培養(yǎng)基

    1)NYDA 培養(yǎng)基 8 g 牛肉浸膏,5 g 酵母浸膏,20 g 瓊脂粉以及10 g 葡萄糖,溶解后用蒸餾水定容1 000 mL,121°C 滅菌20 min。

    2)PM 培養(yǎng)基 2 g 麥芽糖,10 g 蔗糖,5 g 酵母浸膏,5 g 蛋白胨, 用蒸餾水定容1 000 mL,121℃滅菌20 min。

    3)PDA 培養(yǎng)基 200 g 去皮土豆,將其切塊、煮沸20 min, 過濾并添加20 g 葡萄糖,20 g 瓊脂粉,用蒸餾水定容1 000 mL,115°C 滅菌20 min。

    1.3 微生物培養(yǎng)

    挑取2~3 環(huán)NYDA 斜面上的解脂亞羅酵母Y-2 于含有50 mL PM 培養(yǎng)基的三角瓶中,在28℃、 180 r/min 條件下振蕩培養(yǎng)36 h,然后在4 ℃、7 500×g 條件下離心10 min,收集菌體,用無菌水洗滌,重復(fù)此操作2 次。以無菌水調(diào)至合適濃度待用。

    挑取PDA 斜面上的微皺籃狀菌O1 孢子,于PDA 斜面上劃線, 置于25 ℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1 周,然后以無菌水洗下孢子, 調(diào)整孢子濃度為1×105孢子/mL。

    1.4 葡萄預(yù)處理

    采用商業(yè)成熟度良好且表面無破損、 質(zhì)地均勻、大小一致的葡萄,用自來水沖洗表面,然后用0.1%NaClO 溶液浸泡1 min, 自來水沖洗干凈,放入消毒塑料筐中于室溫晾干,備用。

    1.5 OTA 濃度的測定

    參考Yang 等[14]的方法,利用高效液相色譜(HPLC)測定OTA 濃度。 具體條件:Zorbax SBC18 色譜柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流動相為乙腈-1%乙酸(體積比60 ∶40),流速1.0 mL/min,進(jìn)樣量20 μL,柱溫30 °C,檢測波長和激發(fā)波長均為333 nm,發(fā)射波長460 nm。

    1.6 解脂亞羅酵母Y-2 處理對葡萄采后病害的控制作用

    參考Li 等[15]的方法,用打孔器在葡萄赤道處打孔3 mm(寬)×3 mm(深),每孔接種10 μL 解脂亞羅酵母Y-2 菌懸液。 2 h 后接種10 μL 微皺籃狀菌O1 孢子懸浮液(1×105孢子/mL)。 2 h 后用保鮮膜將塑料筐包裹起來,置于恒溫、恒濕培養(yǎng)箱內(nèi)(25°C,RH 95%)貯藏,分別記錄第14 天葡萄的腐爛直徑。 每框包含36 個葡萄,每個試驗(yàn)3 個平行,整個試驗(yàn)重復(fù)兩次。以無菌水代替解脂亞羅酵母Y-2 菌懸液作為對照組。

    考察解脂亞羅酵母Y-2 對不同品種葡萄(夏黑、巨峰、紅提)采后病害的控制作用,操作方法同上。 酵母菌懸液的濃度為1×108細(xì)胞/mL。

    考察不同濃度解脂亞羅酵母Y-2 對紅提葡萄采后病害的控制作用時, 酵母菌懸液的濃度分別為1×106,1×107,1×108,1×109細(xì)胞/mL。

    考察解脂亞羅酵母Y-2 處理對貯藏不同時間的紅提葡萄采后病害的控制作用, 酵母菌懸液的濃度為1×108細(xì)胞/mL, 記錄腐爛直徑的時間分別為9,11,13,15,17 d。

    1.7 解脂亞羅酵母Y-2 對葡萄中OTA 的控制作用

    操作同1.6 節(jié),14 d 時測定不同品種葡萄傷口處OTA 的積累量。 OTA 的提取方法:取腐爛直徑相似的葡萄(夏黑、巨峰、紅提),打漿,將漿液轉(zhuǎn)移至錐形瓶中, 加入一定體積的三氯甲烷, 置于25°C 搖床中緩慢振搖24 h,收集萃取液。 重復(fù)萃取2 次,合并萃取液并旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)。蒸發(fā)結(jié)束后在避光條件下向近干的圓底燒瓶中快速加入1 mL 甲醇復(fù)溶,離心(12 000 × g,15 min)后的上清液經(jīng)0.22 μm 有機(jī)濾膜過濾,用于OTA 濃度測定。葡萄傷口處的OTA 積累量以ng/傷口計。

    考察解脂亞羅酵母Y-2 對不同品種葡萄(夏黑、巨峰、紅提)傷口處OTA 積累的控制作用時,操作方法同上,酵母菌懸液的濃度為1×108細(xì)胞/mL。

    考察不同濃度解脂亞羅酵母Y-2 對紅提葡萄傷口處OTA 積累的控制作用時,酵母菌懸液的濃度分別為1×106,1×107,1×108,1×109細(xì)胞/mL。

    考察解脂亞羅酵母Y-2 處理對貯藏不同時間的紅提葡萄傷口處OTA 積累的控制作用,酵母菌懸液的濃度為1×108細(xì)胞/mL, 取樣測定OTA的時間分別為9,11,13,15,17 d。

    1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

    數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行單因素方差分析、方差同質(zhì)性檢驗(yàn),當(dāng)P<0.05 時,數(shù)據(jù)具有顯著性差異。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 解脂亞羅酵母Y-2 對葡萄采后病害和OTA的控制作用

    由圖2 可知,微皺籃狀菌O1 在不同品種葡萄傷口處產(chǎn)生的OTA 各不相同, 紅提中含量最高,夏黑和巨峰中OTA 含量極低。 而經(jīng)解脂亞羅酵母Y-2 處理后, 葡萄傷口處OTA 含量均低于對照,尤其是紅提傷口處OTA 含量降低最為顯著,與對照相比降低了83.3%。由于微皺籃狀菌O1 在夏黑

    如圖1 所示,解脂亞羅酵母Y-2 對不同品種葡萄采后由微皺籃狀菌O1 引起的腐爛均有顯著的控制作用,能顯著降低葡萄的腐爛直徑。與對照相比,經(jīng)解脂亞羅酵母Y-2 處理的夏黑、巨峰和紅提葡萄, 第14 天的腐爛直徑分別降低了28.7%,19.7%和18.5%。和巨峰葡萄中產(chǎn)生的OTA 量太低,因此無法考察解脂亞羅酵母Y-2 對OTA 積累的控制效果。后續(xù)試驗(yàn)選用紅提葡萄作為研究對象。

    圖1 解脂亞羅酵母Y-2 對葡萄由微皺籃狀菌O1 引起的腐爛直徑的影響Fig.1 Effect of Y. lipolytica Y-2 on the lesion diameter of grapes caused by T. rugulosus O1

    圖2 解脂亞羅酵母Y-2 對葡萄傷口處OTA積累量的影響Fig.2 Effect of Y. lipolytica Y-2 on OTA accumulation in the wounds of grapes

    近十幾年來, 國內(nèi)外利用拮抗酵母控制農(nóng)產(chǎn)品由致病菌引起的采后病害及真菌毒素污染的研究取得一定的成果。Velmourougane 等[16]發(fā)現(xiàn),用釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)處理田間咖啡,可以顯著降低由黑曲霉和赭曲霉引起的發(fā)病率及OTA 的產(chǎn)生。 Zhu 等[17]研究表明,假絲酵母(Candida zemplinina)M3、釀酒酵母M114、釀酒酵母C297、克魯維畢赤酵母(Pichia kluyveri)M117 和Metschnikowia aff. fructicola M179 5 株酵母菌均能夠顯著抑制葡萄上炭黑曲霉和赭曲霉的生長及OTA 的產(chǎn)生。 本研究中,解脂亞羅酵母Y-2 對葡萄由微皺籃狀菌O1 引起的采后病害均有顯著的控制效果,能顯著降低紅提葡萄傷口處OTA 的積累。OTA 在葡萄傷口處積累的減少,一方面是由于拮抗酵母抑制了產(chǎn)毒菌的生長[11,16-17],另一方面是該酵母對產(chǎn)生的OTA 的降解作用[14]。

    2.2 不同濃度解脂亞羅酵母Y-2 對紅提葡萄采后病害和OTA 的控制作用

    如圖3 所示, 不同濃度的解脂亞羅酵母Y-2對紅提葡萄采后由微皺籃狀菌O1 引起的腐爛均有控制作用,尤其是高濃度的拮抗酵母。與對照相比,1×107,1×108,1×109細(xì)胞/mL 的解脂亞羅酵母Y-2 處理均可顯著減小紅提葡萄的腐爛直徑,且葡萄腐爛直徑隨酵母濃度的增加而減小。 當(dāng)酵母濃度為1×108細(xì)胞/mL 時, 其腐爛直徑為19.5 mm,相比于對照(25.8 mm)降低了23.8%。

    如圖4 所示, 不同濃度的解脂亞羅酵母Y-2對紅提葡萄傷口處由微皺籃狀菌O1 產(chǎn)生的OTA積累均有顯著的控制效果。 對照組葡萄傷口處OTA 積累量為50 ng/傷口, 而經(jīng)1×108細(xì)胞/mL和1×109細(xì)胞/mL 的解脂亞羅酵母Y-2 處理的葡萄傷口處OTA 積累量分別為5.95 ng/傷口和3.53 ng/傷口,OTA 積累量顯著降低。 葡萄傷口處OTA 的積累量隨著解脂亞羅酵母Y-2 濃度的增加而降低,與葡萄腐爛直徑的變化趨勢一致。 Zhu等[17]發(fā)現(xiàn),釀酒酵母M114 菌懸液濃度越大,對葡萄上炭黑曲霉和赭曲霉的抑制作用越強(qiáng), 測得的OTA 含量也越小,與本試驗(yàn)結(jié)果一致。

    考慮到經(jīng)濟(jì)成本等因素,后續(xù)選用1×108細(xì)胞/mL 的解脂亞羅酵母Y-2 進(jìn)行試驗(yàn)。

    圖3 不同濃度解脂亞羅酵母Y-2 對紅提葡萄由微皺籃狀菌O1 引起的腐爛直徑的影響Fig.3 Effect of Y. lipolytica Y-2 at different concentration on the lesion diameter of red globe grapes caused by T. rugulosus O1

    2.3 解脂亞羅酵母Y-2 處理對貯藏不同時間的紅提葡萄采后病害和OTA 的控制作用

    如圖5 所示, 對照組和經(jīng)解脂亞羅酵母Y-2處理的紅提葡萄腐爛直徑均隨貯藏時間的延長而增加,尤其是對照組,葡萄腐爛直徑從14.2 mm(9 d)增到26 mm(17 d)。 而經(jīng)解脂亞羅酵母Y-2 處理的葡萄腐爛直徑從11.8 mm(9 d)增到19.8 mm(17 d)。 相同時間,處理組葡萄腐爛直徑均顯著低于對照組,17 d 的葡萄腐爛直徑降低了23.8%。

    如圖6 所示,隨著貯藏時間的延長,解脂亞羅酵母Y-2 處理組和對照組紅提葡萄傷口處由微皺籃狀菌O1 產(chǎn)生的OTA 積累量均逐漸增加。Lahouar 等[18]發(fā)現(xiàn)塔賓曲霉(A. tubingensis)產(chǎn)生的OTA 也隨培養(yǎng)時間的增加而增加, 與本研究結(jié)果一致。 未經(jīng)解脂亞羅酵母Y-2 處理的對照組葡萄傷口處OTA 的積累量在第11 天迅速增至35.20 ng/傷口,第17 天達(dá)到最大值(60.20 ng/傷口);而經(jīng)該拮抗酵母處理的葡萄傷口處OTA 的積累量在同時間段分別為1.28 ng/傷口和29.1 ng/傷口,顯著低于對照組, 且處理組葡萄腐爛直徑也顯著低于對照組,表明解脂亞羅酵母Y-2 處理對葡萄貯藏過程中由微皺籃狀菌O1 產(chǎn)生的OTA 積累具有顯著的控制效果。對產(chǎn)毒菌微皺籃狀菌O1 的抑制作用是其原因之一。

    圖4 不同濃度解脂亞羅酵母Y-2 對葡萄傷口處OTA 積累的影響Fig.4 Effect of Y. lipolytica Y-2 at different concentration on OTA accumulation in the wounds of red globe grapes

    3 結(jié)論

    解脂亞羅酵母Y-2 對不同品種的葡萄由微皺籃狀菌O1 引起的采后病害均有顯著的控制效果, 且能顯著降低紅提葡萄傷口處OTA 的積累。與對照相比,該酵母處理的夏黑、巨峰和紅提葡萄的腐爛直徑分別降低了28.7%,19.7%和18.5%,紅提葡萄傷口處OTA 積累量降低了83.3%。 OTA在葡萄傷口處積累的減少, 一方面是由于拮抗酵母抑制了產(chǎn)毒菌的生長, 另一方面是該酵母對產(chǎn)生的OTA 的降解作用。

    隨著酵母濃度的升高,解脂亞羅酵母Y-2 對紅提葡萄采后病害和OTA 的控制效果增強(qiáng),葡萄腐爛直徑和傷口處OTA 的積累量均減少。 當(dāng)酵母濃度為1×108細(xì)胞/mL 時, 紅提葡萄腐爛直徑比對照降低了23.8%, 傷口處OTA 積累量由50 ng/傷口,降到5.95 ng/傷口。

    圖5 解脂亞羅酵母Y-2 處理對貯藏不同時間的紅提葡萄由微皺籃狀菌O1 引起的腐爛直徑的影響Fig.5 Effect of Y. lipolytica Y-2 on lesion diameter of red globe grapes stored for different times

    圖6 解脂亞羅酵母Y-2 處理貯藏不同時間的紅提葡萄傷口處OTA 積累的影響Fig.6 Effect of Y. lipolytica Y-2 on OTA accumulation in the wounds of red globe grapes stored for different time

    在紅提葡萄貯藏過程中,相同時間,解脂亞羅酵母Y-2 處理組紅提葡萄腐爛直徑和OTA 積累量均顯著低于對照組,表明解脂亞羅酵母Y-2 在葡萄貯藏過程中對其采后病害和OTA 的積累均具有顯著的控制效果。

    猜你喜歡
    傷口處酵母葡萄
    令人瑟瑟發(fā)抖的自然毒
    飛天(2022年5期)2022-05-18 08:11:45
    燒、燙傷可以用涂抹牙膏來止痛嗎
    葡萄熟了
    當(dāng)葡萄成熟時
    女報(2020年10期)2020-11-23 01:42:42
    沒那么疼了
    天津詩人(2018年3期)2018-11-13 18:35:59
    酵母抽提物的研究概況
    酵母魔術(shù)師
    小青蛙報(2016年2期)2016-10-15 05:05:56
    人CyclinD1在畢赤酵母中的表達(dá)
    中文亚洲av片在线观看爽| 午夜激情欧美在线| 国内精品宾馆在线| 国产精品一区二区免费欧美| 女人被狂操c到高潮| 国产亚洲欧美98| 国产真实乱freesex| 无人区码免费观看不卡| 国产69精品久久久久777片| 又爽又黄a免费视频| 精品一区二区三区av网在线观看| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 日韩,欧美,国产一区二区三区 | 神马国产精品三级电影在线观看| 丰满人妻一区二区三区视频av| 狠狠狠狠99中文字幕| 99在线视频只有这里精品首页| 国产久久久一区二区三区| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 婷婷亚洲欧美| 少妇丰满av| 免费大片18禁| 久久久国产成人精品二区| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 永久网站在线| 精品午夜福利在线看| 夜夜爽天天搞| 在线播放国产精品三级| 国产老妇女一区| eeuss影院久久| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| av女优亚洲男人天堂| 久久国产精品人妻蜜桃| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲va在线va天堂va国产| 欧美另类亚洲清纯唯美| 欧美不卡视频在线免费观看| 在线观看一区二区三区| 精品免费久久久久久久清纯| 成人鲁丝片一二三区免费| 亚洲精华国产精华液的使用体验 | 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产伦精品一区二区三区视频9| 一级毛片久久久久久久久女| 老司机午夜福利在线观看视频| 亚洲午夜理论影院| 又粗又爽又猛毛片免费看| 深夜精品福利| 国产真实乱freesex| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 成人av一区二区三区在线看| 国产一区二区激情短视频| 1024手机看黄色片| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲成人久久性| 在线免费观看的www视频| 性插视频无遮挡在线免费观看| 如何舔出高潮| 亚洲色图av天堂| 搡老岳熟女国产| 国产伦人伦偷精品视频| 国产单亲对白刺激| 欧美不卡视频在线免费观看| 91麻豆精品激情在线观看国产| 中国美女看黄片| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 国内精品一区二区在线观看| 久久99热这里只有精品18| 一个人观看的视频www高清免费观看| 91麻豆av在线| .国产精品久久| 3wmmmm亚洲av在线观看| 女人十人毛片免费观看3o分钟| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲最大成人中文| 一级a爱片免费观看的视频| 一级毛片久久久久久久久女| 九九爱精品视频在线观看| 黄色配什么色好看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 性色avwww在线观看| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 | 亚洲国产色片| 中文资源天堂在线| 国产精品av视频在线免费观看| 69av精品久久久久久| 99久国产av精品| 搞女人的毛片| 日本 av在线| 国产精品久久久久久av不卡| 久久久精品大字幕| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲最大成人av| 亚洲人成伊人成综合网2020| 色综合婷婷激情| 欧美又色又爽又黄视频| 中文字幕熟女人妻在线| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 午夜视频国产福利| 人人妻人人澡欧美一区二区| 欧美在线一区亚洲| 国产精品一区二区免费欧美| 国内精品美女久久久久久| 十八禁网站免费在线| 久久九九热精品免费| 日本一本二区三区精品| 精品人妻偷拍中文字幕| 我要搜黄色片| 国产av一区在线观看免费| 精品福利观看| 88av欧美| 在线免费观看不下载黄p国产 | 日本爱情动作片www.在线观看 | 伊人久久精品亚洲午夜| 亚洲综合色惰| 99精品久久久久人妻精品| 可以在线观看毛片的网站| 精品人妻偷拍中文字幕| 岛国在线免费视频观看| 亚洲第一电影网av| 国产高清视频在线播放一区| 日韩欧美免费精品| 亚洲av不卡在线观看| 国内精品一区二区在线观看| 观看美女的网站| 老司机午夜福利在线观看视频| 成年版毛片免费区| 波多野结衣高清作品| 99在线视频只有这里精品首页| 看片在线看免费视频| 午夜福利在线在线| 最近最新免费中文字幕在线| 成人欧美大片| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 国产高清有码在线观看视频| 男女那种视频在线观看| 日本与韩国留学比较| 日本免费a在线| 欧美成人免费av一区二区三区| 欧美最新免费一区二区三区| 男女边吃奶边做爰视频| 国产精品伦人一区二区| 动漫黄色视频在线观看| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 成年女人毛片免费观看观看9| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 九色成人免费人妻av| 99热6这里只有精品| 久久久久免费精品人妻一区二区| 一进一出好大好爽视频| 熟女人妻精品中文字幕| 国产精品不卡视频一区二区| 丰满的人妻完整版| 亚洲成人久久爱视频| 伦精品一区二区三区| 色噜噜av男人的天堂激情| 成人无遮挡网站| 国内精品久久久久精免费| 亚洲 国产 在线| 国产精品女同一区二区软件 | 久久久久久久久久黄片| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产伦一二天堂av在线观看| 国产精品,欧美在线| 久9热在线精品视频| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 男女之事视频高清在线观看| av在线老鸭窝| 国产精品无大码| 免费搜索国产男女视频| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产av在哪里看| 欧美在线一区亚洲| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 成人国产麻豆网| 给我免费播放毛片高清在线观看| 亚洲,欧美,日韩| 国产精品av视频在线免费观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 日韩精品中文字幕看吧| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 一级av片app| 欧美区成人在线视频| 亚洲精品粉嫩美女一区| 免费看av在线观看网站| 永久网站在线| 日韩av在线大香蕉| 亚洲av中文字字幕乱码综合| www.色视频.com| 一区二区三区免费毛片| 99久国产av精品| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 悠悠久久av| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲四区av| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 在线观看66精品国产| 国产不卡一卡二| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 欧美日本视频| 人妻夜夜爽99麻豆av| 有码 亚洲区| 简卡轻食公司| 国产精品人妻久久久久久| av天堂在线播放| 极品教师在线免费播放| 又爽又黄无遮挡网站| 亚洲成av人片在线播放无| 人人妻人人澡欧美一区二区| 午夜亚洲福利在线播放| 色视频www国产| 国产伦在线观看视频一区| 国产男靠女视频免费网站| 成人特级av手机在线观看| 国产人妻一区二区三区在| 精品一区二区三区av网在线观看| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美日韩精品成人综合77777| 俄罗斯特黄特色一大片| 少妇人妻精品综合一区二区 | 国产精品福利在线免费观看| 国产精品日韩av在线免费观看| 99九九线精品视频在线观看视频| 好男人在线观看高清免费视频| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 亚洲性久久影院| 12—13女人毛片做爰片一| 国产精品一及| 国产精品久久久久久av不卡| 精品久久久久久成人av| 又黄又爽又免费观看的视频| 日日啪夜夜撸| 色哟哟·www| 久久九九热精品免费| 两个人的视频大全免费| 99热精品在线国产| 一a级毛片在线观看| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产午夜精品论理片| 99热只有精品国产| 别揉我奶头 嗯啊视频| ponron亚洲| 91久久精品国产一区二区成人| 中文字幕久久专区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 久久午夜亚洲精品久久| 亚洲三级黄色毛片| 嫩草影视91久久| 赤兔流量卡办理| 日韩一本色道免费dvd| 国产精品人妻久久久影院| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 欧美高清性xxxxhd video| 国产免费男女视频| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 日本a在线网址| 欧美中文日本在线观看视频| 黄色一级大片看看| 色综合色国产| 午夜免费成人在线视频| 毛片一级片免费看久久久久 | 精品国内亚洲2022精品成人| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产精品日韩av在线免费观看| 精品一区二区三区视频在线| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 不卡视频在线观看欧美| 亚洲成人中文字幕在线播放| 91久久精品国产一区二区成人| 国产在视频线在精品| 亚洲电影在线观看av| 国产一区二区在线av高清观看| 可以在线观看的亚洲视频| 久久久久久久久中文| 久久人人精品亚洲av| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品伦人一区二区| 婷婷精品国产亚洲av| 88av欧美| 亚洲人与动物交配视频| 国产精品99久久久久久久久| eeuss影院久久| 最后的刺客免费高清国语| 窝窝影院91人妻| 亚洲乱码一区二区免费版| 观看美女的网站| 99精品在免费线老司机午夜| 美女黄网站色视频| 欧美国产日韩亚洲一区| 精品久久久久久久久亚洲 | 黄片wwwwww| 人妻少妇偷人精品九色| av在线蜜桃| 久久午夜福利片| 国产伦在线观看视频一区| 国产一区二区激情短视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 亚洲精品日韩av片在线观看| 日本黄色片子视频| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 最近在线观看免费完整版| 看免费成人av毛片| 亚洲性夜色夜夜综合| 日韩大尺度精品在线看网址| 精品乱码久久久久久99久播| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| 少妇人妻一区二区三区视频| 欧美3d第一页| 国产av在哪里看| 精品人妻熟女av久视频| 22中文网久久字幕| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产熟女欧美一区二区| videossex国产| 日本熟妇午夜| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲,欧美,日韩| 日韩强制内射视频| 色综合婷婷激情| 变态另类丝袜制服| 中文字幕久久专区| 亚洲内射少妇av| 亚洲av成人精品一区久久| 色综合亚洲欧美另类图片| 99久国产av精品| 午夜福利18| 国内精品久久久久久久电影| 日韩欧美 国产精品| 久久九九热精品免费| 欧美最新免费一区二区三区| 午夜福利在线观看吧| 亚洲欧美日韩东京热| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 午夜视频国产福利| 国产精品爽爽va在线观看网站| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 99久久中文字幕三级久久日本| 亚洲图色成人| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 午夜福利成人在线免费观看| 少妇丰满av| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| eeuss影院久久| 久久草成人影院| 精品人妻1区二区| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品一区二区三区人妻视频| 1024手机看黄色片| 老熟妇仑乱视频hdxx| 国产欧美日韩一区二区精品| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 男插女下体视频免费在线播放| 一级黄色大片毛片| 欧美成人一区二区免费高清观看| 欧美日韩综合久久久久久 | 亚洲无线观看免费| 日韩欧美免费精品| 亚洲最大成人中文| 一个人观看的视频www高清免费观看| 黄色配什么色好看| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲经典国产精华液单| 中国美女看黄片| av天堂中文字幕网| 男人的好看免费观看在线视频| 日本成人三级电影网站| 禁无遮挡网站| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 99在线视频只有这里精品首页| 不卡一级毛片| 日韩亚洲欧美综合| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 午夜日韩欧美国产| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 国产高清视频在线观看网站| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲欧美日韩高清专用| 尾随美女入室| 五月玫瑰六月丁香| 91麻豆av在线| 小说图片视频综合网站| 男女边吃奶边做爰视频| 午夜福利成人在线免费观看| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 欧美日韩乱码在线| 亚洲在线自拍视频| 日本五十路高清| 日日干狠狠操夜夜爽| 窝窝影院91人妻| 亚洲中文字幕日韩| 校园人妻丝袜中文字幕| 久久人妻av系列| 少妇人妻一区二区三区视频| 成年人黄色毛片网站| 尾随美女入室| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产成人av教育| 婷婷亚洲欧美| 国产精品日韩av在线免费观看| 国产精品久久电影中文字幕| 大型黄色视频在线免费观看| 免费人成视频x8x8入口观看| 亚洲三级黄色毛片| 一a级毛片在线观看| 国产真实乱freesex| 亚洲,欧美,日韩| 国产 一区精品| 桃红色精品国产亚洲av| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产精品一区二区三区四区久久| 麻豆一二三区av精品| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 国产精品人妻久久久久久| 国产精品女同一区二区软件 | 日韩高清综合在线| 两个人的视频大全免费| 欧美色欧美亚洲另类二区| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 最近最新免费中文字幕在线| 国产午夜福利久久久久久| 简卡轻食公司| 午夜福利18| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 日本 av在线| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 哪里可以看免费的av片| 韩国av一区二区三区四区| а√天堂www在线а√下载| 亚洲av五月六月丁香网| 高清毛片免费观看视频网站| 中文字幕av成人在线电影| 国产日本99.免费观看| 五月伊人婷婷丁香| 最近最新中文字幕大全电影3| АⅤ资源中文在线天堂| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看| 欧美在线一区亚洲| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 乱系列少妇在线播放| av天堂在线播放| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 日日摸夜夜添夜夜添小说| 九九热线精品视视频播放| 亚洲性久久影院| 亚洲国产精品成人综合色| av天堂中文字幕网| 国产人妻一区二区三区在| 国产男靠女视频免费网站| 午夜福利成人在线免费观看| 久久久久久久久久黄片| 赤兔流量卡办理| 天美传媒精品一区二区| 在线观看免费视频日本深夜| 国产精品一区www在线观看 | 久久久久精品国产欧美久久久| 天堂动漫精品| 色5月婷婷丁香| 99久久无色码亚洲精品果冻| 999久久久精品免费观看国产| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日日啪夜夜撸| 亚洲不卡免费看| 天堂动漫精品| 国产伦在线观看视频一区| 男女视频在线观看网站免费| 中文亚洲av片在线观看爽| 精品人妻熟女av久视频| www日本黄色视频网| 最近最新中文字幕大全电影3| 亚洲精品亚洲一区二区| 午夜精品久久久久久毛片777| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 日韩欧美在线二视频| 波多野结衣高清作品| 尾随美女入室| 在线观看午夜福利视频| 嫩草影视91久久| 亚洲av电影不卡..在线观看| 亚洲av免费在线观看| 欧美高清成人免费视频www| 一夜夜www| 中文亚洲av片在线观看爽| 热99re8久久精品国产| 午夜福利欧美成人| 久久久精品大字幕| 超碰av人人做人人爽久久| 黄色日韩在线| 精品人妻熟女av久视频| www日本黄色视频网| 久久人妻av系列| a级毛片免费高清观看在线播放| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产精华一区二区三区| 国产三级中文精品| 亚洲男人的天堂狠狠| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 国产亚洲精品av在线| 亚洲国产精品成人综合色| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲欧美激情综合另类| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 99九九线精品视频在线观看视频| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 成人性生交大片免费视频hd| 婷婷色综合大香蕉| 精品久久久噜噜| 俄罗斯特黄特色一大片| 女同久久另类99精品国产91| 一进一出抽搐动态| 国产不卡一卡二| 欧美一级a爱片免费观看看| 最近视频中文字幕2019在线8| 网址你懂的国产日韩在线| 亚洲国产色片| www日本黄色视频网| 国产成人a区在线观看| 乱人视频在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 99热6这里只有精品| 国产主播在线观看一区二区| 亚洲人成网站高清观看| 日韩欧美免费精品| av.在线天堂| 成年免费大片在线观看| 国产私拍福利视频在线观看| 在线观看舔阴道视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 别揉我奶头 嗯啊视频| 久久久久久国产a免费观看| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 在现免费观看毛片| 精华霜和精华液先用哪个| 国产aⅴ精品一区二区三区波| av在线天堂中文字幕| 国产老妇女一区| 99热这里只有是精品在线观看| 他把我摸到了高潮在线观看| 国产精品不卡视频一区二区| 男人的好看免费观看在线视频| 日本五十路高清| 老女人水多毛片| 我要搜黄色片| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲av不卡在线观看| 免费高清视频大片| 婷婷亚洲欧美| 无人区码免费观看不卡| 久久久久久久久大av| 91在线观看av| 免费观看的影片在线观看| 精品人妻视频免费看| 亚洲人成网站高清观看| 91在线精品国自产拍蜜月| 国产高潮美女av| 亚洲精品乱码久久久v下载方式| 亚洲精品国产成人久久av| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲一区高清亚洲精品| 国产亚洲91精品色在线| 亚洲色图av天堂| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 亚洲av.av天堂| 欧美日本视频| 给我免费播放毛片高清在线观看| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 丝袜美腿在线中文| 神马国产精品三级电影在线观看| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 成人特级av手机在线观看| 在线观看免费视频日本深夜| 男人狂女人下面高潮的视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 99久久九九国产精品国产免费| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 尾随美女入室| 好男人在线观看高清免费视频| 最新中文字幕久久久久| 亚洲中文日韩欧美视频| 日本一二三区视频观看| 日韩中字成人| 中文字幕av在线有码专区| 男人的好看免费观看在线视频| 五月伊人婷婷丁香| 少妇的逼水好多| 久久久久国内视频| 美女大奶头视频| 可以在线观看毛片的网站| 国模一区二区三区四区视频| 国产精品无大码| av专区在线播放| 97热精品久久久久久| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产精品电影一区二区三区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 亚洲国产精品sss在线观看| 国产乱人伦免费视频| 久久99热6这里只有精品| 长腿黑丝高跟| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品伦人一区二区| 国国产精品蜜臀av免费| 国产视频一区二区在线看| 免费看日本二区| 丰满乱子伦码专区| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 久久久精品欧美日韩精品| 国产精品一区二区性色av| 久久精品国产鲁丝片午夜精品 |