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    金訶含片促進(jìn)腸蠕動(dòng)作用研究

    2020-09-01 12:49:30姬濤單玉剛李懷平馬宏偉田小雪通訊作者
    關(guān)鍵詞:金嗓子含片腸蠕動(dòng)

    姬濤,單玉剛,李懷平,馬宏偉,田小雪通訊作者)

    (金訶藏藥(山東)健康產(chǎn)業(yè)有限公司,山東 濟(jì)南 250101)

    0 引言

    斑馬魚(Danio rerio)是一種簡單的生物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,具有和哺乳動(dòng)物相似的生物結(jié)構(gòu)和生理功能。幾乎透明的胚胎、胚胎的體外發(fā)育以及與人類高達(dá)87%的基因相似性,使得斑馬魚被廣泛用于藥學(xué)領(lǐng)域的研究。模式動(dòng)物斑馬魚在生態(tài)毒理學(xué)、發(fā)育遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域已得到廣泛應(yīng)用。近年來,斑馬魚模型已拓展延伸至人類疾病動(dòng)物模型、藥物代謝及藥物篩選研發(fā)等多個(gè)方面。國內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道[1-5],斑馬魚模型在現(xiàn)代藥學(xué)研究中關(guān)于疾病動(dòng)物模型、藥物活性篩選及代謝研究方向的研究取得了很大進(jìn)展。本實(shí)驗(yàn)首次將斑馬魚模型用于評(píng)價(jià)抗霧霾作用,為其拓展應(yīng)用提供了參考。

    1 資料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹S^察評(píng)價(jià)金訶含片對斑馬魚腸蠕動(dòng)的促進(jìn)作用,為金訶含片在抗PM2.5領(lǐng)域開發(fā)提供參考。

    1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。野生型AB品系斑馬魚,以自然成對交配繁殖方式進(jìn)行。年齡為受精后5天,共210尾用于金訶含片對腸蠕動(dòng)的促進(jìn)作用實(shí)驗(yàn),每實(shí)驗(yàn)組為30尾斑馬魚。以上斑馬魚均飼養(yǎng)于28 ℃的養(yǎng)魚用水中(水質(zhì):每1 L反滲透水中加入200 mg速溶海鹽,電導(dǎo)率為480-510 μS/cm;pH為6.9-7.2;硬度為53.7-71.6 mg/L CaCO3),實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)為:SYXK(浙)2012-0171。飼養(yǎng)管理符合國際AAALAC認(rèn)證的要求。

    1.3 實(shí)驗(yàn)藥物。金訶含片,棕色粉末,于2017年09月11日收樣,由金訶藏藥(山東)健康科技有限公司提供,常溫陰涼避光保存。臨用前用超純水配制成濃度為50 mg/mL的母液,-20℃保存。臨用時(shí)用養(yǎng)魚水按需稀釋。金嗓子喉片,市售成品,棕褐色片劑,批號(hào)17031301,于2017年09月11日收樣,由山東金訶藥物研究開發(fā)有限公司提供,常溫陰涼避光保存。臨用前用超純水配制成濃度為200 mg/mL的母液,-20℃保存。臨用時(shí)用養(yǎng)魚水按需稀釋。

    1.4 儀器與試劑。解剖顯微鏡(SZX7,OLYMPUS,Japan);6孔板(Fisher Scientific,China);精密電子天平(CP214,奧豪斯);電動(dòng)聚焦連續(xù)變倍熒光顯微鏡(AZ100,Nikon,Japan);尼羅紅(Sigma,China);甲基纖維素(Sigma,China)。

    1.5 濃度組別。實(shí)驗(yàn)1組:模型對照組;實(shí)驗(yàn)2組:金訶含片56 μg/mL;實(shí)驗(yàn)3組:金訶含片167 μg/mL;實(shí)驗(yàn)4組:金訶含片500 μg/mL;實(shí)驗(yàn)5組:金嗓子喉片222μg/mL;實(shí)驗(yàn)6組:金嗓子喉片667 μg/mL;實(shí)驗(yàn)7組:金嗓子喉片2000 μg/mL。

    1.6 濃度確定依據(jù)。根據(jù)金訶含片(對斑馬魚的最大耐受濃度(MTC)為500 μg/mL)和金嗓子喉片(對斑馬魚的最大耐受濃度(MTC)大于2000 μg/mL)對斑馬魚的最大耐受濃度(MTC),確定金訶含片對腸蠕動(dòng)的促進(jìn)作用評(píng)價(jià)濃度設(shè)計(jì)為56 μg/mL(1/9 MTC)、167 μg/mL(1/3 MTC)和500 μg/mL(MTC);金嗓子喉片對腸蠕動(dòng)的促進(jìn)作用評(píng)價(jià)濃度設(shè)計(jì)為222 μg/mL(1/9 MTC)、667 μg/mL(1/3 MTC)和2000 μg/mL(MTC)。

    1.7 模型制作。用養(yǎng)魚用水將尼羅紅配制成10 ng/mL溶液,把5 dpf AB品系斑馬魚放入其中16 h使斑馬魚將尼羅紅吞入腸道,建立斑馬魚腸蠕動(dòng)評(píng)價(jià)模型。

    1.8 實(shí)驗(yàn)方法。隨機(jī)選取210尾受精后5天(5 dpf)野生型AB品系斑馬魚,每孔(實(shí)驗(yàn)組)均處理30尾斑馬魚,水溶給予尼羅紅16 h建立斑馬魚腸蠕動(dòng)評(píng)價(jià)模型。模型斑馬魚分別水溶給予金訶含片56、167、500 μg/mL濃度和金嗓子喉片222、667、2000 μg/mL濃度,同時(shí)設(shè)置模型對照組,每孔(實(shí)驗(yàn)組)均處理30尾斑馬魚,每孔容量為3 mL。金訶含片和金嗓子喉片處理24 h后,每組隨機(jī)取10尾斑馬魚在熒光顯微鏡下觀察斑馬魚腸腔中熒光染料信號(hào)強(qiáng)度、拍照并保存圖片,用尼康NIS-Elements D 3.10 高級(jí)圖像處理軟件進(jìn)行圖像分析,計(jì)算斑馬魚腸腔熒光染料信號(hào)強(qiáng)度(S)進(jìn)行結(jié)果分析,評(píng)價(jià)金訶含片促進(jìn)腸道蠕動(dòng)作用。腸蠕動(dòng)促進(jìn)率計(jì)算公式如下:

    用方差分析和Dunnett’s T-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,P<0.05表明具有顯著性差異,提供具有代表性的實(shí)驗(yàn)圖譜。

    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

    金訶含片在濃度為56、167和500 μg/mL時(shí),斑馬魚腸腔熒光強(qiáng)度分別為562579、531775和343828像素,其腸蠕動(dòng)促進(jìn)率分別為21.4%、25.7%和52.0%,與模型對照組(715433像素)比較,56 μg/mL濃度組P>0.05,167 μg/mL濃度組P<0.05,500 μg/mL濃度組P<0.001,提示金訶含片在167和500 μg/mL濃度下對斑馬魚腸蠕動(dòng)有促進(jìn)作用,詳情見表1。

    表1 金訶含片各實(shí)驗(yàn)組斑馬魚腸蠕動(dòng)促進(jìn)率

    金嗓子喉片在濃度為222、667和2000 μg/mL時(shí),斑馬魚腸腔熒光強(qiáng)度分別為332834、323298和99571像素,其腸蠕動(dòng)促進(jìn)率分別為53.5%、54.8%和86.1%,與模型對照組(715433像素)比較,222、667和2000 μg/mL濃度組P<0.001,提示金嗓子喉片對斑馬魚腸蠕動(dòng)有明顯的促進(jìn)作用,詳情見表2。

    表2 金嗓子喉片各實(shí)驗(yàn)組斑馬魚腸蠕動(dòng)促進(jìn)率

    3 實(shí)驗(yàn)結(jié)論

    在本實(shí)驗(yàn)濃度條件下,于2017年09月11日提供的金訶含片和金嗓子喉片具有促進(jìn)斑馬魚腸蠕動(dòng)的作用。根據(jù)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果:在本實(shí)驗(yàn)濃度條件下,金訶含片對斑馬魚的最大耐受濃度為500 μg/mL,金嗓子喉片對斑馬魚的最大耐受濃度大于2000 μg/mL。金訶含片對斑馬魚巨噬細(xì)胞吞噬功能有明顯的促進(jìn)作用,對斑馬魚腸蠕動(dòng)也有促進(jìn)作用,對斑馬魚分泌納米活性炭進(jìn)入腸道有促進(jìn)趨勢。金嗓子喉片對斑馬魚巨噬細(xì)胞吞噬功能有明顯的促進(jìn)作用,對斑馬魚腸蠕動(dòng)也有促進(jìn)作用,對斑馬魚分泌納米活性炭進(jìn)入腸道有促進(jìn)趨勢。

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