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    2型糖尿病患者血清EGR1水平與非酒精性脂肪性肝病的關(guān)系

    2020-08-31 09:25:22張玉彩劉哲慧張小睿
    國(guó)際消化病雜志 2020年4期
    關(guān)鍵詞:中度重度程度

    張玉彩 劉哲慧 張小睿

    非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是除外乙醇等明確肝損傷病因的以肝臟脂肪變性為特征的臨床綜合征[1-2]。目前多認(rèn)為NAFLD與生活習(xí)慣、2型糖尿病(T2DM)及高脂血癥等代謝性疾病有關(guān)[3]。有研究表明T2DM患者的NAFLD患病率逐年升高,并且NAFLD患者的T2DM發(fā)病率及并發(fā)癥發(fā)生率也升高了[4-5]。另有研究顯示胰島素抵抗和T2DM是NAFLD的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[6]。闡明T2DM與NAFLD相互促進(jìn)的機(jī)制,并探究相關(guān)生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)兩者的預(yù)防和治療意義重大。有研究報(bào)道了早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子1(EGR1)可通過(guò)增加胰島素抵抗促進(jìn)T2DM的發(fā)病[7],但關(guān)于EGR1與T2DM并發(fā)NAFLD及NAFLD嚴(yán)重程度的關(guān)系尚不明確。本研究檢測(cè)了T2DM患者和T2DM并發(fā)NAFLD患者的血清EGR1水平,并分析其與T2DM并發(fā)NAFLD及NAFLD嚴(yán)重程度的關(guān)系,以期為T(mén)2DM和NAFLD的防治及病情評(píng)估提供幫助。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    選擇2016年4月至2019年4月在聊城市人民醫(yī)院就診的158例T2DM患者作為研究對(duì)象,根據(jù)患者是否并發(fā)NAFLD將其分為NAFLD組(n=106)和T2DM組(n=52),另?yè)?0名同期健康體檢者作為對(duì)照組。T2DM診斷符合世界衛(wèi)生組織(WHO)的診斷標(biāo)準(zhǔn),NAFLD診斷符合《非酒精性脂肪性肝病診療指南(2010年1月修訂)》[8],并根據(jù)肝臟超聲結(jié)果判定NAFLD嚴(yán)重程度。根據(jù)NAFLD嚴(yán)重程度將NAFLD組患者分為輕度組(n=54)、中度組(n=36)和重度組(n=16)。納入標(biāo)準(zhǔn):(1)接受肝臟超聲檢查;(2)年齡30~70歲;(3)簽署知情同意書(shū)。排除標(biāo)準(zhǔn):(1)T1DM或妊娠糖尿??;(2)嚴(yán)重周?chē)芗膊?、酮癥酸中毒或神經(jīng)病變等;(3)冠心??;(4)合并嚴(yán)重肝、腎功能損傷;(5)合并酒精性肝損傷、自身免疫性肝炎、病毒性肝炎及藥物性肝損傷等;(6)惡性腫瘤。NAFLD組平均年齡(45.39±7.52)歲,男性70例,女性36例;T2DM組平均年齡(45.28±6.67)歲,男性34例,女性18例;對(duì)照組年齡(47.14±7.89)歲,男性26例,女性24例。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

    1.2 方法

    1.2.1 資料收集 收集所有受試者的年齡、性別、身高、體質(zhì)量、肝臟超聲結(jié)果及疾病史等信息,計(jì)算體質(zhì)指數(shù)(BMI),BMI=體重(kg)/身高(m)2。

    1.2.2 血清指標(biāo)檢測(cè) 抽取3組的晨起肘部空腹靜脈血10 mL,離心15 min(3 500 r/min),提取上清液加入EP管中,置于-20 ℃冰箱內(nèi)保存待驗(yàn)。用8000型自動(dòng)生化分析儀(瑞士Roche公司)檢測(cè)3組的血清總膽固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、空腹血糖(FPG)和空腹胰島素(FINS)。計(jì)算胰島素抵抗指數(shù)(HOMA-IR),HOMA-IR=FPG(mmol/L)×FINS(mIU/L)/22.5。

    采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(RT-qPCR)檢測(cè)3組的血清EGR1水平。取EP管中上清液,加入總RNA提取試劑盒(美國(guó)GENMED公司)中提取總RNA,并用紫外分光光度計(jì)(上海美譜達(dá)公司)檢測(cè)總RNA水平和純度。取總RNA,加入反轉(zhuǎn)錄試劑盒[賽默飛世爾科技(中國(guó))有限公司]中進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。將反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)產(chǎn)物加入PCR儀(杭州博日公司)中進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng),反應(yīng)條件為95 ℃預(yù)變性2 min,95 ℃ 15 s,60 ℃ 60 s,95 ℃ 15 s,共40個(gè)循環(huán)。GAPDH為內(nèi)參,用2-ΔΔCt表示受試者血清EGR1水平。引物序列見(jiàn)表1。

    表1 引物序列

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

    2 結(jié)果

    2.1 3組的一般資料比較

    3組的年齡、性別相比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);3組的BMI、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR相比較,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。詳見(jiàn)表2。

    表2 3組的一般資料比較

    2.2 3組的血清EGR1水平比較

    3組的血清EGR1水平相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=260.760,P<0.001)。NAFLD組血清EGR1水平為0.68±0.15,低于T2DM組(0.87±0.17)和對(duì)照組(1.29±0.16),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=10.060,P<0.05;q=32.334,P<0.05)。T2DM組血清EGR1水平低于對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=19.408,P<0.05)。

    2.3 血清EGR1水平與T2DM患者糖脂代謝相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系

    通過(guò)Pearson相關(guān)性分析探討血清EGR1水平與T2DM患者(含T2DM并發(fā)NAFLD患者,n=158)的BMI、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR的關(guān)系,結(jié)果顯示EGR1與BMI、LDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR呈負(fù)相關(guān)關(guān)系(r=-0.234,P=0.003;r=-0.346,P<0.001;r=-0.362,P<0.001;r=-0.244,P=0.002;r=-0.369,P<0.001),而EGR1與TC、TG和HDL-C無(wú)相關(guān)性(r=-0.043,P=0.591;r=-0.022,P=0.786;r=0.015,P=0.823)。

    2.4 T2DM并發(fā)NAFLD的相關(guān)因素分析

    將BMI(>26.17 kg/m2=1,≤26.17 kg/m2=0)、TC(>5.36 mmol/L=1,≤5.36 mmol/L=0)、TG(>3.14 mmol/L=1,≤3.14 mmol/L=0)、LDL-C(>3.05 mmol/L=1,≤3.05 mmol/L=0)、HDL-C(>1.14 mmol/L=1,≤1.14 mmol/L=0)、FPG(>11.40 mmol/L=1,≤11.40 mmol/L=0)、FINS(>14.53 mIU/L=1,≤14.53 mIU/L=0)、HOMA-IR(>7.57=1,≤7.57=0)和EGR1(>0.74=1,≤0.74=0)作為自變量,將T2DM是否并發(fā)NAFLD(是=1,否=0)作為因變量,納入多因素Logistic回歸分析,結(jié)果顯示BMI、TC、LDL-C、FPG、FINS、HOMA-IR和EGR1與T2DM并發(fā)NAFLD密切相關(guān)。詳見(jiàn)表3。

    表3 影響T2DM并發(fā)NAFLD的多因素Logistic回歸分析

    2.5 不同嚴(yán)重程度的NAFLD患者的血清EGR1水平比較

    根據(jù)NAFLD嚴(yán)重程度將NAFLD組患者分為輕度組(n=54)、中度組(n=36)和重度組(n=16)。3組的血清EGR1水平比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=76.424,P<0.001)。輕度組的血清EGR1水平為0.78±0.10,高于中度組(0.62±0.07)和重度組(0.48±0.10),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=11.440,P<0.05;q=16.096,P<0.05)。中度組血清EGR1水平高于重度組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(q=7.056,P<0.05)。

    3 討論

    T2DM與NAFLD關(guān)系密切,可促進(jìn)NAFLD發(fā)病[9]。有研究表明,絕大部分肥胖的T2DM患者都患有不同嚴(yán)重程度的NAFLD[10]。探究T2DM并發(fā)NAFLD的生物學(xué)標(biāo)志物對(duì)于了解疾病情況及研發(fā)治療藥物的意義重大。EGR1是即刻早期基因家族的一員,可編碼鋅指蛋白,在細(xì)胞的增殖、分化及凋亡等方面發(fā)揮著重要作用[11-13]。有研究發(fā)現(xiàn)EGR1參與了乙醇誘導(dǎo)的大鼠肝損傷及肝纖維化等[14-15]。目前關(guān)于EGR1與NAFLD嚴(yán)重程度及T2DM并發(fā)NAFLD的關(guān)系尚未闡明。

    本研究通過(guò)檢測(cè)3組的血清EGR1水平,發(fā)現(xiàn)NAFLD組的血清EGR1水平低于T2DM組和對(duì)照組,且2DM組的血清EGR1水平低于對(duì)照組,表明EGR1可能不僅參與了T2DM的發(fā)病,也參與了T2DM繼發(fā)NAFLD的發(fā)病,但具體的病理生理機(jī)制還需進(jìn)一步研究探索。本研究進(jìn)一步分析了T2DM組和NAFLD組的血清生物化學(xué)指標(biāo)、BMI及HOMA-IR,結(jié)果顯示NAFLD組的BMI、TC、TG、LDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR更高。通過(guò)Pearson相關(guān)性分析探討T2DM患者的血清EGR1水平與BMI、TC、TG、LDL-C、HDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR的關(guān)系,結(jié)果顯示EGR1與BMI、LDL-C、FPG、FINS和HOMA-IR呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。上述結(jié)果表明EGR1可能通過(guò)調(diào)控LDL-C、FPG和FINS,進(jìn)而促使T2DM并發(fā)NAFLD。通過(guò)多因素Logistic回歸法分析影響T2DM并發(fā)NAFLD的相關(guān)因素,結(jié)果顯示BMI、TC、LDL-C、FPG、FINS、HOMA-IR和EGR1與T2DM并發(fā)NAFLD密切相關(guān)。筆者認(rèn)為EGR1可能通過(guò)調(diào)控LDL-C、FPG和FINS來(lái)增加機(jī)體脂質(zhì)堆積及胰島素抵抗情況,進(jìn)而促使T2DM并發(fā)NAFLD,但其具體機(jī)制仍需基礎(chǔ)研究探索。本研究進(jìn)一步比較了不同嚴(yán)重程度的NAFLD患者的血清EGR1水平,發(fā)現(xiàn)輕度組的血清EGR1水平高于中度組和重度組,且中度組的血清EGR1水平高于重度組,表明EGR1不僅可促使T2DM并發(fā)NAFLD,還可促進(jìn)NAFLD的進(jìn)展。

    綜上所述,EGR1與T2DM并發(fā)NAFLD密切相關(guān),檢測(cè)血清EGR1可輔助判斷NAFLD嚴(yán)重程度。本研究存在不足之處:(1)為單中心研究,樣本量偏小;(2)樣本均為聊城地區(qū)患者,結(jié)果可能存在一定偏倚;(3)根據(jù)肝臟超聲結(jié)果判定NAFLD嚴(yán)重程度可能對(duì)結(jié)果造成一定的偏倚。今后將擴(kuò)大樣本量,進(jìn)行多中心、跨地域臨床研究,同時(shí)開(kāi)展基礎(chǔ)研究,以闡明EGR1與T2DM和NAFLD發(fā)病及病情進(jìn)展的關(guān)系。

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