不同藥物處理及不同開(kāi)口餌料對(duì)金波子魚(yú)受精卵孵化和稚魚(yú)存活的影響

黃毅 洪宇航 王尤潘 彭海

摘要：以金波子魚(yú)（Papiliochromj ramLrezL）為對(duì)象，研究3種藥物制劑（復(fù)方五倍子煎劑、慶大霉素、呋喃西林）對(duì)金波子魚(yú)受精卵孵化率的影響以及3種開(kāi)口餌料（蛋黃粉、草履蟲(chóng)和人工超微粉料）對(duì)金波子稚苗存活率的影響。結(jié)果表明，添加復(fù)方五倍子組孵化率最高，達(dá)到了（ 81.22+6.52）%，顯著高于其余兩組（P<0.05），且未發(fā)現(xiàn)畸形稚苗。因此，在金波子受精卵孵化時(shí)添加復(fù)方五倍子可顯著提高孵化率。使用人工超微粉料作開(kāi)口餌料的小組稚苗7 d存活率最高，達(dá)到（91.33+3.06）%，顯著高于其余兩組（P<0.05）。因此，人工超微粉料較適合作為金波子稚苗的開(kāi)口餌料。

關(guān)鍵詞：金波子魚(yú)（Papiliochromis ramirezi;藥物;孵化率;開(kāi)口餌料;存活率

中圖分類號(hào)：S948

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（ 2020）12-0117-04

D01：10.1408 8/j .cnki.issn043 9- 8114.2020.12.026

開(kāi)放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

熱帶觀賞魚(yú)作為一種世界性的觀賞魚(yú)，隨著人民生活水平的不斷提高，飼養(yǎng)熱帶觀賞魚(yú)的人群越來(lái)越大，消費(fèi)市場(chǎng)極其廣闊。金波子魚(yú)（Papiliochromisramirezi），屬于麗魚(yú)科（Cichlidae）彩蝶鯛屬（Papilio-chromis），原產(chǎn)于南美洲委內(nèi)瑞拉、哥倫比亞境內(nèi)[1]。其是荷蘭鳳凰經(jīng)人工選育培育出的人工新品種，是最受歡迎的短鯛之一。金波子成魚(yú)體長(zhǎng)6-9 cm，雄魚(yú)體狹長(zhǎng)，體色較深;雌魚(yú)腹部膨大，體色較淡。該品種飼養(yǎng)水質(zhì)pH 6.5-7.0，水溫25-28℃。在水溫合適、水質(zhì)良好、餌料充足的環(huán)境中，7d可繁殖1次，每次產(chǎn)卵400枚，體質(zhì)較強(qiáng)者產(chǎn)卵可達(dá)500枚，孵化時(shí)間3-4 d。金波子經(jīng)濟(jì)價(jià)值較高，目前市場(chǎng)價(jià)值成魚(yú)每尾十幾元至幾十元不等，可與其他品種的觀賞魚(yú)混養(yǎng)。中國(guó)金波子市場(chǎng)，以東部沿海城市居多，而在廣闊的內(nèi)地市場(chǎng)仍屬于新興產(chǎn)業(yè)，市場(chǎng)潛力巨大。

雖然金波子魚(yú)成魚(yú)飼養(yǎng)相對(duì)容易，但其受精卵孵化則相對(duì)困難，生產(chǎn)中常出現(xiàn)孵化率較低、初孵稚魚(yú)存活率低下等問(wèn)題。在自然狀態(tài)下，受精卵在孵化的過(guò)程中易受到水體中水霉菌、細(xì)菌等病原微生物的感染，影響孵化率甚至導(dǎo)致孵化失敗。常用的抗生素類，如慶大霉素、呋喃西林、孔雀石綠等藥物殺菌作用雖然較強(qiáng)，但具有高殘留性及強(qiáng)致癌、致畸等缺點(diǎn)，目前已在食用魚(yú)生產(chǎn)中禁止使用。在觀賞魚(yú)產(chǎn)業(yè)中，由于沒(méi)有明文規(guī)定，因此仍在繼續(xù)使用，但其強(qiáng)毒性及致畸效應(yīng)仍對(duì)受精卵孵化及稚魚(yú)健康生長(zhǎng)產(chǎn)生一定影響[2]。由于中草藥抗藥性和殘留性低的特點(diǎn)，近年來(lái)，已越來(lái)越多應(yīng)用到水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)中。其中，五倍子、黃芩、黃柏、大黃等中草藥由于其具有對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物常見(jiàn)致病菌，如嗜水氣單胞菌、溶藻弧菌及遲鈍愛(ài)德華氏菌等的強(qiáng)抑制作用以及較好的抗炎消毒效果，已被廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖生產(chǎn)中[3]。但目前中草藥制劑在水產(chǎn)行業(yè)的應(yīng)用主要集中于食用魚(yú)、觀賞魚(yú)方面則鮮有報(bào)道。在綠色環(huán)保、健康高效水產(chǎn)的理念下，抗生素類的藥物不被提倡使用或被禁用。因此如何在養(yǎng)殖過(guò)程中選取最經(jīng)濟(jì)有效且環(huán)保的藥物預(yù)防以水霉為主的各類病原微生物感染，提高孵化率，將成為觀賞魚(yú)繁殖的一項(xiàng)重要工作[4]。

在金波子魚(yú)繁殖過(guò)程中，魚(yú)苗出膜后體質(zhì)較弱，卵黃囊消失后如果得不到合適的餌料作為營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充，將造成魚(yú)苗的大量死亡，大大降低成活率。由于目前金波子魚(yú)開(kāi)口餌料的研究較少，無(wú)法為科學(xué)育苗提供餌料方面的指導(dǎo)，各大養(yǎng)殖場(chǎng)普遍存在稚魚(yú)存活率較低的情況，使得整個(gè)行業(yè)魚(yú)苗供不應(yīng)求。因此，開(kāi)口餌料開(kāi)發(fā)程度較低已成為制約金波子魚(yú)產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要因素。傳統(tǒng)的開(kāi)口餌料如豆?jié){、蛋黃[5]等雖然價(jià)格低廉容易獲得，然而容易引起水質(zhì)惡化，造成稚魚(yú)的死亡，直接影響育苗的成敗。而生物餌料如草履蟲(chóng)[6]、輪蟲(chóng)[7]等由于具有營(yíng)養(yǎng)成分全面、規(guī)格多樣、可獲得性佳且不容易敗壞水質(zhì)等特點(diǎn)，在整個(gè)養(yǎng)殖過(guò)程中可以保持水質(zhì)穩(wěn)定，減少因水質(zhì)惡化而引起的幼苗死亡情況的發(fā)生。此外，目前各大水產(chǎn)公司應(yīng)對(duì)開(kāi)口餌料問(wèn)題，均推出超微顆粒飼料，其在初孵幼苗的存活方面也起到較好的效果。

因此，在本次試驗(yàn)中比較了3種不同藥劑（復(fù)方五倍子煎劑、慶大霉素和呋喃西林）和3種不同餌料（蛋黃粉、草履蟲(chóng)和人工超微粉料）分別對(duì)金波子魚(yú)受精卵孵化及初孵稚魚(yú)存活的影響，以期篩選最有效的藥物和餌料組合以提高孵化率和稚魚(yú)成活率，為規(guī)?；B(yǎng)殖提供一定的理論指導(dǎo)，促進(jìn)金波子魚(yú)的產(chǎn)業(yè)化發(fā)展，提高經(jīng)濟(jì)效益。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

金波子魚(yú)種魚(yú)購(gòu)自廣州市花地灣觀賞魚(yú)市場(chǎng)。試驗(yàn)于2018年3-5月在西昌學(xué)院動(dòng)物科學(xué)學(xué)院進(jìn)行。試驗(yàn)前種魚(yú)在125 cmx60 cmx60 cm循環(huán)水族缸中暫養(yǎng)2周以上，水溫28℃，pH 6.5-7.0，溶氧量>6mg/L，氨氮<0.5 mg/L，亞硝酸鹽<0.15 mg/L。按雌雄比例1：1放人孵化網(wǎng)中暫養(yǎng)，為保證試驗(yàn)順利進(jìn)行，共準(zhǔn)備50對(duì)親本備用，種魚(yú)投喂經(jīng)消毒處理的水蚯蚓，每天3次，時(shí)間分別為9：00、15：00、19：00。挑選體型健壯、無(wú)病無(wú)傷、無(wú)畸形、成熟度較好的金波子魚(yú)為試驗(yàn)對(duì)象。

開(kāi)口餌料中，蛋黃粉通過(guò)購(gòu)買(mǎi)當(dāng)?shù)匦迈r雞蛋，煮熟后按照每個(gè)蛋黃加入50 mL去離子水制成蛋黃粉懸液;草履蟲(chóng)通過(guò)稻草液自行培養(yǎng);人工超微粉料選擇廣州利洋公司生產(chǎn)“利餌多”（主要成分為活性生物蛋白、有益微生物，酵母細(xì)胞數(shù)≥1X10⁶個(gè)/g）。

復(fù)方五倍子煎劑制備：五倍子20 g、大黃15 g、黃柏15 g、黃岑15 g、土茯苓15g、炒白術(shù)15 g，將所有中草藥加入2L去離子水先浸泡2h，大火煮沸，在微火下熬制30 min，紗布過(guò)濾后備用。

1.2不同藥物對(duì)金波子魚(yú)受精卵孵化的影響

將發(fā)情親魚(yú)放人規(guī)格為25 cmx15 cmx20 cm水族缸中，每個(gè)缸中放置2個(gè)洗凈并經(jīng)消毒的貝殼作為產(chǎn)卵場(chǎng)。待親魚(yú)自然交配后，將同一批受精卵隨機(jī)分為4組放人預(yù)先準(zhǔn)備好曝氣水的水族缸中，其中A組加入復(fù)方五倍子煎劑，B組加入慶大霉素，C組加入呋喃西林，D組為空白對(duì)照組，不添加任何藥物。每小組設(shè)3個(gè)平行。參照預(yù)試驗(yàn)結(jié)果及相關(guān)資料，最終確定的藥物濃度分別為復(fù)方五倍子煎劑20mg/L[8]，慶大霉素25 mg/L，呋喃西林25mg/L。各水族缸保持與暫養(yǎng)時(shí)相同水質(zhì)條件。觀察并記錄各組受精卵孵化情況，并計(jì)算孵化率。孵化率=出膜魚(yú)苗數(shù)/受精卵總數(shù)×100%

1.3 不同開(kāi)口餌料對(duì)金波子魚(yú)稚魚(yú)存活的影響

將孵化率最高組的初孵稚魚(yú)用于開(kāi)口餌料試驗(yàn)，待卵黃囊消失后開(kāi)始投餌。試驗(yàn)分為3個(gè)小組，每組3個(gè)平行，每個(gè)平行缸放置50尾稚苗，試驗(yàn)周期為7d。其中A組投喂蛋黃粉，B組投喂人工超微粉料，C組投喂草履蟲(chóng)。蛋黃組每個(gè)平行缸投喂0.1 g/次，蛋黃水懸液用60目紗網(wǎng)過(guò)濾，取上清液投喂;人工超微粉料組每個(gè)平行缸投喂0.1 g/次;濃度為40個(gè)/mL的草履蟲(chóng)培養(yǎng)液投喂10 mL/次[6]，各組每天均投喂3次，投喂時(shí)間分別為9：00、15：00和19：00。喂食完畢及時(shí)吸出殘餌并換水，每次換水1/4，溫差不超過(guò)±1℃。觀察并記錄各組稚魚(yú)存活情況，發(fā)現(xiàn)死魚(yú)及時(shí)撈出避免污染水質(zhì)。存活率=成活魚(yú)尾數(shù)，放養(yǎng)魚(yú)尾數(shù)×100%。

1.4 數(shù)據(jù)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（Mean+SD）表示，用SPSS V20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，用Levene法進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，不滿足齊性方差時(shí)對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行反正弦或者平方根處理，采用ANOVA對(duì)試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析，采用Duncan法進(jìn)行多重比較，取P<0.05為差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同藥物對(duì)金波子魚(yú)受精卵孵化的影響

如表1所示，添加五倍子復(fù)方煎劑組孵化率顯著高于其余各組（P<0.05），平均孵化率達(dá)到（81.22+6.52）%;慶大霉素組孵化率其次，達(dá)到（43.47+8.52）%，顯著高于呋喃西林組及空白組（P<0.05）;呋喃西林組平均孵化率為（ 27.07+4.54）%，顯著高于空白組（P<0.05）。而未添加任何藥物的空白組孵化率很低，僅為（1.32±2.28）%。其中，空白組從孵化開(kāi)始24 h內(nèi)受精卵死亡數(shù)量超過(guò)25%;36 h受精卵死亡數(shù)量超過(guò)50%;至50h幾乎全部死亡。

2.2不同開(kāi)口餌料對(duì)金波子魚(yú)稚魚(yú)存活的影響

經(jīng)過(guò)7d培育后，投喂人工超微粉料（利餌多）組金波子魚(yú)稚魚(yú)存活率最高，達(dá)到了（91.33+3.06）%，顯著高于其余各組（P<0.05）。投喂草履蟲(chóng)組存活率其次，為（83.33+3.06）%。而投喂蛋黃組的金波子魚(yú)稚魚(yú)存活率相對(duì)較低，顯著低于其余兩組（P<0.05）（表2）。

3 小結(jié)與討論

魚(yú)類受精卵在孵化過(guò)程中易受到水霉、弧菌等病原微生物感染而引起受精卵死亡，導(dǎo)致孵化失敗，因此，在孵化過(guò)程中會(huì)添加各種抑菌藥物以提高孵化效率。近年來(lái)，中草藥在食用魚(yú)養(yǎng)殖中的使用比較廣泛[9-11]，但在觀賞魚(yú)養(yǎng)殖中應(yīng)用較少，且鮮有文獻(xiàn)報(bào)道。金波子魚(yú)作為近年來(lái)國(guó)內(nèi)觀賞魚(yú)產(chǎn)業(yè)中的熱門(mén)品種而被廣泛關(guān)注。但由于缺乏相關(guān)繁殖生物學(xué)研究報(bào)道，其較低的受精卵孵化率及稚魚(yú)存活率成為養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)的主要制約因素。本研究中以五倍子、黃芩、大黃等中草藥為主的復(fù)方煎劑處理后，其受精卵孵化率顯著高于其余兩種藥物及空白對(duì)照組，表明復(fù)方五倍子中草藥煎劑在受精卵孵化過(guò)程中的抗菌效果優(yōu)于其他兩種藥物。該結(jié)果與盛竹梅等L81關(guān)于以五倍子為主的中草藥對(duì)虹鱒發(fā)眼卵霉菌感染的影響的結(jié)果一致。五倍子主要有效成分為鞣質(zhì)和沒(méi)食子酸，對(duì)多種細(xì)菌、真菌具有明顯的抑制能力，且沒(méi)食子酸能夠與蛋白質(zhì)結(jié)合生成鞣酸蛋白，對(duì)細(xì)菌有直接殺滅作用[1 2]。復(fù)方制劑中黃芩和大黃等藥物主要通過(guò)其活性成分黃芩苷和蒽醌類衍生物對(duì)金黃色葡萄球菌等水體致病菌產(chǎn)生強(qiáng)抑菌作用而發(fā)揮作用[13，14]。此外，有研究表明，飼料中添加五倍子可以促進(jìn)羅非魚(yú)生長(zhǎng)，增強(qiáng)免疫水平[15];而復(fù)方五倍子制劑同樣可提高鯽魚(yú)免疫力及抗應(yīng)激水平[16]，即五倍子復(fù)方制劑可顯著抑制水體中病原菌，提高金波子魚(yú)的受精卵孵化率。

本研究過(guò)程中發(fā)現(xiàn)慶大霉素組和呋喃西林組稚魚(yú)均出現(xiàn)有少量歪尾等畸形苗的存在，而中草藥組并無(wú)發(fā)現(xiàn)。呋喃西林具有抗菌譜廣、抗菌活性強(qiáng)的特點(diǎn)，雖然被包括中國(guó)在內(nèi)的多個(gè)國(guó)家禁止在食用魚(yú)養(yǎng)殖中使用，但目前在觀賞魚(yú)行業(yè)中仍有使用，并大量應(yīng)用于水霉病等多發(fā)性感染的治療中[17]。此外，慶大霉素對(duì)各類魚(yú)具有較高毒性也多有報(bào)道[18.19]。因此，由于抗生素類藥物具有藥物殘留時(shí)間長(zhǎng)、抗藥強(qiáng)、致畸率高等缺點(diǎn)，對(duì)孵化過(guò)程中的胚胎和剛孵出的稚魚(yú)影響比較大，用量把握不好可能會(huì)造成受精卵死亡和稚魚(yú)畸形，建議在觀賞魚(yú)中少用。本試驗(yàn)結(jié)果也表明，使用五倍子復(fù)方制劑促進(jìn)金波子魚(yú)受精卵孵化的效果要明顯優(yōu)于上述兩種抗生素，且短期內(nèi)無(wú)致畸作用。

蛋黃含有豐富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，如磷脂、礦物質(zhì)、維生素等，且粒徑較小適合稚魚(yú)攝食，因此蛋黃可以基本滿足多數(shù)稚魚(yú)的需要[5]。但由于在狹小的孵化缸內(nèi)蛋黃極易造成水質(zhì)敗壞，引起魚(yú)苗死亡，到了投喂后期，稚苗死亡量明顯增加[20]，因此在日常投喂中為保持水質(zhì)清新，降低稚魚(yú)死亡率，需要及時(shí)吸出殘餌糞便，并且適當(dāng)注入新水。草履蟲(chóng)經(jīng)常被用作魚(yú)苗的開(kāi)口餌料。雖然草履蟲(chóng)的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值沒(méi)有其他人工餌料豐富，而且草履蟲(chóng)一直處于運(yùn)動(dòng)狀態(tài)，對(duì)于稚苗攝食有一定的困難，但其作為一種活餌，含有優(yōu)質(zhì)蛋白質(zhì)、氨基酸、脂肪等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可基本滿足稚魚(yú)的營(yíng)養(yǎng)需求。只要養(yǎng)殖水體水質(zhì)較好，一般不會(huì)引起水質(zhì)的急劇惡化。所以在魚(yú)苗培育過(guò)程中，稚魚(yú)的存活率相對(duì)較高[21]。本試驗(yàn)使用蛋黃和草履蟲(chóng)作為開(kāi)口餌料，金波子魚(yú)稚魚(yú)7d存活率均為50%以上，其中草履蟲(chóng)組達(dá)80%以上，效果較好。但由于生物餌料來(lái)源安全性及穩(wěn)定性等問(wèn)題，在大規(guī)模生產(chǎn)中存在一定的制約。超微粒粉料作為人工配合飼料，其使用安全性及營(yíng)養(yǎng)全面性有著一定的保障。本試驗(yàn)所用利餌多在淡水魚(yú)苗水花、蝦苗、蟹苗的培育過(guò)程中使用較廣，其培育稚苗的存活率可達(dá)90%以上。但目前在觀賞魚(yú)魚(yú)苗培育過(guò)程中尚未廣泛使用。由于其成分含有大量生物活性蛋白及酵母菌等有益微生物，在培育稚苗時(shí)可以滿足稚苗攝食需求和營(yíng)養(yǎng)需求，而且對(duì)養(yǎng)殖水環(huán)境具有一定調(diào)節(jié)作用，不會(huì)因?yàn)樗|(zhì)的急劇惡化引起稚苗大量死亡。

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基金項(xiàng)目：四川省教育廳一般科研項(xiàng)目（18ZB0554）

作者簡(jiǎn)介：黃毅（1986-），女，重慶人，助教，碩士，主要從事水生觀賞動(dòng)物養(yǎng)殖方面的研究，（電話）0834-2580034（電子信箱）lemonhuangyi@126.com。