呼吸道病原體抗體檢測(cè)在成人感染中的臨床應(yīng)用

司 序,楊裕穎,陳 雷

(長(zhǎng)春市中心醫(yī)院 放免中心,吉林 長(zhǎng)春130051)

在日常生活中，呼吸道感染屬于常發(fā)疾病之一，主要臨床癥狀為發(fā)熱，如沒(méi)有得到及時(shí)治療，會(huì)導(dǎo)致患者的神經(jīng)系統(tǒng)等受到損害[1]。這種疾病的病原學(xué)較為復(fù)雜，同時(shí)具備季節(jié)性流感等特征。隨著醫(yī)療水平不斷提高，呼吸道病原體IgM抗體檢測(cè)在患者的呼吸道感染中具有較大的占比，使用范圍也不斷的擴(kuò)大，診斷過(guò)程中主要是依靠間接免疫熒光法，對(duì)較為常見(jiàn)的呼吸道非細(xì)菌病原體，例如：肺炎支原體(MP)、副流感病毒(PIV)、流感病毒A型(INFA)等進(jìn)行檢測(cè)，可以及早診斷，盡早治療[2]。為更好的探討呼吸道病原體IgM抗體檢測(cè)在成年呼吸道感染中的應(yīng)用，選取2018年2月-2019年3月因呼吸道感染來(lái)我院就診的住院患者，共計(jì)1722例，進(jìn)行有效的分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018年2月-2019年3月因呼吸道感染來(lái)我院就診的住院患者，共計(jì)1722例，納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者具有較為明顯的呼吸道感染；②主要癥狀為：扁桃體腫大、肺部濕啰音、咽部充血、發(fā)熱、喘息、咳嗽等；③所有患者均知曉本次研究，簽署知情同意書(shū)表示自愿參與。排除標(biāo)準(zhǔn)：①具有口服抗菌藥物史；②接受過(guò)外院的治療；③患有白血病、腫瘤疾病、自身免疫性疾病等。其中男856例，女866例，其中≥50歲的患者人群占總?cè)藬?shù)的75.8%，其余均為成年人。此次研究經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

所有患者均在空腹?fàn)顟B(tài)下抽取靜脈血2.0 ml，在采集血清樣本后的8 h之內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)，如果超出時(shí)間需要保存在2-8℃的環(huán)境中，如果7 d之內(nèi)不檢測(cè)，需要在-20℃的環(huán)境中冷凍，檢測(cè)選擇間接免疫熒光法[3]。

試劑：選擇歐蒙醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)診斷股份公司提供的產(chǎn)品。將抗原放置到載玻片中，具體包括呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒B型(INFB)、嗜肺軍團(tuán)菌(LP)、肺炎衣原體(CP)、肺炎支原體(MP)、流感病毒A型(INFA)、副流感病毒(PIV)、腺病毒(ADV)。等待檢測(cè)樣本中的IgM抗體和載玻片上的抗原之間出現(xiàn)特異性反應(yīng)，之后再和熒光素標(biāo)記的抗人球蛋白反應(yīng)形成抗體、抗原、抗人IgM-FITC復(fù)合物，之后再?gòu)臒晒怙@微鏡中觀察最終的結(jié)果。使用的其他試劑還包含：PBS溶液、吸附劑、抗人IgM磷酸緩沖液等[4]。

儀器：臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，選擇的是上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司，型號(hào)為T(mén)GL-16；低速離心機(jī)，同樣選擇上海盧湘儀離心機(jī)儀器有限公司，型號(hào)為T(mén)D5；水平搖床，選擇的是上海天呈實(shí)驗(yàn)儀器制造有限公司，型號(hào)為T(mén)S-200B；恒溫水浴箱選擇的是天津市恒奧科技發(fā)展有限公司，型號(hào)為HWT-6B；熒光顯微鏡選擇的是OLYMPUS BX51熒光顯微鏡。

方式：使用磷酸鹽緩沖液和25 μl的血清進(jìn)行稀釋，之后和150 μl和30 μl的吸附劑進(jìn)行混合，10 min離心，速度為13 000 r/min，避免在檢測(cè)過(guò)程中被其他原因所干擾，去除沉淀。將處理后的血清放置到載玻片中15 μl/孔。沒(méi)有進(jìn)行過(guò)稀釋的15 μl陽(yáng)性對(duì)照放到每一個(gè)孔中，同時(shí)將沒(méi)有稀釋的15 μl陰性對(duì)照放到另外一個(gè)孔中。將所有載玻片放到37℃的濕盒中進(jìn)行培育，時(shí)間為1.5 h。使用磷酸鹽緩沖液清洗載玻片，之后再沉淀到磷酸鹽緩沖液中，使用水平搖床晃動(dòng)10 min。載玻片在蒸餾水中進(jìn)行清洗，晾干。每一個(gè)孔中需要加入15 μl IgMFITC結(jié)合物溶液(這個(gè)過(guò)程不需要稀釋)，之后放到37℃的濕盒中進(jìn)行溫育，時(shí)間為0.5 h。重復(fù)前面的洗滌晾干步驟，將封閉介質(zhì)放入蓋上蓋玻片。在熒光顯微鏡400倍放大中觀察結(jié)果[5]。

1.3 觀察指標(biāo)

(1)分析病原體感染陽(yáng)性占比。陽(yáng)性判斷為：特異性蘋(píng)果綠色熒光；陰性的判斷為：沒(méi)有見(jiàn)到細(xì)胞呈現(xiàn)紅色或者沒(méi)有見(jiàn)到特異性熒光。IgM抗體陽(yáng)性提示急性感染。

(2)分析不同季節(jié)中呼吸道病原體檢出情況。3-5月為春季，6-8月為夏季，9-11月為秋季，12-2月為冬季。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0進(jìn)行分析，其中計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)，P<0.05提示有顯著差異。

2 結(jié)果

2.1 病原體感染陽(yáng)性占比分析

在所有住院的患者中，檢測(cè)8項(xiàng)呼吸道病原體為陽(yáng)性的為822例患者，占據(jù)所有受檢人群的47.7%。其中發(fā)生單項(xiàng)感染的患者有409例，占所有感染患者的49.8%；三重感染的患者有137例，占所有感染患者的16.7%；雙重感染的患者有264例，占所有感染者的32.1%；四重感染的患者有12例，占所有感染患者的1.4%，見(jiàn)表1。

表1 主要病原體感染陽(yáng)性占比比較

2.2 不同季節(jié)中呼吸道病原體檢出情況分析

秋、冬兩季呼吸道病原體檢出率較高，夏季、春季檢出率較低，肺炎支原體(MP)在秋冬兩季的檢出率為(25.8%、12.1%)，見(jiàn)表2。

表2 不同季節(jié)中呼吸道病原體檢出情況分析(例，%)

3 討論

臨床中，患者發(fā)生呼吸道感染，主要是支原體、病毒、細(xì)菌等引起的，特點(diǎn)為：發(fā)病急、傳播快、感染力強(qiáng)等[6]。陽(yáng)性率以及感染病原體的種類和年齡、季節(jié)、地區(qū)等有一定的關(guān)系，所以檢測(cè)的方式也會(huì)不同[7]。呼吸道發(fā)生感染后患者會(huì)出現(xiàn)氣喘、咳嗽、發(fā)熱、咳痰、咽痛癥狀，因?yàn)闆](méi)有特異性的表現(xiàn)，所以診斷比較困難，并不能及時(shí)給出準(zhǔn)確治療方案，給臨床治療帶來(lái)一定困難，使很多人不得不應(yīng)用廣譜抗生素治療[8]。早期對(duì)呼吸道感染患者給出明確的病原學(xué)診斷，不僅可以及時(shí)的給出準(zhǔn)確的治療方法，增強(qiáng)效果，改善預(yù)后，幫助患者快速恢復(fù)，還可以減輕痛苦以及家庭經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)等[9]。

呼吸道感染的病原體不會(huì)有特異性癥狀，所以需要采用相應(yīng)的檢測(cè)方法對(duì)患者的疾病進(jìn)行相關(guān)的診斷，目前為止，臨床中使用較多的檢測(cè)方法為：免疫熒光抗體法、血清學(xué)、病原體的分離培養(yǎng)法、核酸擴(kuò)增、直接檢測(cè)法、組織細(xì)胞培養(yǎng)法等，可以有效的診斷出患者的病情[10]。近年，隨著免疫標(biāo)記技術(shù)以及醫(yī)療技術(shù)的不斷進(jìn)步，間接或者直接免疫熒光學(xué)技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用處于不斷擴(kuò)大階段，這是因?yàn)?，這種技術(shù)具有低成本、方便、快速等優(yōu)勢(shì)[11]。在本次研究過(guò)程中，就是借助間接免疫熒光法對(duì)8項(xiàng)呼吸道病原體的IgM抗體篩查，只需要患者的一份血清樣品就可以檢測(cè)，避免多次采集樣本的麻煩，并且檢測(cè)的設(shè)備只需要使用熒光顯微鏡，最終的結(jié)果容易判斷，所以這項(xiàng)技術(shù)更加簡(jiǎn)便、直觀、經(jīng)濟(jì)、高效，加上對(duì)相關(guān)數(shù)據(jù)較為敏感，所以不僅在實(shí)驗(yàn)室還是臨床中，所存在的價(jià)值都較高[12]。

病原學(xué)檢查主要是培養(yǎng)，所檢測(cè)的陽(yáng)性率會(huì)受到樣本的接種、運(yùn)動(dòng)、采集是否及時(shí)因素的影響[13]。分子生物學(xué)技術(shù)雖然特異性較強(qiáng)，但是在檢驗(yàn)通量中并不能滿足不斷增加的標(biāo)本數(shù)量，便捷和快速的檢測(cè)方法受到更多人的關(guān)注，有學(xué)者認(rèn)為L(zhǎng)uminexxMAP多重分析技術(shù)平臺(tái)、多重PCR可以有效的建立快速篩查呼吸道感染，經(jīng)過(guò)對(duì)肺炎患者的咽拭子或者支氣管肺泡灌洗液標(biāo)本進(jìn)行檢驗(yàn)，可以快速的對(duì)感染病原體以及其亞型進(jìn)行鑒定，分析流行病原學(xué)中有一定的意義[14]。

不同地區(qū)的呼吸道感染特征被多種因素所決定，在近段時(shí)間中認(rèn)為，空氣污染程度和患者發(fā)生呼吸道感染有密切的聯(lián)系，研究表明，汽車(chē)的尾氣會(huì)產(chǎn)生微顆粒，人類吸入后會(huì)影響呼吸道中的Th2過(guò)敏型免疫反應(yīng)不斷增高，降低Th1的保護(hù)性免疫功能，導(dǎo)致呼吸道感染升高[15]。因?yàn)楹粑栏腥究赡苁鞘褂闷渌目咕幬飳?dǎo)致的，所以有研究顯示，21%的呼吸道感染患者是由于其他疾病導(dǎo)致的一種并發(fā)癥，例如：皮疹、腹瀉等，所以會(huì)被濫用抗菌藥物，早期的患者使用抗菌藥物會(huì)形成過(guò)敏性哮喘[16]。使用合理檢測(cè)手段，可以有效避免濫用抗菌藥物，在國(guó)外的研究中，會(huì)制作容易理解的呼吸道感染制作手冊(cè)，方便患者和家屬了解更多疾病的知識(shí)，同時(shí)促進(jìn)家屬和患者和醫(yī)生溝通中得到更多有效、準(zhǔn)確的信息，減少抗菌藥物的使用[17]。

從病原部位分離出病原體或者從病原部位取樣培養(yǎng)出病原體在臨床中被認(rèn)為是一種標(biāo)準(zhǔn)，但是在培養(yǎng)過(guò)程中會(huì)占用較多的時(shí)間，并且常規(guī)的培養(yǎng)方法不能更好的培養(yǎng)出非經(jīng)典細(xì)菌類病原體[18]。病毒等非典型細(xì)菌類病原體對(duì)于常見(jiàn)的抗生素并不靈敏，所以導(dǎo)致治療方案受到影響。早期使用快速的檢驗(yàn)方法，盡早明確病原體在臨床中屬于最為重要的目的[19]。身體受到病原體刺激后會(huì)出現(xiàn)體液免疫應(yīng)答，產(chǎn)生 IgM抗體，所以使用間接免疫熒光法可以更好的檢測(cè)出病原體IgM抗體，同時(shí)還可以作為臨床中早期的診治依據(jù)[20]。8項(xiàng)呼吸道病原體的IgM抗體篩查的試劑是將病原體作為抗原包，更好的檢測(cè)出血清中的IgM抗體，使用吸附劑對(duì)血清處理，可以有效的避免IgG抗體非特異結(jié)合對(duì)研究造成影響，提高這種方法的有效性。本次研究顯示：在所有住院的患者中，檢測(cè)8項(xiàng)呼吸道病原體為陽(yáng)性的為822例患者，占所有受檢人群的47.7%。其中發(fā)生單項(xiàng)感染的患者有409例，占所有感染患者的49.8%；三重感染的患者有137例，占所有感染患者的16.7%；雙重感染的患者有264例，占所有感染者的32.1%；四重感染的患者有12例，占所有感染患者的1.4%，可以證明此點(diǎn)。

秋、冬兩季呼吸道病原體檢出率較高，夏季、春季檢出率較低，肺炎支原體(MP)在秋冬兩季的檢出率為(25.8%、12.1%)，我們可以得出結(jié)論，在秋冬兩季導(dǎo)致呼吸道感染的概率會(huì)明顯增加，所以在日常生活中要高度關(guān)注秋冬季中身體反應(yīng)，及時(shí)診斷和治療。

綜上所述，在實(shí)施8項(xiàng)呼吸道病原體抗體檢測(cè)對(duì)成人感染的診斷過(guò)程中，結(jié)果較為顯著，在臨床中具有較大的意義，應(yīng)當(dāng)進(jìn)一步推廣應(yīng)用。