貴州羊肚菌的分子系統(tǒng)發(fā)育分析

李銀雙 劉作易 譚玉梅 任錫毅 劉永翔 黃永會

摘?要：本研究以貴州省貴陽市、六盤水、遵義和銅仁等地采集的羊肚菌樣本中挑選出24份子實體樣本，采用五個基因片段（ITS、LSU、EF1-a、RPB1、RPB2）聯(lián)合分析，結(jié)合子實體形態(tài)特征對其進行了物種鑒定。研究結(jié)果表明：貴州省境內(nèi)共分布有8個野生羊肚菌物種，包括黑色羊肚菌和黃色羊肚菌兩個類群，黑色羊肚菌有梯棱羊肚菌（M. importuna）、Mel-19、Mel-21，黃色羊肚菌有Mes-15、Mes-19、Mes-22、Mes-23、Mes-27。野生羊肚菌的發(fā)生時間為3—5月，具有喜濕喜陰的生長特性，Mes-15是首次報道具有火燒地偏好性的黃色種。

關(guān)鍵詞：貴州;野生羊肚菌;系統(tǒng)發(fā)育;多基因聯(lián)合

中圖分類號：Q-9文獻標識碼：A

文章編號：1008-0457（2020）03-0052-09?國際DOI編碼：10.15958/j.cnki.sdnyswxb.2020.03.009

Molecular Phylogenetic Analysis of Morchella in Guizhou

LI Yinshuang.1，3 ， LIU Zuoyi.4* ， TAN Yumei.2，3 ， REN Xiyi.2，3 ， LIU Yongxiang.2，3 ，HUANG Yonghui.2，3

（1. College of Life Sciences， Guizhou University， Guiyang， Guizhou 550025， China; 2. Institute of Biotechnology， Guizhou Academy of Agricultural Sciences， Guiyang， Guizhou 550006， China; 3. Guizhou Key Laboratory of Agricultural Biotechnology， Guiyang， Guizhou 550006， China;4. Guizhou Academy of Agricultural Sciences， Guiyang， Guizhou 550006， China）

Abstract：Combined with morphological characteristics of fruiting body of Morchella， 24 samples collected from Guiyang， Liupanshui， Zunyi and Tongren regions ， Guizhou Province were identified using five gene fragments （ITS， LSU， EF1-a， RPB1， RPB2） . The results showed that there existed 8 wild Morchella species in Guizhou Province， including two groups of black and yellow Morchella. Black morel are M. importuna， Mel-19， Mel-21， and yellow one containing Mes-15， Mes-19， Mes-22， Mes-23， Mes-27. The occurrence of wild morels in Guizhou was from March to May and the species prefered moisture and shade. Mes-15 was first reported to prefer to growing in burnt land.

Keywords：Guizhou; wild morel; phylogeny; multigene combination

羊肚菌（Morchella）隸屬于子囊菌亞門（Ascomycotina）、盤菌綱（Discomycetes）、盤菌目（Ezizales）、羊肚菌科（Morchellaceae）[1]。作為一種世界公認的珍稀食藥用菌，羊肚菌不僅味道鮮美，而且對降血脂、調(diào)節(jié)機體免疫力、抗疲勞、抗菌、抗病毒、抑制腫瘤、減輕放化療引起的毒副作用等具有顯著功效[2-3]。在羊肚菌的分類研究早期，有學者依據(jù)羊肚菌子實體形狀、大小、顏色、脈棱分布和凹坑深淺等形態(tài)特征將羊肚菌屬劃分為四大類群（黑色羊肚菌類群、黃色羊肚菌類群、半開羊肚菌類群和變紅羊肚菌類群）[4-6]。然而，世界范圍內(nèi)羊肚菌屬的形態(tài)學分類一直存在較大爭議[7-9]。隨著分子生物學技術(shù)在羊肚菌屬分類研究中的引入，特別是多基因譜系一致性系統(tǒng)發(fā)育學物種識別法（genealogical concordance phylogenetic species recognition，GCPSR）的應(yīng)用，為羊肚菌屬的分類研究帶來了革命性的變革[8，10]。2011年，ODONNELL等[11]首次利用4個基因（LSU、EF1-a、RPB1、RPB2）聯(lián)合的方法對羊肚菌屬進行了系統(tǒng)發(fā)育分析，認為羊肚菌屬是由黑色羊肚菌支系（Elata Clade）、黃色羊肚菌支系（Esculenta Clade）、變紅羊肚菌支系（Rufobrunnea Clade）三個支系構(gòu)成，將基于形態(tài)學鑒定的“半開羊肚菌”劃分到黑色羊肚菌支系中，提出采用所在類群縮寫+數(shù)字的方法來進行羊肚菌屬內(nèi)物種命名（Esculenta支系：Mes-n;Elata支系：Mel-n），該研究很好的規(guī)避了羊肚菌分類過程中的主觀性影響，解決了羊肚菌屬分類研究中的諸多爭議。已有研究證明，羊肚菌屬內(nèi)一共包括61個系統(tǒng)發(fā)育物種[12]。目前，部分黑色支系羊肚菌物種在我國已經(jīng)成功實現(xiàn)了人工栽培，但生產(chǎn)中使用的栽培菌種主要來自野生子實體的人工分離馴化，因此，分離菌株的準確鑒定已成為羊肚菌栽培成功與否的關(guān)鍵[8，13-14]。

貴州溫潤多雨的氣候條件孕育了豐富的野生羊肚菌資源。然而，有關(guān)貴州野生羊肚菌資源的種類、分布、生境等調(diào)查研究相對較少。在《貴州大型真菌資源》一書中記錄有兩種羊肚菌，分別為尖頂羊肚菌（Morchella conica）和羊肚菌（Morchella esculenta）[15] 。汪建文等[16]基于對現(xiàn)有資料整理與調(diào)查認為貴州分布有6個羊肚菌物種，分別為黑脈羊肚菌（Morchella angusticeps）、尖頂羊肚菌（Morchella conica）、粗柄羊肚菌（Morchella crassipes）、羊肚菌（Morchella eseulenta）、高羊肚菌（Morchella elata）、普通羊肚菌（Morchella vulgris）。但是，無論2種或者6種，這些調(diào)查研究仍停留在形態(tài)學水平，沒有采用分子系統(tǒng)學的方法對其進行物種鑒定，并且對貴州地區(qū)野生羊肚菌的地域分布、發(fā)生時間和生活環(huán)境等也沒有進行過深入研究?；谝陨戏治?，本研究在2018—2019年期間對貴陽市、六盤水、遵義和銅仁等地區(qū)開展野生羊肚菌采集工作，系統(tǒng)調(diào)查了貴州當?shù)匾吧蚨蔷陌l(fā)生時間與物種分布地域情況，同時，采用五個基因（ITS、LSU、EF1-a、RPB1、RPB2）聯(lián)合分析的方法對采集樣本進行了種類鑒定和物種多樣性分析，進而為野生羊肚菌的栽培馴化、雜交育種與長期保護利用提供科學依據(jù)。

1?材料與方法

1.1?樣本及培養(yǎng)基

樣本來源：2018—2019年期間，在貴州境內(nèi)的貴陽、六盤水、遵義和德江等地共采集到78份野生羊肚菌子實體樣本，在安順市普定縣羊肚菌栽培基地采集到2份栽培羊肚菌子實體樣本。所有樣本帶回實驗室后，自然風干-20℃保存于貴州省菌種中心。從采集樣本中挑選出24份具有典型形態(tài)特征、采集時間、地域差異和涉及每個采集地點的子實體樣本，編號GZCC20-0012～ GZCC20-0035，用于分子系統(tǒng)發(fā)育分析。24份樣本的采集信息見表1。參照圖書《中國大型真菌彩色圖譜》[17]，初步將24份采集樣本分為黑色羊肚菌和黃色羊肚菌兩個類群。

1.3.4?構(gòu)建多基因系統(tǒng)發(fā)育樹

參照文獻[9]對所有樣本序列和參考序列作拼接處理，將樣本序列和參考物種的ITS、LSU、EF1-a、RPB1、RPB2單個基因序列集合分開在Bioedit Sequence Alignment Editor（Version5.09）軟件中進行Clustalw Multiple Alignment處理，所有參數(shù)均為系統(tǒng)默認值;刪除序列兩端非對位的排列序列，數(shù)據(jù)中的空位“gap”作為缺失數(shù)據(jù)“missing date”處理，保證樣本和參考物種每個基因的長度一致，所得結(jié)果保存為fas格式，命名為fas1～fas5。得到ITS、LSU、EF1-a、RPB1、RPB2單個序列集合的切除拼接結(jié)果后，在Edit模式下利用Bioedit sequence Alignment Editor（Version5.09）軟件將五個序列集合以“ITS+LSU+EF1-a+RPB1+RPB2”的順序拼接起來，所得結(jié)果依然保存為fas格式，命名為fas6。五個序列集合整理過程中，同時下載基部類群變紅羊肚菌（Morchella rufobrunnea）的基因序列，將其作為系統(tǒng)發(fā)育分析的外類群。最后，把fas6文件輸入系統(tǒng)發(fā)育軟件MEGA6.0中，選擇ML法（Maximum Likehood），Bootstrap重復(fù)1000次，其他數(shù)值均為系統(tǒng)默認值，構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。由系統(tǒng)發(fā)育結(jié)果進行物種鑒定，分析貴州野生羊肚菌的物種多樣性。

1.4?形態(tài)學描述及生境分析

依據(jù)每個采集地點抽取樣本的多基因分子鑒定結(jié)果，結(jié)合鑒定菌株形態(tài)特征與每份樣本的采集信息，詳細記錄每個羊肚菌物種子實體的菌蓋和菌柄大小范圍、顏色深淺、楞脈分布等形態(tài)特征，記錄每個物種羊肚菌子實體的生長分布方式、生長環(huán)境、分布區(qū)域等，分析貴州當?shù)匾吧蚨蔷陌l(fā)生時間及規(guī)律。

2?結(jié)果與分析

2.1?多基因系統(tǒng)發(fā)育鑒定

2.1.1?ITS、LSU、EF1-a、RPB1和RPB2擴增測序

24份樣本的ITS擴增結(jié)果中，7份黑色羊肚菌樣本（GZCC20-0012、GZCC20-0013、GZCC20-0020、GZCC20-0021、GZCC20-0022、GZCC20-0023、GZCC20-0035）的ITS片段長度在750 bp左右，17份黃色羊肚菌樣本（GZCC20-0014、GZCC20-0015、GZCC20-0016、GZCC20-0017、GZCC20-0018、GZCC20-0019、GZCC20-0024、GZCC20-0025、GZCC20-0026、GZCC20-0027、GZCC20-0028、GZCC20-0029、GZCC20-0030、GZCC20-0031、GZCC20-0032、GZCC20-0033、GZCC20-0034）的ITS片段長度在1100bp左右，兩個類群的ITS片段長度存在較大差別。其LSU片段在1100bp左右，EF1-a片段大小在1100bp左右，RPB1片段大小在750bp左右，RPB2片段在800bp左右，該四個片段大小在兩個羊肚菌類群中則無明顯差異。所有擴增結(jié)果送至上海生物工程有限公司進行測序。

2.1.2?ITS、LSU、EF1-a、RPB1、RPB2序列比對分析

獲得所有序列信息后，切除引物片段輸入NCBI blast比對分析，下載并篩選出相似性較高的羊肚菌序列作為參考序列（表2）。120條樣本序列整理上傳至NCBI數(shù)據(jù)庫后，得到每個基因的序列登錄號如表3。

2.1.3?構(gòu)建多基因系統(tǒng)發(fā)育樹

由于黃色羊肚菌類群的ITS片段較長，為保證序列中的關(guān)鍵分析位點不被切除，故均以變紅羊肚菌（M. rufobrunnea）作為外類群，將黑色羊肚菌和黃色羊肚菌兩個類群分開分析。

黑色羊肚菌類群中，所有樣本序列及參考序列經(jīng)過對齊處理后，ITS序列的保留長度為580bp，LSU序列的保留長度為650bp，EF1-a序列的保留長度為760bp，RPB1序列的保留長度為610bp，RPB2序列的保留長度為600bp。將所有序列按照“ITS+LSU+EF1-a+RPB1+RPB2”的順序比對拼接后，全序列長度為3200bp，采用MEGA6.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖1）。以變紅羊肚菌（Morchella rufobrunnea）作為外類群（圖1），構(gòu)建黑色羊肚菌類群的系統(tǒng)發(fā)育樹后，7份黑色羊肚菌樣本序列與其他參考序列被聚類在一個大的分支上。其中，GZCC20-0012、GZCC20-0013、GZCC20-0022與Mel-21以99%的Bootstrap值聚為一類;GZCC20-0023與Mel-19以100%的Bootstrap值聚為一類;GZCC20-0035與Mel-6以100%的Bootstrap值聚為一類;GZCC20-0020、GZCC20-0021與Mel-10以100%的Bootstrap值聚為一類。而梯棱羊肚菌（M. importuna）、六妹羊肚菌（M. sextelata）對應(yīng)的系統(tǒng)發(fā)育物種分別是Mel-10和Mel-6。由此可知，黑色羊肚菌類群由Mel-21、Mel-19、梯棱羊肚菌（M. importuna）、六妹羊肚菌（M. sextelata）四個物種構(gòu)成。其中，鑒定為六妹羊肚菌（M. sextelata）的GZCC20-0035為栽培樣本。

黃色羊肚菌類群中，所有樣本序列及參考序列經(jīng)過對齊處理后，ITS序列的保留長度為860bp，LSU序列為550bp，EF1-a序列為800bp，RPB1序列為600bp，RPB2序列為655bp。將所有序列按照“ITS+LSU+EF1-a+RPB1+RPB2”的順序拼接后，全序列長度為3465bp，采用MEGA6.0構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹（圖2）。以變紅羊肚菌（Morchella rufobrunnea）作為外類群（圖2），構(gòu)建黃色羊肚菌類群的系統(tǒng)發(fā)育樹后，17份黃色羊肚菌樣本序列與其他參考序列被聚類在一個大的分支上。其中，GZCC20-0014、GZCC20-0018、GZCC20-0017、GZCC20-0016、GZCC20-0015、GZCC20-0019、GZCC20-0025、GZCC20-0029與Mes-15以98%的Bootstrap值聚為一類，GZCC20-0015和GZCC20-0016親緣性較近;GZCC20-0026、GZCC20-0027、GZCC20-0028、GZCC20-0032、GZCC20-0034與Mes-19以100%的Bootstrap值聚為一類，GZCC20-0028、GZCC20-0032、GZCC20-0034親緣性較近;GZCC20-0030與Mes-23以100%的Bootstrap值聚為一類;GZCC20-0031、GZCC20-0033與Mes-22以100%的Bootstrap值聚為一類;GZCC20-0024與Mes-27以100%的Bootstrap值聚為一類。由此可知，黃色羊肚菌類群由Mes-15、Mes-19、Mes-22、Mes-23、Mes-27五個物種構(gòu)成。

2.2?形態(tài)學描述及生境分析

2.2.1?形態(tài)學描述

依據(jù)多基因分子鑒定結(jié)果，結(jié)合每份樣本的采集信息，將9個羊肚菌物種的形態(tài)特征，生長分布等描述如下：

Mel-21：屬黑色羊肚菌支系，單生或雙生。采集時間為4月份，分布于貴陽市森林公園，六盤水市?；客寥纏H6.14～6.57，子實體周圍環(huán)境潮濕，植被類型為闊葉林。菌蓋圓錐形，黑色，長4.8cm～6.9cm，寬3.1cm～4.7cm，頂端或尖或鈍。菌柄長2.9cm～5.1cm，粗2.1cm～3.7cm，污白色，大小均勻（圖3：GZCC20-0012）。

Mel-19：屬黑色羊肚菌支系，單生。采集時間為5月份，分布于遵義市務(wù)川縣?；客寥纏H=6.51～6.77，子實體周圍環(huán)境潮濕，分布苔蘚和草類植物，植被類型為闊葉林與針葉林混交林。子實體粗壯，菌蓋圓錐形，褐色、黑褐色，長5.0cm～6.7cm，寬3.7cm～4.8cm，表面表面棱脊曲折，凹坑呈不規(guī)則形狀，密集形似蜂窩。菌柄長6.3cm～6.7cm，粗3.3cm～3.7cm，灰白色、灰黃色，表面平滑，與菌蓋連接處較細，基部略膨大（圖3：GZCC20-0023）。

梯棱羊肚菌（Mel-10）：屬黑色羊肚菌支系，單生。采集時間4月份，分布于六盤水市。基部土壤pH=6.51～7.22，子實體周圍環(huán)境潮濕、分布苔蘚和蕨類植物，植被類型為闊葉林。菌蓋圓錐形，灰色或灰褐色，長5.3cm～8.7cm，寬3.9cm～6.0cm，頂端尖，表面凹坑內(nèi)部有橫隔。菌柄長2.9cm～5.2cm，粗2.5～4.0cm，污白色;表面分布有分布有淺縱溝，伴有少量微絨毛和顆粒物（圖3：GZCC20-0020）。

六妹羊肚菌（Mel-6）：栽培羊肚菌，屬黑色羊肚菌支系，單生、雙生或叢生。子實體較大，菌蓋長圓錐形或長圓柱形，長6.5cm～8.2cm，寬4.4cm～6.3cm，顏色褐色、紅褐色、朱砂紅。菌柄長5.2cm～7.2cm，粗2.7cm～5.5cm，白色，表面分布有大量縱溝與顆粒物質(zhì)，基部膨大。該種可從子實體大小和顏色上和其他物種明顯區(qū)分開（圖3：GZCC20-0035）。

Mes-15：屬黃色羊肚菌支系，單生、雙生或叢生。采集時間3月份、4月份，該種分布較廣，分布于貴陽市森林公園、貴陽市花溪區(qū)、貴陽市小河區(qū)、銅仁市碧江區(qū)、銅仁市江口縣?；客寥纏H=6.27～7.36。子實體周圍環(huán)境潮濕、分布苔蘚和草類植物，采集于闊葉林、綠化草坪。在該物種的兩個采集地出現(xiàn)了大量出菇現(xiàn)象，周圍伴有火燒地痕跡，推測該物具有火燒地偏好性。菌蓋卵圓形、圓錐形或無規(guī)則形狀，顏色黃棕色、淡黃色，長3.0cm～5.5cm，寬2.7cm～4.8cm，頂端或尖或鈍，表面凹坑較深，凹坑內(nèi)部有橫隔。外部脈棱上分布有少量刺突，肉質(zhì)特別脆，這是該種的一個顯著標志。菌柄長2.3cm～6.4cm，粗1.7cm～2.9cm，顏色淡黃色，表面光滑，大小均勻（圖3：GZCC20-0014）。

Mes-19：屬黃色羊肚菌支系，單生。采集時間3月、4月、5月，分布于銅仁市碧江區(qū)，銅仁市江口縣，銅仁市思南縣?；客寥纏H=6.20～7.18，實體周圍環(huán)境潮濕、分布苔蘚和草類植物，采集于闊葉林、綠化草坪。菌蓋近圓柱形或圓球形，形似花朵，顏色淺灰色、灰黃色，長4.0cm～5.9cm，寬3.8cm～4.2cm，表面凹坑較深，頂端圓鈍。菌柄長4.5cm～5.7cm，粗2.2cm～3.5cm，顏色淡黃色，表明光滑（圖3：GZCC20-0027）。

Mes-22：屬黃色羊肚菌支系，單生。采集時間3月份、4月份，分布于銅仁市玉屏縣，銅仁市思南縣。未采集到土壤，子實體周圍潮濕，分布有大量草類植物，采集于河灘草叢中。菌蓋長圓錐形，顏色淡黃色、灰白色，長4.8cm～6.7cm，寬3.8cm～4.1cm，頂端或尖或鈍，肉質(zhì)脆，部分棱脊上分布有小裂痕。菌柄長3.7cm～5.1cm，粗1.8cm～2.9cm，顏色白色，表面光滑（圖3：GZCC20-0031）。

Mes-23：屬黃色羊肚菌支系，單生，雙生。采集時間4月份，分布于銅仁市石阡縣，基部土壤pH=6.45～7.27，子實體周圍環(huán)境潮濕、分布苔蘚和草類植物，植被類型為闊葉林。菌蓋圓柱形、圓錐形、圓球形皆有，長4.8cm～5.7cm，寬4.2cm～4.6cm;表面凹坑較深，肉質(zhì)脆，幼小時深褐色，成熟后顏色黃灰色、黃褐色;菌肉表面有少許刺突。菌柄長4.3cm～5.9cm，粗1.9cm～2.5cm，污白色、灰黃色，部分表面分布有少量顆粒物質(zhì)（圖3：GZCC20-0030）。

Mes-27：屬黃色羊肚菌支系，單生，雙生或叢生。采集時間4月份，分布于銅仁市德江縣?；客寥纏H=6.50～7.51，子實體周圍潮濕，分布有苔蘚，植被類型為闊葉林與針葉林混交林。菌蓋近卵圓錐形，表面凹坑較深，頂端或尖或鈍，長4.2cm～5.7cm，寬3.6cm～4.4cm，顏色灰色、黃灰色。菌柄長4.2cm～5.0cm，粗1.9cm～2.6cm，白色、污白色，表面光滑，大小均勻（圖3：GZCC20-0024）。

2.2.2?生境分析

從多基因系統(tǒng)發(fā)育結(jié)果與樣本采集信息可知，不同羊肚菌物種在形態(tài)特征、生長分布方式和分布地域等存在較大差異。在生境上，闊葉林、混交林地、綠化草坪和河灘濕地均能采集到羊肚菌子實體，其周圍一般都有苔蘚或草類等禾本科植物，環(huán)境相對陰濕，表明羊肚菌具有喜濕喜陰的生長特性。測定基部土壤pH表明，羊肚菌的生長偏中性，兩個類群無明顯差別。由樣本采集信息（表1）及其他人的經(jīng)驗，只在3月、4月和5月份里采集到了羊肚菌子實體，而每年的3—5月份為貴州的無霜期，大部分地區(qū)氣溫回升、降雨增加，推測該時間段為貴州地區(qū)野生羊肚菌子實體高發(fā)生期。值得一提的是，已有研究表明部分羊肚菌物種具有火燒地偏好性，具體表現(xiàn)為：在發(fā)生過火燒的林地或耕地的第一年會出現(xiàn)羊肚菌大量出菇的現(xiàn)象[11，19]。迄今為止，共發(fā)現(xiàn)6個（Mel-1、Mel-6、Mel-7、Mel-8、Mel-9、Mel-10）偏好火燒跡地生境物種，全為黑色支系物種[8，11]。本研究在貴陽市的兩個采集地發(fā)現(xiàn)：黃色支系物種Mes-15子實體大量出現(xiàn)在上一年的火燒林地中，火燒地特征與其他報道相符[8，11，19]，表明Mes-15這一物種也具有火燒地偏好性。

3?結(jié)論與討論

羊肚菌的形態(tài)學分類體系一直存在較大爭議，分子生物學分析技術(shù)在羊肚菌屬分類研究中的引入，解決了羊肚菌屬分類研究中的諸多爭議。然而，目前羊肚菌屬內(nèi)物種是根據(jù)多基因譜系進行界定的，各系統(tǒng)發(fā)育物種的形態(tài)學研究還不夠深入，形態(tài)學記錄相當有限，這給羊肚菌商品信息和科學信息的準確交流帶來了很多麻煩[8，20]。本研究通過對采集樣本進行形態(tài)學初步分析也發(fā)現(xiàn)，羊肚菌屬內(nèi)各系統(tǒng)發(fā)育物種的形態(tài)學記錄非常之少，只能將采集樣本初步分為黑色羊肚菌和黃色羊肚菌兩個類群。

野生羊肚菌資源在我國許多省份都有分布，武冬梅[9]采用4個基因（ITS、EF1-a、RPB1、RPB2）聯(lián)合的方法對我國新疆地區(qū)的野生羊肚菌分布物種進行分析，認為新疆地區(qū)共分布有7個羊肚菌物種，新增了兩個中國新紀錄種（Mel-2、Mes-17）。除上述報道外，國內(nèi)關(guān)于我國野生羊肚菌資源分布的多基因譜系研究還不多。貴州良好的氣候類型，孕育了豐富的野生羊肚菌資源。但是，以往貴州野生羊肚菌資源的調(diào)查研究，只停留在形態(tài)學水平。另外，野生羊肚菌出菇期短，分布數(shù)量有限，大量采摘導致野生資源逐漸消失，如何科學保護和利用這一野生真菌資源成為一個亟需解決的問題。本研究通過對貴州境內(nèi)采集的24份羊肚菌樣本進行多基因譜系分析，將所有樣本鑒定為9個不同的羊肚菌物種。其中，GZCC20-0035為采自安順市普定縣的栽培樣本，屬于黑色羊肚菌類群中的六妹羊肚菌（M. sextelata），是目前國內(nèi)主要栽培物種之一。其余23份野生羊肚菌樣本鑒定為8個野生羊肚菌物種，包括黑色羊肚菌和黃色羊肚菌兩個類群，其中，黑色羊肚菌有Mel-21、Mel-19、梯棱羊肚菌（M. importuna），黃色羊肚菌有Mes-15、Mes-19、Mes-22、Mes-23、Mes-27。在準確的分子鑒定的基礎(chǔ)之上，本研究給予了每個物種正確的科學名稱，糾正了以往研究中錯誤命名的現(xiàn)象，詳細記錄了不同物種的形態(tài)特征、分布地域、生長分布方式等。并通過樣本采集信息分析，認為貴州當?shù)匾吧蚨蔷陌l(fā)生時間為3—5月份，生長土壤pH接近中性，具有喜濕喜陰的生長特性，首次發(fā)現(xiàn)Mes-15這一黃色支系物種具有火燒地偏好性。這不僅豐富了貴州真菌資源信息庫，也為當?shù)匾吧蚨蔷Y源的長期保護利用提供了科學依據(jù)，有望下一步加快野生菌種資源的栽培馴化和良種選育工作，促進羊肚菌產(chǎn)業(yè)的健康長遠發(fā)展。

參?考?文?獻：

[1] 黃年來，林志彬，陳國良，等.中國食藥用菌學[M].上海：上?？茖W技術(shù)文獻出版社，2010：1370-1351.

[2] 徐永強，張明生，張麗霞.羊肚菌的生物學特性，營養(yǎng)價值及其栽培技術(shù)[J].種子，2006，25（7）：97-99.

[3] 萬春艷.羊肚菌的藥用研究近況[J].中國林副特產(chǎn)，2008（4）：91-92.

[4] BUNYARD B A， ROYSE N D J. A systematic assessment of Morchella using RFLP analysis of the 28s ribosomal RNA gene [J]. Mycologia，1994，86（6）：762-772.

[5] WIPF D， MUNCH J C， BOTTON B. DNA phylogenies in morels： complete sequences of the internal transcribed spacer of genes coding for rDNA in Morchella esculent（yellow morel） and Morchella conia（black morel） [J]. Applied and environmental microbiology， 1996，62（9）：3541-3543.

[6] GUZMAN G， TAPIA F. The known morels in mexico， a description of a new blushing species， Morchella rufobrunnea， and new data on M.guatemalensis [J]. Mycologia，1998，90（4）：705-714.

[7] 劉偉，馮麗，張亞平.新疆羊肚菌rDNA的ITS序列分析[J].石河子大學學報（自然科學版），2009，27（5）：584-587.

[8] 杜習慧，趙琪，楊祝良.羊肚菌的多樣性，演化歷史及栽培研究進展[J].菌物學報，2014，33（2）：183-197.

[9] 武冬梅.新疆野生羊肚菌分子系統(tǒng)學和遺傳多樣性研究[D].北京：中國農(nóng)業(yè)大學， 2015：37-56.

[10] TAYLOR J W， JACOBSON D J， KROKEN S， et al. Phylogenetic species recognition and species concepts in fungi [J]. Fungal genetics and biology， 2000，31（1）：21-32.

[11] ODONNELL K， ROONEY A P， MILLS G L， et al. Phylogeny and historical biogeography of true morels （Morchella） reveals an early Cretaceous origin and high continental endemism and provincialism in the Holarctic [J]. Fungal genetics and biology，2011，48（3）：252-265.

[12] DU X H， ZHAO Q， O'DONNELL K， et al. Multigene molecular phylogenetics reveals true morels （Morchella） are especially species-rich in China [J].Fungal genetics and biology， 2012，49（6）：455-469.

[13] 趙琪，康平德，戚淑威，等.羊肚菌資源現(xiàn)狀及可持續(xù)利用對策[J].西南農(nóng)業(yè)學報，2010，23（1）：266-269.

[14] 楊燕，田鴻，張小平，等.基于ITS和ISSR的羊肚菌種質(zhì)資源遺傳多樣性分析[J].西南農(nóng)業(yè)學報，2018，31（10）：2004-2009.

[15] 吳興亮.貴州大型真菌資源[M].貴陽：貴州科學出版社， 1989：20-21.

[16] 汪建文，洪江，鄧春英.中國貴州藥用真菌資源Ⅰ子囊菌門[J].貴州科學，2018，36（5）：18-23.

[17] 袁明生，孫佩瓊.中國大型真菌彩色圖譜[M].成都：四川科學技術(shù)出版社，2013：47-49.

[18] DU X H， ZHAO Q， YANG Z L， et al. How well do ITS rDNA sequences differentiate species of true morels （Morchella） [J]. Mycologia， 2012，104（6）：1351-1368.

[19] GREENE D F， MACDONALD S E， CUMMING S， et al. Seedbed variation from the interior through the edge of a large wildfire in alberta [J].Canadian journal of forest research， 2005，35（7），1640-1647.

[20] 杜習慧.黑色羊肚菌支系的物種資源，生殖模式和遺傳多樣性研究進展[J].菌物研究，2019，17（4）：240-251.