響應(yīng)面法優(yōu)化富硒粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基成分

(福建生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院,福建福州 350007)

粗毛纖孔菌(Inonotushispidus)屬于銹革孔菌科(Hymenochaetaceae)纖孔菌屬(Inonotus),又名粗毛黃褐孔,是一種珍惜的藥用真菌[1]。該菌以寄生為主,主要分布于新疆、寧夏、內(nèi)蒙古、黑龍江、吉林等北溫帶地區(qū)[2-3]。該菌在民間作為“桑黃”采集入藥,常用于糖尿病、痛風(fēng)、關(guān)節(jié)炎等疾病[2]。經(jīng)國(guó)內(nèi)專家學(xué)者對(duì)該菌進(jìn)行考證,發(fā)現(xiàn)該菌即為古代中藥“桑黃”[4-5]。此外,大量研究表明該菌具有多種生物活性,如抗病毒[6]、抗氧化[7-9]、抗腫瘤[10-13]、降血脂[14]、活血化瘀[15-16]、保肝[17]及提高免疫力[18]等作用。目前對(duì)該菌的研究主要集中在鑒定[9,19]、菌種篩選[20]、栽培[21-22]以及多糖[7]、酚類化合物[9]、三萜[14]等生物活性代謝物及小分子化合物[11]的提取及研究方面。

已有研究表明,食藥用菌如平菇、雙孢菇、雨傘菇、草菇、榆黃菇、牛肝菌、靈芝等具有轉(zhuǎn)化無(wú)機(jī)硒并積累有機(jī)硒元素的有效機(jī)制[39-44]。理論上野生食藥用菌中硒含量應(yīng)具較高水平,但實(shí)際上大多數(shù)野生食藥用物種都處于硒缺乏狀態(tài),每克子實(shí)體干重含硒濃度小于1 μg[45]。研究表明,食藥用菌積累微量營(yíng)養(yǎng)素的能力受土壤基質(zhì)、真菌種類和元素類型的影響[46],且生長(zhǎng)基質(zhì)中硒的濃度也會(huì)阻礙食藥用菌菌絲的生長(zhǎng)和子實(shí)體的形成[47-48]。因此,了解食藥用菌對(duì)無(wú)機(jī)硒的耐受度及合理的富硒培養(yǎng)基成分是生產(chǎn)富硒功能性食藥用菌的前提條件?，F(xiàn)如今,關(guān)于粗毛纖孔菌對(duì)無(wú)機(jī)硒的耐受度及富硒培養(yǎng)基成分還鮮有報(bào)道。本研究通過(guò)響應(yīng)面法對(duì)富硒粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基成分進(jìn)行優(yōu)化,旨在減少無(wú)機(jī)硒對(duì)粗毛纖孔菌的抑制作用,最大程度保證該菌菌絲能夠在富硒的同時(shí),正常甚至更好地生長(zhǎng),提高富硒菌絲的產(chǎn)量。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

粗毛纖孔菌(Inonotushispidus) 福建農(nóng)林大學(xué)國(guó)家菌草工程技術(shù)研究中心提供;亞硒酸鈉 西亞試劑公司;葡萄糖 西隴科學(xué)股份有限公司;硫酸鎂 阿拉丁工業(yè)有限公司;磷酸二氫鉀 西隴科學(xué)股份有限公司;VB1山東西亞化學(xué)工業(yè)有限公司;濃硝酸 南京化學(xué)試劑股份有限公司;母種培養(yǎng)基 為改良PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g/L、葡萄糖30 g/L、硫酸鎂0.75 g/L、磷酸二氫鉀1 g/L、維生素B1(VB1)1 mg/L、瓊脂15 g/L。

LDZX-50FBS高壓蒸汽滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠;SW-CJ-2A超凈工作臺(tái) 蘇州佳寶凈化工程設(shè)備有限公司;HPX-9272MBE電熱恒溫培養(yǎng)箱 上海博迅實(shí)業(yè)有限公司;X-seriesⅡ電感耦合等離子體質(zhì)譜儀 Thermo股份有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 母種活化及接種 取粗毛纖孔菌斜面母種約0.25 cm2接種于改良PDA平板中,倒置于恒溫培養(yǎng)箱30 ℃暗光培養(yǎng)。待菌絲生長(zhǎng)覆蓋至平板2/3左右,于菌落邊緣取直徑為0.6 cm活化菌塊作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)?zāi)阜N。

1.2.2 單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.2.1 硒濃度對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響 以改良PDA培養(yǎng)基為基礎(chǔ),向其中添加1 mg/mL亞硒酸鈉溶液,通過(guò)梯度稀釋法配制硒濃度分別為2.33、4.66、9.31、18.63、37.25、74.5、149、298和596 mg/L的供試培養(yǎng)基,以無(wú)硒添加的改良PDA培養(yǎng)基為對(duì)照(CK)。將供試培養(yǎng)基注入滅菌(121 ℃、20 min)后的培養(yǎng)皿,每皿約25 mL,冷卻凝固后接入直徑為0.6 cm的活化菌塊,每個(gè)濃度5個(gè)重復(fù)。30 ℃暗光倒置培養(yǎng)8 d后,觀察粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)情況,使用游標(biāo)卡尺利用十字交叉法精確測(cè)量菌落生長(zhǎng)直徑,記錄數(shù)據(jù)。

1.2.2.2 常規(guī)培養(yǎng)料對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響 以改良PDA培養(yǎng)基為基礎(chǔ),分別配制麩皮、玉米粉、大米、豆粉培養(yǎng)基,用以篩選粗毛纖孔菌菌絲最適生長(zhǎng)培養(yǎng)料。其中:

麩皮培養(yǎng)基:麩皮50 g/L、葡萄糖30 g/L、MgSO40.75 g/L、KH2PO41 g/L、VB11 mg/L、瓊脂15 g/L,pH自然。

玉米粉培養(yǎng)基:玉米粉50 g/L、葡萄糖30 g/L、MgSO40.75 g/L、KH2PO41 g/L、VB11 mg/L、瓊脂15 g/L,pH自然。

大米培養(yǎng)基:大米50 g/L、葡萄糖30 g/L、MgSO40.75 g/L、KH2PO41 g/L、VB11 mg/L、瓊脂15 g/L,pH自然。

豆粉培養(yǎng)基:豆粉50 g/L、葡萄糖30 g/L、MgSO40.75 g/L、KH2PO41 g/L、VB11 mg/L、瓊脂15 g/L,pH自然。

每種培養(yǎng)基5個(gè)重復(fù),30 ℃暗光倒置培養(yǎng)8 d后觀察粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)情況,測(cè)量并記錄數(shù)據(jù)。

1.2.2.3 補(bǔ)充碳源對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響 以改良PDA培養(yǎng)基為基礎(chǔ),將培養(yǎng)基中的葡萄糖(30 g/L)調(diào)整為等量蔗糖、乳糖、果糖或海藻糖,每種培養(yǎng)基5個(gè)重復(fù),30 ℃暗光倒置培養(yǎng)8 d后觀察粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)情況,測(cè)量并記錄數(shù)據(jù)。

1.2.2.4 培養(yǎng)基pH對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響 多數(shù)食藥用菌適宜在微酸和中性pH條件下生長(zhǎng),因此,以改良PDA培養(yǎng)基為基礎(chǔ),將培養(yǎng)基pH分別調(diào)整為5.0、5.5、6.0、6.5、7.0、7.5,每種培養(yǎng)基5個(gè)重復(fù),30 ℃暗光倒置培養(yǎng)8 d后觀察粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)情況,測(cè)量并記錄數(shù)據(jù)。

1.2.3 Box-Behnken design優(yōu)化粗毛纖孔菌菌絲 富硒培養(yǎng)基配方為考察培養(yǎng)基各成分與外源硒對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響及其之間的交互效應(yīng),以單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果為依據(jù),以粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度為指標(biāo)(Y),在最適pH條件下,采用Box-Behnken模型設(shè)計(jì)三因素、三水平組合實(shí)驗(yàn)(表1),對(duì)結(jié)果進(jìn)行響應(yīng)面分析,得到最優(yōu)響應(yīng)Y值,從而得到最佳富硒粗毛纖孔菌菌絲培養(yǎng)基配方。

表1 BBD實(shí)驗(yàn)因素水平表Table 1 Factors and levels table of BBD experiment

1.2.4 菌絲生長(zhǎng)情況檢測(cè) 菌絲生長(zhǎng)情況通過(guò)菌絲平均生長(zhǎng)速度進(jìn)行評(píng)估,利用十字交叉法對(duì)培養(yǎng)后平板內(nèi)粗毛纖孔菌菌絲進(jìn)行測(cè)量,測(cè)量所得菌絲生長(zhǎng)直徑除以培養(yǎng)時(shí)間即為菌絲生長(zhǎng)速度,其中菌絲生長(zhǎng)直徑為測(cè)量獲得總直徑減去初始直徑。最大耐受濃度(MTC)指不引起受試對(duì)象出現(xiàn)死亡的最高計(jì)量,即當(dāng)實(shí)驗(yàn)濃度處于最大耐受濃度時(shí),菌絲體有生長(zhǎng);而實(shí)驗(yàn)濃度高于MTC時(shí),則生長(zhǎng)被完全抑制。

1.2.5 富硒粗毛纖孔菌菌絲硒含量的測(cè)定 參考食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)(GB 5009.268-2016)[49],采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS),精確稱取富硒粗毛纖孔菌菌絲干試樣0.5 g于聚四氟乙烯消解內(nèi)罐,加5 mL硝酸浸泡過(guò)夜。封好消解罐放入恒溫干燥箱,160 ℃保持6 h,自然冷卻至室溫后打開(kāi)加熱趕酸至近干,將消化液吸入25 mL容量瓶中,用少量1%硝酸溶液洗滌內(nèi)罐和內(nèi)蓋3次,合并洗液,用1%硝酸定容,混勻備用。將試樣溶液與空白溶液分別注入電感耦合等離子體質(zhì)譜儀中,測(cè)定硒元素含量。

1.3 數(shù)據(jù)處理

利用DPS 7.05軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行隨機(jī)單因素方差分析,采用Tukey多重比較法進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。利用Design-Expert 8. 06軟件對(duì)響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)進(jìn)行設(shè)計(jì)、分析并繪制響應(yīng)曲面。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1.1 硒濃度對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響 由圖1可知,粗毛纖孔菌菌絲的生長(zhǎng)情況受外源硒影響較大。當(dāng)培養(yǎng)基中所添加硒濃度≤18.63 mg/L時(shí),粗毛纖孔菌菌絲的生長(zhǎng)速度與對(duì)照組無(wú)顯著性差異(P>0.05)。隨處理濃度的升高,當(dāng)硒濃度≥37.25 mg/L時(shí),粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)開(kāi)始受到明顯的抑制,其生長(zhǎng)速度顯著性降低(P<0.05)。當(dāng)硒濃度達(dá)到298 mg/L時(shí),粗毛纖孔菌菌絲略有生長(zhǎng),其生長(zhǎng)速度與零生長(zhǎng)組(即完全抑制組,硒濃度為596 mg/L)無(wú)顯著性差異(P>0.05)。因此,粗毛纖孔菌菌絲對(duì)硒的最大耐受濃度為298～596 mg/L,而后續(xù)實(shí)驗(yàn)中硒的濃度以18.63 mg/L為宜。

圖1 硒濃度對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的影響Fig.1 Effect of Se concentration on themycelia growth rate of I.hispidus注:不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05);圖2～圖4同。

2.1.2 常規(guī)培養(yǎng)料對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響 由圖2可知,粗毛纖孔菌菌絲在常規(guī)培養(yǎng)料配制的培養(yǎng)基上均能生長(zhǎng),但其菌絲生長(zhǎng)速度存在顯著性差異(P<0.05),且菌絲稠密度相差較大。粗毛纖孔菌在麩皮培養(yǎng)基上生長(zhǎng)效果最好,其菌絲的生長(zhǎng)速度可達(dá)到6.6 mm/d,且菌絲稠密度最高;其次為改良PDA培養(yǎng)基;以玉米粉、大米、豆粉為培養(yǎng)料時(shí),其菌絲生長(zhǎng)速度顯著降低(P<0.05),且菌絲稠密度明顯弱于改良PDA培養(yǎng)基。此外,粗毛纖孔菌菌絲對(duì)玉米粉的可利用度最低。因此,后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取麩皮為培養(yǎng)基。

圖2 常規(guī)培養(yǎng)料對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的影響Fig.2 Effect of the principal components of culture mediumon the mycelia growth rate of I.hispidus注:菌絲的稠密度:+++:CK程度,++++:高于CK程度,++:低于CK程度,+:低于++程度;圖3、圖6同。

2.1.3 補(bǔ)充碳源對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響 如圖3所示,粗毛纖孔菌對(duì)不同補(bǔ)充碳源的可利用度不同,以不同類型的補(bǔ)充碳源作為培養(yǎng)基成分,其菌絲生長(zhǎng)速度存在顯著性差異(P<0.05),且菌絲稠密度相差較大。當(dāng)以葡萄糖作為補(bǔ)充碳源時(shí),粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度最高,菌絲稠密度最佳;以蔗糖、果糖、海藻糖作為補(bǔ)充碳源時(shí),其菌絲生長(zhǎng)速度稍低,菌絲稠密度則明顯弱于葡萄糖的效果。粗毛纖孔菌菌絲對(duì)乳糖的可利用度最低。因此,后續(xù)實(shí)驗(yàn)選取葡萄糖作為補(bǔ)充碳源。

圖3 補(bǔ)充碳源對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的影響Fig.3 Effect of supplementary carbon sourceon the mycelia growth rate of I. hispidus

2.1.4 pH對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)的影響 由圖4可知,當(dāng)pH條件偏酸時(shí),該粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度偏低;當(dāng)pH處于6.5～7.5時(shí),該粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度先隨pH的增大而增加,再隨pH的增大而降低,于pH7.0時(shí)達(dá)到最佳,表明該粗毛纖孔菌菌株在中性pH條件下長(zhǎng)勢(shì)最好。因此,后續(xù)實(shí)驗(yàn)中pH條件以7.0為宜。

圖4 pH對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的影響Fig.4 Effect of pH on the mycelia growth rate of I.hispidus

2.2 響應(yīng)面法優(yōu)化粗毛纖孔菌菌絲富硒培養(yǎng)基配方

2.2.1 響應(yīng)面試驗(yàn)結(jié)果及方差分析 通過(guò)Design-Expert 8.06軟件設(shè)計(jì)響應(yīng)面試驗(yàn),基于單因素結(jié)果,以麩皮(X1)、葡萄糖(X2)及硒(X3)為自變量,以粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速率平均值為響應(yīng)值(Y),進(jìn)行響應(yīng)面試驗(yàn),試驗(yàn)方案與結(jié)果見(jiàn)表2。通過(guò)Design-Expert 8.06對(duì)表2結(jié)果進(jìn)行分析,得到的3因素與菌絲生長(zhǎng)速度(Y)之間的回歸模型可以表述為:

表2 BBD實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果Table 2 Design matrix and the results of Box-Behnken

2.2.2 各因素交互作用對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的響應(yīng)面分析 為考慮交互作用對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的影響,在另一因素條件固定不變(編碼水平為零)的情況下,分析兩兩因素交互作用對(duì)其菌絲生長(zhǎng)速度的影響。通過(guò)Design-Expert 8.06軟件處理上述實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)得到3D響應(yīng)曲面圖和等高線分析圖(圖5),可以直觀地看出各個(gè)因子之間的交互作用對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度的影響。響應(yīng)面分析中,等高線的形狀可以反映兩因素間交互作應(yīng)對(duì)響應(yīng)值影響的強(qiáng)弱大小,圓形表示不顯著,橢圓形則與之相反;等高線的稀疏情況反映響應(yīng)面圖像的平陡情況。從圖5可以看出,兩兩因素之間的等高線形狀均為橢圓形,表明其交互作用顯著。由圖5A可知,粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度(Y)隨麩皮添加量(X1)和葡萄糖添加量(X2)的增加而增加;由圖5B可見(jiàn),粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度(Y)隨麩皮添加量(X1)的增加和硒添加量(X3)的減小而增加;在較小硒添加(X3)情況下,麩皮添加量(X1)

表3 菌絲生長(zhǎng)速度響應(yīng)模型的方差分析Table 3 ANOVA for response surface quadratic model of mycelia growth rate

圖5 兩兩因素交互作用對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度影響的響應(yīng)曲面圖和等高線分析圖Fig.5 The interactive effects between(A)bran and glucose,(B)bran and Se,(C)glucose and Seon I. hispidus mycelia growth rate showed by 3-D response surface and 2-D contour plots

在很大的范圍內(nèi)均可取到較大的Y值;圖5C也表現(xiàn)出與圖5B相同的趨勢(shì),表明硒添加對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)不利,但可以通過(guò)其他因素與其交互作用減少其對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)抑制作用的影響。綜合各圖,各因素之間的交互作用與回歸模型的方差分析結(jié)果相吻合。由Design-Expert 8.06軟件分析得到最大響應(yīng)值(Y)時(shí)最優(yōu)培養(yǎng)基配方為:麩皮56.8 g/L、葡萄糖49 g/L、Se 22.4 mg/L、MgSO40.75 g/L、KH2PO41 g/L、VB11 mg/L、瓊脂15 g/L,此時(shí)富硒粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度預(yù)測(cè)值為8.19 mm/d。

2.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

為了檢測(cè)響應(yīng)面結(jié)果的準(zhǔn)確性,以改良PDA培養(yǎng)基為陰性對(duì)照,以等量硒添加改良PDA培養(yǎng)基為陽(yáng)性對(duì)照,配制上述最優(yōu)培養(yǎng)基配方進(jìn)行富硒粗毛纖孔菌菌絲培養(yǎng)實(shí)驗(yàn),每組八個(gè)重復(fù),測(cè)得粗毛纖孔菌及富硒粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度見(jiàn)圖6。響應(yīng)面優(yōu)化培養(yǎng)基實(shí)測(cè)值8.41 mm/d>預(yù)測(cè)值8.19 mm/d>改良PDA實(shí)測(cè)值6.79 mm/d>等量硒添加改良PDA實(shí)測(cè)值 4.28 mm/d,且優(yōu)化后的富硒培養(yǎng)基培養(yǎng)的粗毛纖孔菌菌絲的稠密度更高(圖6)。與等量硒添加改良PDA相比,以響應(yīng)面優(yōu)化培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng),粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度提高了0.965倍。此外,通過(guò)電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)對(duì)最優(yōu)培養(yǎng)基培養(yǎng)菌絲的硒富集量進(jìn)行檢測(cè),測(cè)得富硒粗毛纖孔菌菌絲硒富集量為31.584 μg/g。說(shuō)明采用響應(yīng)面法獲得的模型能較好地預(yù)測(cè)富硒粗毛纖孔菌菌絲的生長(zhǎng)情況,該富硒培養(yǎng)基配方可以減少外源硒對(duì)粗毛纖孔菌菌絲抑制作用的影響,使其能夠在富硒的同時(shí)正常甚至更好地生長(zhǎng),提高富硒菌絲的產(chǎn)量,具有一定的實(shí)用價(jià)值。

圖6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果Fig.6 The results of verification test

3 結(jié)論

首次針對(duì)粗毛纖孔菌對(duì)無(wú)機(jī)硒的耐受度進(jìn)行探索,發(fā)現(xiàn)該菌菌絲的生長(zhǎng)情況受外源硒影響較大,當(dāng)硒濃度達(dá)到或大于37.25 mg/L時(shí),該菌菌絲生長(zhǎng)受到顯著的抑制作用(P<0.05)。因此,本研究通過(guò)響應(yīng)面法對(duì)該菌富硒培養(yǎng)基成分進(jìn)行優(yōu)化,旨在保證該菌菌絲在正常生長(zhǎng)情況下合理富集、積累并轉(zhuǎn)化無(wú)機(jī)硒為有機(jī)硒,提高富硒粗毛纖孔菌菌絲的產(chǎn)量。

經(jīng)響應(yīng)面法優(yōu)化得到富硒粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)最優(yōu)培養(yǎng)基配方為:麩皮56.8 g/L、葡萄糖49 g/L、Se 22.4 mg/L、MgSO40.75 g/L、KH2PO41 g/L、VB11 mg/L、瓊脂15 g/L。其中葡萄糖添加量、麩皮添加量和硒添加量對(duì)富硒粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)均具有極顯著作用;且麩皮與葡萄糖、麩皮與硒添加、葡萄糖與硒添加之間的兩兩交互作用對(duì)富硒粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)均具有顯著作用(P<0.01)。在此條件下,富硒粗毛纖孔菌實(shí)際菌絲生長(zhǎng)速度達(dá)到8.41 mm/d,與預(yù)測(cè)值相符,且硒富集量達(dá)到31.584 μg/g。說(shuō)明采用響應(yīng)面法優(yōu)化獲得的富硒粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)培養(yǎng)基配方具有一定的實(shí)用價(jià)值。

該配方通過(guò)培養(yǎng)基內(nèi)因素間的交互作用減少了外源硒對(duì)粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)抑制作用的影響,確定了合理的硒添加比例,與等量硒添加改良PDA相比,優(yōu)化后粗毛纖孔菌菌絲生長(zhǎng)速度提高了約1倍(0.965倍);與同配方無(wú)硒添加培養(yǎng)基相比,菌絲硒含量增加為31.584 μg/g。國(guó)際營(yíng)養(yǎng)聯(lián)合會(huì)規(guī)定缺硒人群每人每天食用硒量不少于50 μg,每人每天食用本研究富硒粗毛纖孔菌制品1.58 g即可完全滿足此要求。本研究在硒抑制與菌絲生長(zhǎng)之間找到平衡點(diǎn),獲得了最優(yōu)配方,為富硒粗毛纖孔菌菌絲體的大量制備、富硒粗毛纖孔菌子實(shí)體的栽培及其它后續(xù)研究提供了理論依據(jù)。