蛋雞H5、H7亞型禽流感病毒母源抗體消長(zhǎng)規(guī)律及其免疫程序的研究

劉婷婷 呂宗德 李鳳玲 白夢(mèng)茹

（南京市畜牧獸醫(yī)站，江蘇南京 210012）

H5亞型高致病性禽流感和H7N9一直威脅著養(yǎng)禽業(yè)的健康發(fā)展，為了更好地應(yīng)對(duì)疫情防控形勢(shì)，有效預(yù)防疫病的發(fā)生，國(guó)內(nèi)相關(guān)的強(qiáng)制免疫政策也在不斷地做出調(diào)整。2017年秋季開(kāi)始，開(kāi)始使用重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗，在H5亞型禽流感強(qiáng)制免疫的基礎(chǔ)上增加了H7亞型的強(qiáng)制免疫，2019年春季，又將重組禽流感病毒（H5+H7）二價(jià)滅活疫苗（H5N1Re-8株+H7N9H7-Re1株）變更為重組禽流感病毒（H5+H7）三價(jià)滅活疫苗（H5N1Re-11株+Re-12株，H7N9H7-Re2株）（以下簡(jiǎn)稱禽流感H5+H7三價(jià)苗）。本研究主要通過(guò)對(duì)蛋雞H5N1Re-11、H5N1Re-12、H7-Re2三種母源抗體的檢測(cè)及接種疫苗后免疫抗體水平的監(jiān)測(cè)，為禽流感H5+H7三價(jià)苗免疫程序的制定提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與分組

海蘭蛋雞400羽分兩組，其中200羽為母源抗體組，另外200羽為免疫組。母源抗體組在28日齡前不注射疫苗，也不使用任何藥物和添加劑；免疫組分別在15日齡、40日齡、80日齡、120日齡（開(kāi)產(chǎn)前）、240日齡、360日齡采用禽流感H5+H7三價(jià)苗注射免疫，其中首免采用0.3ml頸部皮下注射，5周齡以后采用0.5ml胸部肌肉注射。

1.2 疫苗與檢測(cè)試劑

禽 流 感 病 毒H5亞 型（Re-11株）、H5亞 型（Re-12株）、H7亞型（H7-Re2株）血凝抑制試驗(yàn)抗原均購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所，批號(hào)均為2019004，有效期分別是 20210807、20210809、20210905。禽流感 H5+H7三價(jià)苗購(gòu)自乾元浩生物股份有限公司鄭州生物藥廠，批號(hào)為獸藥臨字160132319。

1.3 樣品采集

母源抗體組分別在1日齡、7日齡、14日齡、21日齡及28日齡隨機(jī)采集20份血樣，每份血量不少于2ml，1日齡、7日齡時(shí)采用心臟采血，采血后的雞只淘汰，14日齡開(kāi)始采用翅靜脈采血。

免疫組，根據(jù)免疫時(shí)間按一定的時(shí)間間隔進(jìn)行隨機(jī)采樣，每次20份，每份不少于2ml。

1.4 母源抗體監(jiān)測(cè)

分別對(duì)母源抗體組的5批樣品進(jìn)行禽流感病毒H5亞型（Re-11株）、H5亞型（Re-12株）、H7亞型（H7-Re2株）血凝抑制試驗(yàn)，該試驗(yàn)使用一次性96孔V型微量反應(yīng)板，具體操作方法按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《高致病性禽流感診斷技術(shù)》（GB/T18936-2003）進(jìn)行。檢測(cè)過(guò)程中分別設(shè)陽(yáng)性對(duì)照、空白對(duì)照，并對(duì)配置的4單位病毒進(jìn)行回歸試驗(yàn)。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)按照≥4log2為合格。

1.5 免疫抗體監(jiān)測(cè)

免疫組分別在28日齡、35日齡、40日齡、47日齡、80日齡、120日齡、240日齡、360日齡及500日齡時(shí)采樣，進(jìn)行禽流感病毒H5亞型（Re-11株）、H5亞型（Re-12株）、H7亞型（H7-Re2株）的免疫抗體檢測(cè)。檢測(cè)方法同1.4。

2 結(jié)果與分析

2.1 禽流感母源抗體的消長(zhǎng)

試驗(yàn)結(jié)果表明，母源抗體組的H5（Re-11株、Re-12株）和H7亞型三種母源抗體的整體消長(zhǎng)趨勢(shì)基本一致。抗體效價(jià)均在1日齡時(shí)最高，之后隨著日齡的增長(zhǎng)抗體效價(jià)逐漸下降。1-7日齡下降趨勢(shì)較緩，之后呈明顯下降趨勢(shì)，至14日齡，抗體效價(jià)平均值已降至4log2以下，28日齡母源抗體基本為零。此外，三種母源抗體的變異系數(shù)隨著日齡的增加逐漸增大。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表1，圖1。

表1 母源抗體組禽流感H5Re-11、H5Re-12和H7-Re2母源抗體消長(zhǎng)

表2 免疫組禽流感H5Re-11、H5Re-12和H7-Re2免疫抗體水平

圖1

2.2 禽流感H5+H7三價(jià)苗免疫后抗體效價(jià)的走勢(shì)

免疫組于14日齡首免后，H5（Re-11株、Re-12株）和H7亞型三種免疫抗體效價(jià)的整體增長(zhǎng)趨勢(shì)基本一致，隨著日齡的增加平均抗體效價(jià)逐漸提高。首免后14天，抗體效價(jià)提高并不顯著，21天時(shí)合格率才達(dá)標(biāo)，但平均抗體效價(jià)仍沒(méi)有達(dá)到很高水平。40日齡時(shí)二免，免疫1周后出現(xiàn)了抗體效價(jià)略微下降的趨勢(shì)，之后迅速上升并維持在一個(gè)較高水平。此外，隨著免疫抗體效價(jià)的提高，變異系數(shù)逐漸變小。試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，圖2。

圖2

3 討論

3.1 母源抗體組

本試驗(yàn)中，母源抗體的消長(zhǎng)規(guī)律表明，雛雞出殼后具有較高的抗體水平，足以保護(hù)雛雞抵抗禽流感病毒H5、H7亞型的侵襲。7日齡內(nèi)，母源抗體水平衰減速度緩慢，可能與體內(nèi)的卵黃囊可以繼續(xù)提供抗體有關(guān)[1]。7～14日齡，伴隨著卵黃囊的消失，體內(nèi)的母源抗體水平急劇下降[2]，至14日齡時(shí)，抗體效價(jià)已經(jīng)不能為雞群提供良好的保護(hù)力，在不免疫的狀態(tài)下，28日齡時(shí)，雞體內(nèi)的母源抗體基本消失。這為我們確定首免日齡提供了可靠的依據(jù)，海蘭蛋雞禽流感H5+H7三價(jià)苗的首免日齡不要太遲，最好控制在14日齡前后。

3.2 免疫組

雞群在14日齡首免，免疫14d后抗體效價(jià)有所提高，但是合格率達(dá)不到70%，免疫21天時(shí)才能夠提供較好的保護(hù)力。40日齡二免，二免后1周，抗體效價(jià)出現(xiàn)了一個(gè)短暫的下降，這主要是由于疫苗進(jìn)入雞體后會(huì)中和掉部分抗體[3]，在雞體抗體效價(jià)沒(méi)有達(dá)到較高水平時(shí)會(huì)呈現(xiàn)出一個(gè)略微的跌落。跌落之后，抗體效價(jià)呈現(xiàn)明顯上升趨勢(shì)，并一直維持在較高水平，而且變異系數(shù)也控制在很小的范圍內(nèi)。由此可見(jiàn)，該免疫程序的免疫效果良好，可以為雞群提供良好的保護(hù)力。唯一需要注意的是首免后免疫抗體水平增長(zhǎng)緩慢、曲折，14日齡-28日齡前后以及二免后1周都屬于免疫保護(hù)力薄弱期，建議在此期間加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，控制好舍內(nèi)溫、濕度，盡可能避免疫病發(fā)生的各種風(fēng)險(xiǎn)因素。