不同大腸黏膜組織Hp、CyclinD1、P16免疫組化表達(dá)分析

胡永波 汪雪琦 舒晴

【摘要】 目的 分析不同大腸黏膜組織幽門螺桿菌（Hp）、細(xì)胞周期素D1（Cyclin D1）、P16免疫組化結(jié)果， 并分析各組織中Hp感染與Cyclin D1、P16表達(dá)的關(guān)系。方法 選取78例大腸組織標(biāo)本， 其中大腸癌患者40例、大腸腺瘤患者20例、非腫瘤大腸黏膜患者18例， 應(yīng)用免疫組化技術(shù)檢測(cè)不同大腸黏膜組織Hp、 Cyclin D1、 P16的表達(dá)情況。觀察比較不同大腸黏膜組織Hp、Cyclin D1、P16陽性率， 并分析不同大腸黏膜組織中Hp感染與Cyclin D1、P16陽性表達(dá)相關(guān)性。結(jié)果 大腸癌患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為55.0%、82.5%、77.5%， 大腸腺瘤患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為20.0%、 80.0%、 10.0%， 非腫瘤大腸黏膜患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為11.1%、11.1%、0;大腸癌、大腸腺瘤與非腫瘤大腸黏膜患者Hp、Cyclin D1、P16陽性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。大腸癌及大腸腺瘤患者中， Hp感染與Cyclin D1、 P16陽性表達(dá)結(jié)果呈正相關(guān)（大腸癌：r=0.509、r=0.596， P<0.05;大腸腺瘤：r=0.289、r=0.667， P<0.05）。非腫瘤大腸黏膜患者中， Hp感染與cycinD1陽性表達(dá)結(jié)果呈正相關(guān)（r=0.395， P<0.05）， Hp感染與P16陽性表達(dá)無相關(guān)性（P>0.05）。結(jié)論 Hp是大腸上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的因素之一， 大腸癌組織中Hp對(duì)P16、Cyclin D1的表達(dá)結(jié)果影響具有相關(guān)性， 其中的可能機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

【關(guān)鍵詞】 大腸癌;大腸腺瘤;幽門螺桿菌;細(xì)胞周期素D1;P16

DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2020.20.087

幽門螺桿菌（helicobacterpylori， Hp）于1994年被國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)（IARC）列為人類胃癌的第I類致癌因子。隨著現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的不斷發(fā)展， 有很多學(xué)者研究認(rèn)為Hp感染與大腸癌、冠心病、類風(fēng)濕、肝膽疾病等多種疾病有相關(guān)性， 但尚未得到完全確證。大腸癌又稱結(jié)直腸癌（colorectal cancer， CRC）， 在我國(guó)居民常見的惡性腫瘤中排第五名[1]。Cyclin D1異常表達(dá)， 通過基因擴(kuò)增， 可導(dǎo)致多種腫瘤發(fā)生， 如乳腺癌、腸癌、食管癌。P16是抑癌基因的一種， 又稱多種腫瘤抑制基因， 它可以在細(xì)胞增殖周期某個(gè)環(huán)節(jié)上對(duì)細(xì)胞分裂和生長(zhǎng)產(chǎn)生適當(dāng)?shù)恼{(diào)控作用。本研究是通過免疫組化方式檢測(cè)不同大腸（結(jié)腸和直腸）黏膜（非腫瘤、上皮性腫瘤）組織中Hp感染情況及Hp感染與P16和Cyclin D1表達(dá)的關(guān)系?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1. 1 材料 收集2016年4月～2019年4月清遠(yuǎn)市中醫(yī)院脾胃科的78例大腸組織標(biāo)本， 其中大腸癌患者40例，?男22例， 女18例， 平均年齡64.5歲;大腸腺瘤患者20例， 男11例， 女9例， 平均年齡54.7歲;非腫瘤大腸黏膜患者18例， 男8例， 女10例， 平均年齡50.9歲。由具有高級(jí)職稱的病理醫(yī)師來判讀本次研究的所有病例標(biāo)本的病理診斷及免疫組化結(jié)果。

1. 2 研究方法 本次研究采用pv-6000兩步法免疫組化方法， 采用DAB顯色試劑盒， 第一抗體Hp、P16、Cyclin D1及相關(guān)試劑購(gòu)均購(gòu)北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。按照試劑盒使用說明書來進(jìn)行具體操作， 陰性對(duì)照以磷酸緩沖鹽溶液（PBS）替代一抗， 陽性對(duì)照采用本院慢性胃炎黏膜組織Hp陽性切片。

1. 3 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn) 觀察比較不同大腸黏膜組織Hp、Cyclin D1、P16陽性率， 并分析不同大腸黏膜組織中Hp感染與Cyclin D1、P16陽性表達(dá)相關(guān)性。判定標(biāo)準(zhǔn)：Hp陽性表達(dá)結(jié)果可定位于腸黏膜組織周邊的黏液及表面上皮附近（陽性對(duì)照見圖1）， 呈棕褐色顆粒狀或短棒狀結(jié)構(gòu)， 彌散、片狀分布（見圖2， 圖3）。p16染色陽性呈棕黃色， 異常表達(dá)時(shí)位于胞漿， 正常細(xì)胞定位于細(xì)胞核。Cyclin D1陽性表達(dá)定位于細(xì)胞核。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料以率（%）表示， 采用χ2檢驗(yàn);采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析檢測(cè)標(biāo)志物免疫組化表達(dá)間的相關(guān)性。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2. 1 不同大腸黏膜組織Hp、Cyclin D1、P16陽性率比較 大腸癌患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為55.0%、82.5%、77.5%， 大腸腺瘤患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為20.0%、80.0%、10.0%， 非腫瘤大腸黏膜患者的Hp、Cyclin D1、P16陽性率分別為11.1%、11.1%、0;大腸癌、大腸腺瘤與非腫瘤大腸黏膜患者Hp、Cyclin D1、P16陽性率比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見表1， 表2。

2. 2 不同大腸黏膜組織中Hp感染與Cyclin D1、P16陽性表達(dá)相關(guān)性分析 大腸癌及大腸腺瘤患者中， Hp感染與Cyclin D1、 P16陽性表達(dá)結(jié)果呈正相關(guān)（大腸癌：r=0.509、r=0.596， P<0.05;大腸腺瘤：r=0.289、r=0.667， P<0.05）。非腫瘤大腸黏膜患者中， Hp感染與Cyclin D1陽性表達(dá)結(jié)果呈正相關(guān)（r=0.395， P<0.05）， Hp感染與P16陽性表達(dá)無相關(guān)性（P>0.05）。

3 討論

Nam等[3]研究發(fā)現(xiàn)， 大腸息肉患病率在Hp感染組占63.4%， Hp是大腸腫瘤發(fā)生的危險(xiǎn)因素， 它可能通過釋放一些抗原物質(zhì)， 激活全身免疫反應(yīng)進(jìn)而導(dǎo)致腸黏膜損害和息肉形成。賴廣順等[4]的研究結(jié)果顯示， Hp感染可能是結(jié)直腸腫瘤發(fā)病的一個(gè)危險(xiǎn)因素。梁云佳等[5]通過大數(shù)據(jù)研究顯示， Hp測(cè)試陽性組與陰性組相比， 大腸腺瘤和大腸癌發(fā)病率較高， 大腸病變位置在遠(yuǎn)端結(jié)腸有顯著差異（P<0.05）。本研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)， 大腸癌Hp陽性病例中， 有75%的患者發(fā)生在直腸和乙狀結(jié)腸。

Cyclin D1是細(xì)胞周期素家族的重要成員， 是細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4/6（CDK4/6）的調(diào)節(jié)物， 促進(jìn)Rb磷酸化。Cyclin D1的過量表達(dá)可致使細(xì)胞無法識(shí)別某些生長(zhǎng)因子的作用， 進(jìn)而導(dǎo)致各種腫瘤的發(fā)生， 如乳腺癌、腸癌、食管癌。Arber等[6]及Palmqvist等[7]的研究結(jié)果表明， Cyclin D1的過表達(dá)在大腸癌早期形成中可能起到一定作用。本次研究結(jié)果顯示， Cyclin D1在大腸腺瘤的陽性表達(dá)率明顯高于非腫瘤大腸黏膜， 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。P16與細(xì)胞周期素D（Cyclin D）競(jìng)爭(zhēng)與結(jié)合， 在細(xì)胞分裂周期中從G1期進(jìn)行到S期這個(gè)過程受到干擾， 從而細(xì)胞增殖得到抑制。P16基因的缺失與大腸癌的發(fā)生和惡性程度呈一定的相關(guān)性[8]。

國(guó)內(nèi)的研究結(jié)果證實(shí)， 在胃黏膜中， Hp感染能使組織細(xì)胞中抑癌基因（P16， P53）和癌基因（ras）的突變率增高。本研究結(jié)果顯示， 在大腸腫瘤組， Hp感染和Cyclin D1、P16的陽性表達(dá)均呈正相關(guān)（P<0.05）， 說明在腸黏膜組織中， Hp感染亦能促使組織細(xì)胞中抑癌基因和癌基因突變。其中的致病機(jī)制可能是Hp感染導(dǎo)致P16基因CpG島的甲基化[9]， 且具有鞭毛素A基因flaA（+）的Hp可能更容易導(dǎo)致用P16基因甲基化[10]。

綜上所述， Hp是大腸上皮性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展的因素之一， 大腸癌組織中Hp對(duì)P16、Cyclin D1的表達(dá)結(jié)果影響具有相關(guān)性， 其中的可能機(jī)制有待進(jìn)一步探討。

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[4] 賴廣順. 大腸癌的臨床特點(diǎn)及與幽門螺桿菌關(guān)系的研究. 2012.

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[7] Palmqvist R， Stenling R， Oberg A， et al. Expression of cycinD1 and retinoblastoma protein in colotectal cancer. Eur J Cancer， 1998， 34（10）：1575-1581.

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[收稿日期：2020-03-09]