緊密連接蛋白Claudin6 表達與乳腺癌組織臨床指標的關(guān)系

李雪松，王立平通訊作者，李鴻梅，劉春忻，冷曉寧，譚佳音

（齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院 病理學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 161000）

0 引言

乳腺癌是來自乳腺終末導(dǎo)管小葉單元上皮的惡性腫瘤，腫瘤在發(fā)生過程中乳腺上皮細胞可獲得間質(zhì)特性，失去典型的上皮細胞黏附性以及極性，從而獲得一定遷移能力，誘使腫瘤細胞離開原發(fā)部位通過血管和淋巴管向遠處轉(zhuǎn)移[1]。乳腺癌的發(fā)病率居我國女性癌癥發(fā)病率第一位也是影響女性健康最常見的惡性腫瘤之一[2]。有研究顯示，腫瘤組織緊密連接結(jié)構(gòu)和功能的異常，使其蛋白復(fù)合體或單個組分可能成為腫瘤檢測，治療和預(yù)后的新靶標[3]。又有研究表明，Claudins蛋白可能在多種腫瘤的發(fā)生，浸潤及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[4]。Claudin6作為Claudins蛋白家族的27個成員之一[5]。Claudins家族不同成員在不同腫瘤中表達各異，所代表的生物學(xué)意義也不同。本實驗通過免疫組化的方法分析Claudins在乳腺癌組織中的表達與乳腺癌組織病理分級、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及年齡等臨床指標的關(guān)系，為后續(xù)研究Claudin6在乳腺癌發(fā)生發(fā)展及轉(zhuǎn)移過程中可能起到的作用奠定基礎(chǔ)。

1 資料與方法

1.1 一般資料。收集2018年8月至2019年7月齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院病理診斷中心標本，其中乳腺癌組織78例和對應(yīng)的癌旁正常組織44例?；颊咝g(shù)前均未經(jīng)任何抗癌治療。乳腺癌組織標本均為女性，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32例，無轉(zhuǎn)移者46例。按臨床分期Ⅰ期和Ⅱ期48例、Ⅲ期和Ⅳ期30例。按三級分級法進行病理分級，Ⅰ級24例、Ⅱ級42例、Ⅲ級12例?；颊吣挲g22-78歲，平均47.8歲。所有標本均與切除后30 min內(nèi)放入10%中性緩沖福爾馬林常溫固定后脫水包埋，制成蠟塊，切片制成4 μm。

1.2 主要儀器和試劑。光學(xué)顯微鏡，電熱恒溫培養(yǎng)箱，Claudin6山羊抗人多克隆抗體，SP免疫組化試劑盒。

1.3 免疫組織化學(xué)染色。采用免疫組織化學(xué)SP法對78例乳腺癌組織的Claudin6進行了檢測，檢測Claudin6在乳腺癌組織中的表達。具體方法：蠟塊，切片制成4μm，脫蠟水化；抗原修復(fù)；滴加3%H2O2；滴加即用型正常山羊血清，滴加0.01MPBS稀釋的一抗（1：100PBS稀釋羊抗人Claudin6多克隆抗體）；滴加生物素標記的二抗；滴加鏈霉素親生物素-過氧化物酶溶液，；滴加DAB顯色劑，顯微鏡下觀察顯色；自來水沖洗，蘇木精復(fù)染，酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。以PBS代替一抗做陰性對照。

1.4 免疫組化結(jié)果判定。Claudin6陽性表達判定標準，細胞膜與細胞漿同時出現(xiàn)棕黃色著色為陽性，細胞無著色或單純細胞漿著色、細胞膜著色為陰性。本實驗采用著色細胞計數(shù)法進行判定，選擇染色良好區(qū)域，任意計數(shù)5個高倍視野下的陽性細胞數(shù)，然后取平均值，著色細胞數(shù)＜5%為陰性，著色細胞數(shù)≥5%為陽性。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理。所有數(shù)據(jù)均使用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計處理，P＜0.05兩者差異有顯著性，具有統(tǒng)計意義。

2 結(jié)果

2.1 Claudin6在乳腺癌組織中的表達與病理分級的關(guān)系。Claudin6在乳腺癌病理分級Ⅰ級中陽性表達率為79.17%，在乳腺癌病理分級Ⅱ級中陽性表達率為64.29%在乳腺癌病理分級Ⅲ級中陽性表達率為66.67%。Claudin6表達與病理分級無關(guān)（P＞0.05），結(jié)果見表1。

2.2 Claudin6在乳腺癌組織中的表達與臨床分期的關(guān)系。Claudin6在乳腺癌臨床Ⅰ-Ⅱ期中陽性表達率為68.75%），Ⅲ-Ⅳ期陽性表達率為70.00%，兩者差異無顯著性（P＞0.05），結(jié)果見表1。

2.3 Claudin6在乳腺癌組織中的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。78例乳腺癌患者中，病理檢查有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者32人，Claudin6表達陽性者22人，陽性表達率為68.75%，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者46人，Claudin6表達陽性者34人，陽性表達率為73.91%。經(jīng)統(tǒng)計學(xué)分析，Claudin6表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)（P＞0.05），結(jié)果見表1。

2.4 Claudin6在乳腺癌組織中的表達與年齡的關(guān)系。78例乳腺癌患者按年齡分22-50歲組和51-78歲組，22-50歲組陽性表達率為57.78%，51-78歲組Claudin6表達率為81.82%，兩者差異無顯著性（P＞0.05），結(jié)果見表1。

表1 Claudin6在乳腺癌組織中的表達與臨床指數(shù)的關(guān)系（n，%）

3 討論

本研究采用免疫組化SP法，對78例乳腺癌組織進行Claudin6表達的檢測，通過分析其表達與臨床分期、病理分級及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及年齡等臨床指標的關(guān)系。結(jié)果表明，Claudin6的表達與乳腺癌的病理分級、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及年齡無關(guān)。但在本實驗中，乳腺癌組織claudin6表達低于癌旁正常組織，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織Claudin6的表達低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的乳腺癌組織，雖無統(tǒng)計意義，但還能在一定程度上說明在Claudin6表達下調(diào)或許在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中起一定的作用。因此可以認為，乳腺癌上皮組織中Claudin6表達下調(diào)可引起緊密連接結(jié)構(gòu)和功能的異常，從而導(dǎo)致細胞黏附性降低、運動性和侵襲性增加，并通過激活基質(zhì)金屬蛋白酶等途徑，促進了乳腺癌轉(zhuǎn)移的發(fā)生。也為后續(xù)探討Claudin6在乳腺癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移中的作用以及臨床上的應(yīng)用提供一定的理論依據(jù)。