HPLC-RID法測(cè)定銀柴顆粒中蔗糖的含量研究

謝瑩瑩 龍海燕▲ 粟 貴 石 蓉

1.湖南省藥品檢驗(yàn)研究院 （湖南藥用輔料檢驗(yàn)檢測(cè)中心），湖南長沙 410001；2.湖南省藥品質(zhì)量評(píng)價(jià)工程技術(shù)研究中心，湖南長沙 410001

銀柴顆粒是我國獨(dú)有品種，本品主要由忍冬藤、蘆根、薄荷等5味藥材組成，具有清熱，解表，止咳的功效，臨床上用于治療風(fēng)熱感冒，發(fā)熱咳嗽[1-2]。蔗糖作為藥用輔料在藥劑中主要作為甜味劑或矯味劑，廣泛用于口服制劑中，是糖漿劑、顆粒劑的主要成分，片劑的填充劑、黏合劑，糖衣片的包衣材料等[3-4]。銀柴顆粒制法中顯示采用蔗糖作為甜味劑或矯味劑，而現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)無蔗糖檢查項(xiàng)，那么蔗糖的實(shí)際添加情況無法得知，不排除個(gè)別企業(yè)為降低成本低量投料的可能。調(diào)研時(shí)，有企業(yè)指出國內(nèi)有廠家在蔗糖中可能人為添加葡萄糖等其他糖或直接用比蔗糖便宜的如葡萄糖、麥芽糖等單糖或雙糖代替蔗糖以降低成本。目前，采用高效液相色譜法分析檢測(cè)不同糖在食品、乳制品、中成藥的文獻(xiàn)很多[5-11]，我們參考相關(guān)文獻(xiàn)[12-15]采用HPLC法結(jié)合示差折光檢測(cè)器對(duì)蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖含量進(jìn)行檢測(cè)，為合理有效控制銀柴顆粒質(zhì)量提供技術(shù)手段。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Waters公司e 2695高效液相色譜儀（2414 RI檢測(cè)器）；瑞士Mettler-Toledo公司MS205DU電子天平。

1.2 試藥

果糖 對(duì) 照品（批號(hào)：100231-201606，純 度：99.7%）；D-無水葡萄糖對(duì)照品（批號(hào)：10833-201506，純 度：99.9%）；麥芽 糖 對(duì) 照 品（批號(hào)：100287-201303，純度：94.3%）；蔗糖對(duì)照品（批號(hào)：111507-201303，純度：99.8%）；以 上對(duì)照品均來自中檢院。乙腈（批號(hào)：AH015-4HC）為色譜級(jí)，購自美國默克公司。銀柴顆粒12批。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色 譜 柱：Alltechchrom Prevail carbohydrate ES 5u色譜柱（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（75∶25）；流速：1.0mg/mL；色譜柱溫度：35℃；檢測(cè)器：示差檢測(cè)器；檢測(cè)器溫度：40℃；進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液的制備

供試品溶液制備：取本品0.5g，精密稱定，置50mL量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

對(duì)照品系列溶液制備：分別精密稱取果糖、葡萄糖、麥芽糖和蔗糖對(duì)照品50.81、50.84、26.53、78.28mg，置同一10mL量瓶中，用水溶解并稀釋至刻度，分別精密量取適量，用水定量稀釋，配成對(duì)照品系列溶液（其中果糖和葡萄糖濃度約為0.5、1、2、3、4、5mg/mL；蔗糖濃度約為 0.75、1.5、3、4.5、6、7.5mg/mL；麥芽糖濃度約為 0.25、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mg/mL。

2.3 專屬性試驗(yàn)

取空白溶劑（水）、供試品溶液、對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀記錄色譜圖，結(jié)果：空白溶液對(duì)樣品測(cè)定無干擾，果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖分離度符合規(guī)定。典型圖譜見圖1 。

圖1 HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液中的線性系列溶液，按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以濃度為X軸、峰面積為Y軸進(jìn)行線性回歸，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.5 檢出限和定量限

取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品貯備液適量，逐級(jí)稀釋，并進(jìn)行測(cè)定，以信噪比S/N=10和S/N=3時(shí)各對(duì)照品的量為定量限和檢測(cè)限，見表1。

表1 線性關(guān)系、檢出限、定量限、方法檢出限結(jié)果

表2 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

表3 樣品測(cè)定結(jié)果（%）

2.6 精密度試驗(yàn)

取“2.2”項(xiàng)下線性同一系列溶液，按“2.1 ”項(xiàng)下的色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積。結(jié)果蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖峰面積RSD分別為 1.50%、1.17%、1.63%、2.29%，說明進(jìn)樣精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

按“2.2”項(xiàng)下供試品溶液，取樣品（批號(hào)：170401）0.5g，精密稱定，平行制備6份供試品溶液，并按“2.1 ”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果蔗糖、葡萄糖有檢出，平均含量分別為49.37%、43.85%，RSD分別為1.45%、1.29%，說明本方法重復(fù)性好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取“2.7”項(xiàng)下的供試品溶液1，在室溫25℃放置 0、2、4、6、8、12、24h 各進(jìn)樣 20μL，結(jié)果蔗糖、葡萄糖測(cè)定值的RSD分別為0.50%、2.03%，說明供試品溶液在24h內(nèi)穩(wěn)定性較好。

2.9 回收率試驗(yàn)

（1）分別稱取6份樣品（批號(hào)：170401，其中蔗糖、葡萄糖含量分別為49.37%、43.85%）0.25g，置50mL量瓶中，分別精密加入蔗糖、葡萄糖對(duì)照品適量，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為回收率溶液①；（2）分別稱取6份樣品（批號(hào)：170401，果糖、麥芽糖含量均未檢出）0.5g，置50mL量瓶中，分別精密加入果糖、麥芽糖對(duì)照品適量，用水溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為回收率溶液②；取回收率溶液按“2.1”項(xiàng)下方法測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖的平均回收率分別為100.05%、99.01%、96.49%、96.62%，RSD分別為1.00%、1.36%、1.93%、4.49%。

2.10 樣品測(cè)定結(jié)果

取銀柴顆粒12批樣品各適量，分別按“2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算樣品中蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖含量。見表3。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示12批樣品均未檢出麥芽糖，說明收集到的樣品均未非法添加麥芽糖。B、C、E、F企業(yè)6批樣品中均檢出果糖，但果糖量僅為同批次樣品中的蔗糖含量的1%，推測(cè)果糖可能為蔗糖輔料中的雜質(zhì)成分，說明未非法添加果糖。A企業(yè)5批樣品中均檢出葡萄糖，且檢出量較大43.85%～50.75%，與同批次樣品中的蔗糖含量相比約為1∶1；根據(jù)購買A企業(yè)樣品時(shí)收集到的說明書可知輔料為蔗糖，說明該企業(yè)可能人為添加葡萄糖進(jìn)行投料，而企業(yè)并未對(duì)其質(zhì)量進(jìn)行評(píng)估，存在一定的安全隱患。

本研究建立了一種有效檢測(cè)銀柴顆粒中蔗糖、果糖、葡萄糖、麥芽糖的高效液相色譜法，該方法簡便、準(zhǔn)確，可有效分離各糖類成分，可真實(shí)反映銀柴顆粒中蔗糖的實(shí)際添加情況，以防人為添加其他糖類物質(zhì)，可為銀柴顆粒在生產(chǎn)過程中的質(zhì)量控制提供參考性資料依據(jù)。