miRNA-145過表達(dá)增強(qiáng)卵巢癌順鉑化療敏感性的機(jī)制分析

丁照黎，谷見法，張飛翔

鄭州大學(xué)附屬鄭州中心醫(yī)院腫瘤科，鄭州 450003

卵巢癌是女性常見的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤，發(fā)病率僅次于子宮頸癌及子宮體癌，其中有超過90%的患者屬于卵巢上皮癌，而卵巢上皮癌是婦科生殖系統(tǒng)惡性腫瘤中病死率最高的疾病[1]。順鉑是卵巢癌常用化療藥物，但是抗腫瘤效果并不理想，而影響卵巢癌患者順鉑化療效果的危險(xiǎn)因素有患者依從性、用藥劑量和頻率以及惡性腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性等。卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性是其重要的自我保護(hù)機(jī)制，但是對(duì)患者的近期療效及遠(yuǎn)期生存均可帶來(lái)嚴(yán)重的不良影響，需要積極探討耐藥機(jī)制的產(chǎn)生原因及增強(qiáng)敏感性的方案才能增強(qiáng)卵巢癌順鉑化療的效果[2]。miRNA是近年來(lái)惡性腫瘤領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)，越來(lái)越多的研究證實(shí)其與抑癌/促癌存在緊密的關(guān)系[3-5]。miRNA-145最初是在結(jié)腸癌中被發(fā)現(xiàn)，并且其表達(dá)水平明顯低于癌旁正常組織，推測(cè)其與惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡有關(guān)[6]。另有研究顯示，miRNA-145的表達(dá)與肝癌患者化療效果存在緊密關(guān)聯(lián)，推測(cè)其表達(dá)能夠調(diào)控肝癌化療的敏感性[7]。多藥耐藥基因1（multi-drug resistance gene 1，MDR1）為常見的多藥耐藥基因，在人卵巢癌順鉑耐藥中發(fā)揮重要的作用，有研究認(rèn)為MDR1能夠調(diào)節(jié)P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）表達(dá)，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥性[8]。P-gp蛋白位于人類7號(hào)染色體長(zhǎng)臂上，相對(duì)分子量高達(dá)170 000，由2個(gè)分子結(jié)構(gòu)基本相同的亞基組成，各包含1個(gè)ATP結(jié)合位點(diǎn)和6個(gè)跨膜區(qū)，在卵巢癌順鉑化療中也有參與且發(fā)揮重要作用[9]。但是miRNA-145在卵巢癌中的表達(dá)、其與順鉑化療敏感性的關(guān)系及對(duì)MDR1、P-gp蛋白的表達(dá)是否有調(diào)控作用仍需要進(jìn)一步探討。故此，本研究特選取人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株A2780/DDP進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 材料

人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株A2780/DDP購(gòu)自中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院腫瘤醫(yī)院細(xì)胞中心。

1.2 主要試劑及設(shè)備

胎牛血清、RPMI1640培養(yǎng)基均購(gòu)自江蘇恩莫阿賽生物技術(shù)有限公司；磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司；四唑鹽（methyl thiazolyl tetrazolim，MMT）溶液、二甲亞砜溶液均購(gòu)自齊一生物科技（上海）有限公司；4’，6-二脒基-2-苯基吲哚（4’，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）購(gòu)自上海睿鉑賽生物科技有限公司；RNA及蛋白提取試劑盒均購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司；Lipofectamine 2000脂質(zhì)體、無(wú)關(guān)干擾序列、miRNA-145-5p mimics均購(gòu)自寶生物（大連）科技有限公司；人抗鼠P-gp單克隆抗體、鼠抗兔P-gp多克隆抗體均購(gòu)自亞諾法生技股份有限公司。3111型二氧化碳（CO2）培養(yǎng)箱購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；DMIL型倒置熒光顯微鏡購(gòu)自德國(guó)Leica公司；FV1200型激光共聚焦顯微鏡購(gòu)自日本Olympus公司；5810R型臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)Eppendorf公司；6孔細(xì)胞培養(yǎng)板購(gòu)自美國(guó)Fisher Scientific公司；1500型酶標(biāo)儀購(gòu)自美國(guó)Thermo公司；CFX-96型聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增儀購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司；凝膠成像分析系統(tǒng)購(gòu)自美國(guó)Bio-Rad公司。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 細(xì)胞的傳代培養(yǎng)、分組及干預(yù)方法 人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株A2780/DDP用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基于37℃、5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，直至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)，以1.5×106/孔分裝至6孔板，分為Blank組、Mock組、NC組和轉(zhuǎn)染組4組，每組均設(shè)置5個(gè)復(fù)孔，均給予75 μmol/L（半數(shù)抑制濃度）的順鉑。采用Lipofectamine 2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法進(jìn)行轉(zhuǎn)染，嚴(yán)格按照說(shuō)明書步驟操作，Mock組加入轉(zhuǎn)染試劑即Lipofectamine 2000，NC組加入無(wú)關(guān)干擾序列，轉(zhuǎn)染組逐滴加入miRNA-145-5p mimics質(zhì)粒、脂質(zhì)體混合液，Blank組加入等量生理鹽水，分別在RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)24 h后更換細(xì)胞培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)24 h。

1.3.2 轉(zhuǎn)染情況觀察 分別于培養(yǎng)24、48 h后采用倒置熒光顯微鏡觀察各組細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況。

1.3.3 miRNA-145、MDR1mRNA表達(dá)水平檢測(cè)于培養(yǎng)48 h后對(duì)各組細(xì)胞采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)（real time-polymerase chain reaction，RT-PCR）檢測(cè)，首先用PBS液沖洗，分別加入200 μl PBS+500 μl Buffer RLT，混合均勻后加入 5 μl β-巰基乙醇。加入 600 μl濃度為 70%的乙醇，采集 1000 μl混合液離心分離（12 000 r/min，15 min），取所得樣品加入Buffer RW1，再次相同方法離心，加入500 μl RPE液再次相同方法離心，轉(zhuǎn)移濾柱后離心（13 000 r/min，2 min），轉(zhuǎn)移濾柱，加入Rnase-free水，靜置后離心（12 000 r/min，15 min）。采用RNA提取試劑盒處理并進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，待合成cDNA后，將β-actin作為參照實(shí)施擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。miRNA-145引物，上游：5'-TACTGATATCGTAGGACGCTACGTGCT-3'，下游：5'-GTGTACCTGATGTATTACGACTGGCCA-3'；MDR1引物，上游：5'-TGTAATCTTGCGAACGCGTCAAGTCTG-3'，下游：5'-TGTACGC-TATATGTTGGACTAGCCAGC-3'；β-actin引物，上游：5'-GAGTACTCTCTAAGGCGTCGTATAGCT-3'，下游：5'-TACGTATAGCTCGGGTTAACTCTACGG-3'。利用PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，50℃預(yù)變性 1 min，95 ℃變性30 s，56 ℃反應(yīng)50 s，72 ℃反應(yīng)30 s，合成互補(bǔ)鏈，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)。利用PCR儀內(nèi)置功能獲取實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取均值。

1.3.4 細(xì)胞增殖活性檢測(cè) 采用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)24、48 h后的增殖活性，每孔分別加入20 μl MTT溶液，培養(yǎng)4 h后將培養(yǎng)液撇去，加入150 μl二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）溶液，輕輕吹打直至溶液澄清，測(cè)定490 nm處的光密度值（optical density，OD），即為增殖活性。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取均值。

1.3.5 細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化及凋亡率檢測(cè) 分別于細(xì)胞培養(yǎng)24、48 h后采用DAPI檢測(cè)細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化并計(jì)算凋亡率，在細(xì)胞達(dá)到80%融合時(shí)繼續(xù)培養(yǎng)，放去培養(yǎng)液，并用 PBS 洗滌，加入 1 μg/ml的DAPI，37℃培養(yǎng)于CO2培養(yǎng)箱中，避光孵育后再次用PBS沖洗，注意遮光操作，利用激光共聚焦顯微鏡觀察細(xì)胞核的形態(tài)學(xué)變化，并計(jì)算細(xì)胞凋亡率，細(xì)胞凋亡率=凋亡細(xì)胞數(shù)/細(xì)胞總數(shù)×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取均值。

1.3.6 P-gp 蛋白表達(dá)檢測(cè) 采用蛋白質(zhì)免疫印跡法（Western blot，WB）檢測(cè)，以試劑盒提取總蛋白并進(jìn)行定量，上樣，每孔上樣量為20 μl，進(jìn)行電泳分離，然后轉(zhuǎn)膜1.5 h，用脫脂奶粉搖床，4℃封閉24 h，加入一抗，27℃搖床孵育，2 h后洗滌，并加入二抗，27℃孵育1 h，暗室中顯色。以P-gp蛋白灰度值與β-actin灰度值的比值記為P-gp蛋白的相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，取均值。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 24.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料以例數(shù)及率（%）表示；計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，多組比較采用方差分析，組間兩兩比較采用SNK-q檢驗(yàn)，兩組比較采用配對(duì)t檢驗(yàn)；以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miRNA-145轉(zhuǎn)染情況的比較

培養(yǎng)24、48 h時(shí)NC組、Blank組、Mock組均無(wú)轉(zhuǎn)染陽(yáng)性細(xì)胞，而轉(zhuǎn)染組陽(yáng)性細(xì)胞轉(zhuǎn)染率均較高（圖1），分別為（28.12±1.86）%、（85.41±2.01）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=46.778，P=0.000）。

2.2 培養(yǎng)48h時(shí)miRNA-145、MDR1mRNA表達(dá)水平的比較

各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h時(shí)miRNA-145、MDR1mRNA表達(dá)水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；其中NC組、Blank組、Mock組細(xì)胞miRNA-145表達(dá)水平均低于轉(zhuǎn)染組，而MDR1mRNA表達(dá)水平均高于轉(zhuǎn)染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

圖1 轉(zhuǎn)染組轉(zhuǎn)染24、48h的熒光結(jié)果（×100）

表1 各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h時(shí)miRNA-145、MDR1 mRNA表達(dá)水平的比較（±s）

表1 各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h時(shí)miRNA-145、MDR1 mRNA表達(dá)水平的比較（±s）

注：*與轉(zhuǎn)染組比較，P＜0.05

m i R N A-1 4 5表達(dá)0.7 8±0.1 1 0.5 0±0.1 1*0.5 2±0.1 0*0.5 1±0.1 2*7.5 2 7 0.0 0 2 0.4 2±0.1 1 0.5 6±0.1 2*0.5 8±0.1 3*0.5 7±0.1 2*7.4 0 1 0.0 0 4轉(zhuǎn)染組N C組B l a n k組M o c k組F值P值M D R 1 m R N A表達(dá)組別

2.3 細(xì)胞增殖活性的比較

各組細(xì)胞培養(yǎng)24、48 h時(shí)OD值比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h時(shí)OD值均高于培養(yǎng)24 h時(shí)，且同一時(shí)刻轉(zhuǎn)染組OD值均低于NC組、Blank組、Mock組細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而同一時(shí)刻N(yùn)C組、Blank組、Mock組OD值比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

表2 培養(yǎng)24、48 h時(shí)各組細(xì)胞OD值的比較（±s）

表2 培養(yǎng)24、48 h時(shí)各組細(xì)胞OD值的比較（±s）

注：a與同時(shí)間轉(zhuǎn)染組比較，P＜0.05；b與本組培養(yǎng)24 h比較，P＜0.05

培養(yǎng)4 8 h 0.7 0 1±0.0 8 1 b 0.8 2 5±0.0 6 8 a b 0.8 2 3±0.0 6 9 a b 0.8 2 1±0.0 6 5 a b 4.1 0 1 0.0 2 5 0.4 0 2±0.0 9 7 0.6 1 0±0.0 7 0 a 0.5 9 8±0.0 7 2 a 0.6 1 1±0.0 6 9 a 8.6 3 6 0.0 0 1轉(zhuǎn)染組N C組B l a n k組M o c k組F值P值培養(yǎng)2 4 h組別

2.4 細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化、細(xì)胞凋亡率的比較

各組細(xì)胞均有細(xì)胞核濃縮、變小等形態(tài)學(xué)表現(xiàn)，且染色質(zhì)無(wú)規(guī)律分布、邊界不清或染色質(zhì)集中于核膜且呈新月狀，細(xì)胞膜不完整，培養(yǎng)48 h時(shí)細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化均比培養(yǎng)24 h時(shí)更為嚴(yán)重，同一時(shí)刻細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化比較，NC組、Blank組、Mock組細(xì)胞形態(tài)學(xué)相近，轉(zhuǎn)染組細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化均較上述3組嚴(yán)重改變（圖2）。培養(yǎng)48 h時(shí)各組細(xì)胞凋亡率均明顯高于培養(yǎng)24 h時(shí)，且各時(shí)間NC組、Blank組、Mock組細(xì)胞凋亡率均低于轉(zhuǎn)染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（表3）。

2.5 培養(yǎng)48h時(shí)P-gp 蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較

圖2 培養(yǎng)24、48h 各組細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化（DAPI染色，×200）

表3 培養(yǎng)24、48 h時(shí)各組細(xì)胞凋亡率的比較（%，±s）

表3 培養(yǎng)24、48 h時(shí)各組細(xì)胞凋亡率的比較（%，±s）

注：a與同時(shí)間轉(zhuǎn)染組比較，P＜0.05；b與同時(shí)間NC組比較，P＜0.05；c與同時(shí)間Blank組比較，P＜0.05；d與本組培養(yǎng)24 h比較，P＜0.05

組別轉(zhuǎn)染組N C組B l a n k組M o c k組F值P值2 1.7 7±2.5 8 1 3.2 2±2.2 3 a 1 3.2 6±2.1 9 a 1 4.3 0±2.2 4 a b c 9.4 9 4 0.0 0 5 4 6.9 9±2.9 6 d 3 6.7 1±2.6 5 a d 3 6.7 2±2.7 2 a d 3 7.4 9±2.6 8 a b c d 9.9 6 6 0.0 0 4培養(yǎng)2 4 h 培養(yǎng)4 8 h

各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h后P-gp蛋白相對(duì)表達(dá)量比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；且NC組、Blank組、Mock組細(xì)胞P-gp蛋白相對(duì)表達(dá)量均高于轉(zhuǎn)染組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表4、圖3）

表4 各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h時(shí)P-gp蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

表4 各組細(xì)胞培養(yǎng)48 h時(shí)P-gp蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較（±s）

注：*與轉(zhuǎn)染組比較，P＜0.05

組別轉(zhuǎn)染組NC組Blank組Mock組F值P值P-gp蛋白相對(duì)表達(dá)量20.44±4.16 86.42±5.03*85.90±5.09*86.23±5.13*227.897 0.000

3 討論

圖3 各組細(xì)胞培養(yǎng)48h后P-gp 蛋白表達(dá)情況

目前人們對(duì)卵巢癌的發(fā)生機(jī)制認(rèn)識(shí)尚淺，大致可以將其分為外部因素和內(nèi)部因素，其中前者主要包括物化致癌因子接觸，后者主要包括遺傳、基因突變、精神因素以及免疫功能異常等，需進(jìn)行深入研究。卵巢癌化療耐藥性一直是國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)研究人員普遍關(guān)注的重點(diǎn)。既往研究表明，卵巢癌化療耐藥是惡性腫瘤細(xì)胞的自我保護(hù)機(jī)制，能夠減輕細(xì)胞受損甚至是避免細(xì)胞損傷，使得惡性腫瘤細(xì)胞異常增殖，并且難以有效控制[10-11]。因此如何采取有效手段以增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞對(duì)化療的敏感性仍是目前亟待解決的問題。目前臨床常用的增敏劑有甘氨雙唑鈉、奧拉帕尼等，雖然有確切的近期療效，但是遠(yuǎn)期效果仍不甚理想，究其原因主要為對(duì)卵巢癌化療耐藥的機(jī)制認(rèn)識(shí)尚淺且缺乏特異性的干預(yù)手段。

本研究中，轉(zhuǎn)染組在培養(yǎng)24、48 h時(shí)經(jīng)過熒光倒置顯微鏡觀察可知，細(xì)胞轉(zhuǎn)染率明顯升高，而其余3組均未見細(xì)胞轉(zhuǎn)染，證實(shí)轉(zhuǎn)染組miRNA-145轉(zhuǎn)染成功。此外，本研究還顯示轉(zhuǎn)染組miRNA-145的表達(dá)水平明顯高于NC組、Blank組、Mock組，與上述倒置熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染的結(jié)果相一致，證實(shí)轉(zhuǎn)染組miRNA-145的表達(dá)水平的確較高。轉(zhuǎn)染組細(xì)胞培養(yǎng)24、48 h時(shí)增殖活性均低于NC組、Blank組、Mock組，細(xì)胞凋亡率均高于NC組、Blank組、Mock組，且轉(zhuǎn)染組細(xì)胞培養(yǎng)48 h時(shí)的增殖活性和細(xì)胞凋亡率均高于本組培養(yǎng)24 h時(shí)，表明轉(zhuǎn)染miRNA-145、滴加順鉑化療藥物的人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株的增殖活性可顯著降低，細(xì)胞凋亡率則會(huì)明顯升高，證實(shí)miRNA-145過表達(dá)能夠增強(qiáng)卵巢癌順鉑化療的敏感性，從而抑制惡性腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)惡性腫瘤細(xì)胞凋亡。miRNA-145屬于一種抑癌基因，對(duì)惡性腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖的抑制作用可能是通過抑制癌基因表達(dá)、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡、調(diào)控細(xì)胞周期實(shí)現(xiàn)的[12]。原癌基因激活是卵巢癌細(xì)胞快速增殖的重要條件，而miRNA-145能夠多靶向抑制多個(gè)癌基因的表達(dá)，包括佛氏白血病病毒整合蛋白1（friend leukemia integration 1 transcription factor，F(xiàn)LI1）、胰島素受體底物 1（insulin receptor substrate-1，IRS-1）等[13]。有研究表明，miRNA-145能夠發(fā)揮周期阻滯的環(huán)路作用，有助于調(diào)控細(xì)胞之間的增殖和凋亡平衡[14-15]。由此可知，miRNA-145對(duì)卵巢癌細(xì)胞具有抑制增殖、促進(jìn)凋亡的作用，但是關(guān)于其對(duì)卵巢癌順鉑化療敏感性的研究尚鮮有報(bào)道。本次研究通過對(duì)各組細(xì)胞不同時(shí)間的細(xì)胞核形態(tài)學(xué)變化觀察結(jié)果顯示，miRNA-145轉(zhuǎn)染后細(xì)胞核出現(xiàn)嚴(yán)重的形態(tài)學(xué)改變，且培養(yǎng)48 h時(shí)的形態(tài)學(xué)改變明顯較培養(yǎng)24 h后的形態(tài)學(xué)改變嚴(yán)重，而順鉑殺滅卵巢癌細(xì)胞的作用機(jī)制便是誘導(dǎo)細(xì)胞核發(fā)生形態(tài)學(xué)改變[16]，促進(jìn)其凋亡，抑制增殖。故此，結(jié)合上述分析和本研究結(jié)果可以發(fā)現(xiàn)，miRNA-145過表達(dá)本身具有抑制卵巢癌細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡的作用，但與此同時(shí)該干預(yù)方法還可增強(qiáng)卵巢癌細(xì)胞對(duì)順鉑化療的敏感性，間接抑制惡性腫瘤細(xì)胞增殖、促進(jìn)其凋亡。

本研究中，各組MDR1mRNA表達(dá)水平比較有顯著性差異，其中轉(zhuǎn)染組水平最低，推測(cè)miRNA-145過表達(dá)能夠降低MDR1的表達(dá)水平；在P-gp蛋白相對(duì)表達(dá)量的比較結(jié)果中，轉(zhuǎn)染組最低，而NC組、Blank組、Mock組均高于轉(zhuǎn)染組，推測(cè)miRNA-145過表達(dá)的人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株中P-gp蛋白表達(dá)可能受到顯著抑制。P-gp蛋白主要存在于耐藥惡性腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞膜上，能夠與ATP結(jié)合，并且據(jù)此獲得能量，進(jìn)而發(fā)揮藥物泵的功能，促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)存在的化療藥物快速排出，減少惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)化療藥物的積聚，減輕甚至避免細(xì)胞核由于受到損傷而發(fā)生形態(tài)學(xué)變化[17]。既往研究顯示，在人肝癌細(xì)胞株SMMC-7721中，在添加順鉑后給予增敏劑干預(yù)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)增敏劑干預(yù)組細(xì)胞的P-gp蛋白表達(dá)量顯著降低，而空白對(duì)照組的P-gp蛋白持續(xù)處于較高水平，證實(shí)P-gp蛋白的表達(dá)水平越高，惡性腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑化療的敏感性越差，而P-gp蛋白的表達(dá)水平越低，惡性腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑化療的敏感性越高[18]。由此可知，P-gp蛋白表達(dá)與惡性腫瘤細(xì)胞順鉑化療的敏感性呈明顯負(fù)相關(guān)。類似的結(jié)論在國(guó)外Falzone等[19]的報(bào)道中也得到證實(shí)。miRNA-145過表達(dá)能夠下調(diào)MDR1基因的表達(dá)，而該基因的表達(dá)產(chǎn)物便是P-gp蛋白，因此miRNA-145過表達(dá)能夠降低P-gp蛋白的表達(dá)水平，從而增強(qiáng)細(xì)胞株對(duì)順鉑的敏感性，改善抗腫瘤效果。結(jié)合本研究結(jié)果與上述分析，推測(cè)miRNA-145過表達(dá)很可能是通過降低P-gp蛋白的表達(dá)增強(qiáng)人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株A2780/DDP對(duì)順鉑的敏感性，但是具體調(diào)控機(jī)制仍有待深入探討。

綜上所述，miRNA-145過表達(dá)能夠抑制人卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株A2780/DDP增殖，促進(jìn)其凋亡，還可導(dǎo)致細(xì)胞核出現(xiàn)嚴(yán)重的形態(tài)學(xué)改變，推測(cè)與降低P-gp蛋白表達(dá)、增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)順鉑化療的敏感性有關(guān)，但是具體機(jī)制仍有待深入探討，可作為進(jìn)一步研究的方向。