心腦疏通膠囊指紋圖譜研究

周和 譚翔勻 馮華 王奧

【摘 要】 目的：建立心腦疏通膠囊的HPLC指紋圖譜。方法：Waters XSelect C18（4.6 mm × 250 mm，5μm）色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長270nm，柱溫25℃。以丹參酮IIA為參照，繪制10批心腦疏通膠囊指紋圖譜，采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)（版本 2004 A）”進(jìn)行相似度評價(jià)。結(jié)果：10批樣品相似度均在0.95以上，確認(rèn)共有峰20個(gè)，標(biāo)示3個(gè)已知化合物（丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I），方法學(xué)考察結(jié)果符合指紋圖譜技術(shù)要求。結(jié)論：該方法具有良好的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和專屬性，可為該制劑的質(zhì)量控制提供一定參考。

【關(guān)鍵詞】 心腦疏通膠囊;丹參酮IIA;質(zhì)量控制;指紋圖譜;相似度

【中圖分類號】R284.1? ?【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A? ? 【文章編號】1007-8517（2020）9-0043-05

Study on Fingerprint of Xinnao Shutong Capsule

ZHOU He1 TAN Xiangyun1 FENG Hua1 WANG Ao2*

1.Zunyi Institute for Food & Drug Control，Zunyi 563002， China;

2. Zunyi Product Quality Inspection and Testing Institute，Zunyi 563002， China

Abstract：ObjectiveTo establish the HPLC fingerprint of Xinnao Shutong capsule. MethodsWaters XSelect C18（4.6mm × 250mm，5μm） as analytical column and acetonitrile-0.1% phosphoric acid solution as mobile phase in a gradient mode. Detecting wavelength was set at 270nm. The temperature of column was at 25℃. Total 10 batches of Xinnao Shutong capsule samples were determined by selected tanshinone IIA as a reference. The similarity evaluation was conducted by using Similarity Evaluation System for Chromatographic Fingerprint of TCM（2004 A edition）. ResultsThe similarities in 10 batches of Xinnao Shutong capsule samples were greater than 0.95. There were 20 common peaks in the HPLC fingerprints and identified 3 compounds（tanshinone IIA， cryptotanshinone， tanshinone I）. The results of methodological study meet the technical requirements of fingerprint.ConclusionThe proposed method showed its advantages of good precision， repeatability， stability and specificity， and can provide some reference for the quality control of Xinnao Shutong capsule.

Keywords：Xinnao Shutong Capsule;Tanshinone IIA;Quality Control;Fingerprint;Similarity

心腦疏通膠囊由丹參、川芎、法半夏、茯苓等11味中藥材組成，具有益氣活血、化瘀通絡(luò)之功效，用于氣虛血滯、脈絡(luò)瘀阻所致中風(fēng)后遺癥，半身不遂、肢體麻木及心腦血管供血不足等[1-2]。丹參中丹參酮類化合物有抗菌消炎、祛瘀止痛等作用，是心腦疏通膠囊發(fā)揮功效的指標(biāo)性成分之一[3-4]。該中藥制劑現(xiàn)有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)比較簡單，只有川芎、枸杞子等幾味藥材的薄層鑒別，難以準(zhǔn)確、全面地表達(dá)該制劑的整體質(zhì)量和療效。

中藥指紋圖譜具有整體性、相似性的特點(diǎn)，是一種能突出中藥及其制劑完整面貌的有效方法[5-6]，有助于中藥及其制劑內(nèi)在化學(xué)成分的綜合評價(jià)。近年來，中藥指紋圖譜技術(shù)已廣泛應(yīng)用于多種中藥及其制劑的質(zhì)量控制[6-10]。本研究以處方中丹參酮類成分（丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I）為切入點(diǎn)，采用梯度洗脫模式，建立心腦疏通膠囊HPLC指紋圖譜，以期為心腦疏通膠囊的識別和質(zhì)量控制提供一定的參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器與試劑 Agilent 1260高效液相色譜議（美國安捷倫公司），Waters XSelect C18 （4.6mm×250mm，5μm）色譜柱;MS204TS型梅特勒電子天平（北京中恒日鑫科技有限公司），KQ-500DV型數(shù)控超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試劑與藥品 丹參酮IIA（98.9%，批號：110766-201721）、隱丹參酮（99.1%，批號：110852-201605）、丹參酮I（98.2%，批號：110867-201705），心腦疏通膠囊（批號：161201、161202、161203購買于遵義市中醫(yī)院，19101601、19101602、19101603、19102101、19102102、19102103、19102104為自制）。乙腈（天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司），純凈水（杭州娃哈哈集團(tuán)有限公司），乙醚（成都金山化學(xué)試劑有限公司），其它試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱waters XSelect C18（4.6 mm ×250 mm，5μm）;流動(dòng)相為乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B），梯度洗脫（0-5min，85% B;5-20min，85% B→50% B;20-35min，50% B→30% B;35-45min，30% B→10% B;45-65min，10% B）;檢測波長：270nm;流速：1.0mL/min;柱溫：25℃;進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液 稱取丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I對照品適量，分別用甲醇溶解制成含丹參酮IIA 212.63μg/mL、隱丹參酮47.52μg/mL、丹參酮I的單一對照品溶液，搖勻，用0.22μm 微孔濾膜濾過，即得。

2.2.2 供試品溶液 取心腦疏通膠囊內(nèi)容物適量，研細(xì)，取約3.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入乙醚50mL，靜置24h（時(shí)時(shí)振搖），過濾，濾液蒸干，用甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶中，定容，搖勻，用0.22μm微孔濾膜濾過，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 精密度試驗(yàn) 取“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液（批號：161201）按“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6次，主要共有峰與17號丹參酮IIA參照峰的相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD均小于0.93%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.2 重復(fù)性試驗(yàn) 取心腦疏通膠囊（批號：161201）內(nèi)容物適量，按“2.2.2”項(xiàng)下制備供試品溶液，共6份，按上述色譜條件進(jìn)樣測定，記錄各共有峰的相對保留時(shí)間和相對峰面積，結(jié)果，20個(gè)共有峰相對保留時(shí)間RSD均小于1.29%（n=6），相對峰面積的RSD均小于1.83%（n=6），表明重復(fù)性良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) ?。ㄅ枺?61201）同一供試品溶液，分別在0、2、5、8、12、24h進(jìn)樣檢測，共有峰的相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD（n=6）均小于2.62%，表明供試品溶液于室溫下放置24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4 指紋圖譜生成與相似度評價(jià)、共有峰的指認(rèn)及相關(guān)分析

2.4.1 指紋圖譜的生成 取10批心腦疏通膠囊內(nèi)容物適量，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測定。采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)2004 A版”分析處理得心腦疏通膠囊HPLC指紋圖譜，如圖1、圖2所示。

2.4.2 相似度分析 采用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價(jià)系統(tǒng)（版本 2004 A）”，以S1號樣品（161201）為對照指紋圖譜，進(jìn)行整體相似度評價(jià)。結(jié)果顯示，10批樣品相似度均大于0.95，表明各樣品間差異小，質(zhì)量穩(wěn)定性良好，詳見表1。

2.4.3 共有峰的指認(rèn) 分別取“2.2.1”項(xiàng)下丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I的單一對照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件依次測定，并與樣品對照圖譜進(jìn)行對比指認(rèn)。結(jié)果，共有峰中17、12、13號色譜峰分別指認(rèn)為丹參酮IIA、隱丹參酮、丹參酮I，如圖1、圖3所示。

2.4.4 共有峰的相關(guān)分析 10批樣品總峰31個(gè)，共有20個(gè)共有峰，其峰面積總和占色譜峰總面積的91.49%，具有較大代表性。其中，17號峰丹參酮IIA峰面積大，含量較高，峰形好，分離度為2.09，在樣品中較穩(wěn)定，故以其保留時(shí)間和峰面積為參照，計(jì)算其它共有峰的相對保留時(shí)間和相對峰面積。各共有峰相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD均在3%范圍內(nèi)，無顯著性差異。結(jié)果詳見表2、表3。

3 討論

研究對比考察甲醇、乙醚兩種提取溶劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)甲醇提取液的色譜峰繁雜，不易分離，而用乙醚提取時(shí)，基線較平穩(wěn)，各色譜峰保留時(shí)間適中，故選擇乙醚為提取溶劑。此外，經(jīng)多次梯度洗脫模式摸索，對甲醇-水、甲醇-磷酸溶液、甲醇-醋酸溶液、乙睛-水、乙睛-磷酸溶液、乙睛-醋酸溶液6個(gè)流動(dòng)相考察發(fā)現(xiàn)：乙腈-0.1%磷酸溶液對樣品成分的梯度洗脫效果最好。同時(shí)采用DAD檢測器進(jìn)行紫外區(qū)全波長掃描，發(fā)現(xiàn)在270nm波長下色譜圖基線噪音較低，色譜峰數(shù)目多，保留時(shí)間適中，有利于指紋圖譜分析，因此選擇270nm為檢測波長。

綜上所述，本研究首次建立心腦疏通膠囊的HPLC指紋圖譜，確認(rèn)20個(gè)共有峰，標(biāo)示指認(rèn)了丹參酮IIA（17號）、隱丹參酮（12號）、丹參酮I（13號）3個(gè)成分，10批樣品相似度均在0.95以上。該方法簡便、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可為心腦疏通膠囊的質(zhì)量控制提供可靠一定的參考。在色譜圖中，以丹參酮IIA和隱丹參酮含量相對較高，可用于定量檢測分析，筆者將進(jìn)一步深入研究，完善心腦疏通膠囊的質(zhì)量控制。

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（收稿日期：2020-01-23 編輯：程鵬飛）