肝硬化MSCT肝臟灌注參數(shù)與血清NO、NOS及TNF-α相關(guān)性分析

周艷玲 楊正廣 王強 李彩英

肝硬化是我國最常見的慢性疾病，一氧化氮(nitric oxide,NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)、腫瘤壞死因子(TNF-α)是近年來生命科學研究領(lǐng)域中最熱點課題之一。NO在肝細胞損傷機制中扮演著重要角色，與肝硬化的程度密切相關(guān)[1,2]。本課題旨在檢測肝硬化患者血清NO、NOS、TNF-α水平及其與MSCT灌注參數(shù)是否存在一定的相關(guān)性，更進一步探討其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究共納入河北醫(yī)科大學第二醫(yī)院2018年1月至2019年1月35例肝硬化患者(男22例，女13例；年齡20～80歲，平均年齡(54.88±14.67)歲；其中乙型肝炎后肝硬化30例，酒精性肝硬化5例；肝臟穿刺活檢證實8例，血清學指標診斷27例。行上腹部CT增強掃描，得到灌注圖像及灌注參數(shù)，同時抽取患者血漿，分離血清?；颊呔稀恫《拘愿窝追乐畏桨浮分嘘P(guān)于肝硬化的臨床診斷標準[3]。5例志愿者作為對照組，其中男3例，女2例；年齡50～70歲，平均年齡(53.23±10.55)歲，因其他原因行上腹部CT掃描。

1.2 納入與排除標準

1.2.1 納入標準：無心血管疾病、肝臟占位性病變、脂肪肝、肝硬化等肝臟病變。

1.2.2 排除標準：排除因呼吸運動影響導致圖像模糊或掃描層面變動而無法準確圖像者。

1.3 觀察指標

1.3.1 實驗室指標：所有患者及正常對照組均空腹采血作NO、NOS、TNF-α檢測。主要儀器：放射免疫計數(shù)器、半自動生化分析儀。主要試劑盒：南京建成生物工程研究所制造NO、NOS試劑盒。檢查方法：NO、NOS采用化學比色法。TNF-α采用ELISA法。

1.3.2 影像學指標：肝臟血流灌注參數(shù)測定 將原始數(shù)據(jù)傳至AW4.2工作站，使用肝臟灌注分析軟件處理。分別標識腹主動脈、門靜脈作為輸出靜脈和輸入靜脈，獲得相應(yīng)的時間-密度曲線,計算6個肝臟灌注參數(shù)：血流量(blood flow,BF)、血容量(blood volume,BV)、平均通過時間(mean transit time,MTT)、毛細血管表面通透性(permeability-surface,PS)、肝動脈灌注分數(shù)(hepatic arterial fraction,HAF)、IRF到達時間(IRF time of arrival,IRF-TO)。感興趣區(qū)選擇標準：課題研究中均選擇5 mm×5 mm感興趣區(qū)，以利于對比，并避開肝臟內(nèi)大血管，離肝邊緣約1 cm，以避免部分容積效應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 2組NO、TNOS、INOS、TNF-α水平比較 肝硬化組NO、TNOS、INOS、TNF-α值均高于正常對照組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 2組NO、TNOS、INOS、TNF-α值對照

2.2 不同肝功能分級與正常對照組之間灌注參數(shù)數(shù)值對照表 Child A、B、C患者BF、HRF-TO水平均低于對照組，且BF、IRF-TO水平隨Child分級不斷降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Child A患者BV、PS、HAF值與對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。Child B、C患者BV、PS值均低于對照組，HAF高于對照組，Child B、C患者BV、HAF比較，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

表2 不同肝功能分級與正常對照組之間灌注參數(shù)數(shù)值對照

2.3 不同免疫組化指標的灌注參數(shù)比較 NO生化學指標除對灌注參數(shù)MTT相關(guān)性較低外，余BF、BV、PS、HAF及IRF-TO等灌注參數(shù)均有較好的相關(guān)性(P<0.005)；iNOS及TNF-α與BF、PS、IRF-TO及MTT、HAF、IRF-TO有相關(guān)性(P<0.05)；而eNOS生化學指標與各種灌注參數(shù)無相關(guān)性(P>0.05)。見表3。

表3 不同免疫組化指標的灌注參數(shù)對照

3 討論

肝硬化形成與門脈系統(tǒng)的血流動力學改變、免疫反應(yīng)、基因調(diào)控、血管活性物質(zhì)等因素有關(guān)，以上因素在肝硬化門脈高壓癥的發(fā)病機制中具有相互作用的關(guān)系。已有研究表明NO、NOS、TNF-α等細胞因子在肝硬化發(fā)生發(fā)展過程中有重要作用，肝臟灌注可以反映肝臟血流動力學改變，將二者聯(lián)合將為科學判定肝硬化門靜脈高壓嚴重程度提供重要的理論根據(jù)。

3.1 NO及NOS與肝硬化的相關(guān)性研究 NO既是一種新型的生物信息傳遞體，又是一種反應(yīng)性極強的自由基。它兼有第二信使和神經(jīng)遞質(zhì)的作用，介導和調(diào)節(jié)多種病理生理過程，尤其對肝硬化患者血流動力學的影響、白蛋白合成、肝臟解毒、生物轉(zhuǎn)化、肝細胞保護、肝炎形成具有重要的病理生理學作用。NO是具有多種生物活性的物質(zhì)，體內(nèi)血管內(nèi)皮細胞、血小板、中性粒細胞、巨噬細胞、神經(jīng)組織在一定刺激下均可產(chǎn)生NO。NO的生物活性還包括：參與維持血管舒張、血清量及血壓調(diào)節(jié)；控制血小板聚集和黏附，抑制白細胞的黏附，并調(diào)節(jié)平滑肌細胞增生；中樞神經(jīng)元合成的NO可作為生理功能的神經(jīng)遞質(zhì)[1,4-7]。本課題研究結(jié)果顯示肝硬化組NO、TNOS、INOS、TNF-α值均高于正常對照組，表明肝硬化時，不僅肝本身血流動力學改變，血液中確實存在異常活性物質(zhì)釋放，將肝硬化患者血清中免疫組化因子與MSCT血流灌注參數(shù)包括(BF、BV、PS、HAF、IRF-TO)進行相關(guān)性分析，NO水平均與其有很好的相關(guān)性，說明NO的增高發(fā)揮了生物作用，加重肝硬化門脈血流動力學紊亂[8-10]； NO對細胞的凋亡的影響可能與NOS催化NO生成底物和輔助因子的充足程度有關(guān)，當?shù)孜锛拜o助物不足時，內(nèi)毒素血癥激活NOS將通過生成NO誘導細胞凋亡。NO對肝臟有保護作用，也可以在一定條件下加劇損傷，因此，檢測血清NO、NOS含量對臨床估計肝硬化的病情進展及療效觀察有一定研究價值。但TNOS免疫組化指標與肝硬化灌注參數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，該結(jié)論有待更大樣本進行研究。

3.2 TNF-α與肝硬化的關(guān)系 眾所周知，NO是左旋精氨酸在NOS作用下產(chǎn)生的，而TNF-α是誘導NOS合成的重要因素之一，肝臟在肝硬化損傷時，由于腸道菌群失調(diào)，腸道淤血水腫門體分流，肝臟Kupffer細胞活性減弱以及全身免疫力下降等導致內(nèi)毒素血癥。內(nèi)毒素血癥的產(chǎn)生以及肝炎病毒的感染，特別是合并腹膜炎時，由單核巨噬細胞產(chǎn)生的TNF-α升高，升高的TNF-α誘導NOS合成，因此肝硬化時特別是肝硬化腹水合并感染時，NO及TNF-α均明顯增高。與國內(nèi)馬建國等[11]研究結(jié)果相同，肝硬化時TNF-α生成增多。研究報道，肝癌時，由于癌腫導致機體發(fā)生顯著病理生理改變，造成機體免疫系統(tǒng)受損，可能是導致TNF-α產(chǎn)生顯著下降的原因[12]。本課題將其與MSCT灌注參數(shù)進行相關(guān)性分析，MTT灌注參數(shù)與TNF-α中具有相關(guān)性，與其他參數(shù)無明顯相關(guān)。

綜上所述，MSCT不僅可以反映肝臟血流動力血異常，也與血管內(nèi)異?；钚晕镔|(zhì)釋放呈明顯相關(guān)性，MSCT灌注成像的研究對解釋肝硬化病理機制具有非常重要的臨床價值，是診斷肝硬化有效指標及敏感手段，可在肝硬化早期發(fā)現(xiàn)診斷提供一種新的無創(chuàng)性的方法。