黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)、血清生化指標(biāo)和肝臟脂滴面積的影響

胡俊茹 易昌金 王國(guó)霞 莫文艷 黃燕華,2

(1.廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所,農(nóng)業(yè)農(nóng)村部華南動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)與飼料重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣東省動(dòng)物育種與營(yíng)養(yǎng)公共實(shí)驗(yàn)室,廣東省畜禽育種與營(yíng)養(yǎng)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,廣州 510640;2.廣州飛禧特生物科技有限公司,廣州 510640)

脂質(zhì)作為水產(chǎn)動(dòng)物一種重要的營(yíng)養(yǎng)素,為魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)提供所需的能量和必需的脂肪酸是水產(chǎn)動(dòng)物飼料中重要的組成成分。豆油含有多種不飽和脂肪酸是水產(chǎn)動(dòng)物飼料重要的油脂來(lái)源。隨著水產(chǎn)養(yǎng)殖的快速發(fā)展和高油脂飼料的廣泛使用[1],豆油需求持續(xù)增加,但我國(guó)大豆主要依賴進(jìn)口,對(duì)外依存度非常高,豆油價(jià)格的漲幅直接關(guān)系我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖效益的好壞。因此,尋求其他合適的脂肪源替代豆油是保障我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要措施之一。

昆蟲(chóng)是地球上生物量最大的群體,其生物量超過(guò)其他生物總量的10倍,是有待開(kāi)發(fā)的巨大的食物和飼料資源。黑水虻(Hermetia illucensL.)是雙翅目水虻科昆蟲(chóng),又名亮斑扁角水虻,具有繁殖迅速,攝食范圍廣,飼料轉(zhuǎn)化率高,飼養(yǎng)占地空間小等優(yōu)勢(shì),黑水虻幼蟲(chóng)干物質(zhì)含有大約30%左右的脂肪[2,3],其中棕櫚酸(C16∶0)、油酸(C18∶1)和亞油酸(C18∶2)含量較高,月桂酸(C12∶0)含量豐富[3—5],黑水虻幼蟲(chóng)脂肪酸組成和含量會(huì)隨著采食基質(zhì)的不同略有差異,但仍以這幾種脂肪酸為主[6]。已有研究表明黑水虻蟲(chóng)油可完全替代幼建鯉(Cyprinus carpiovar.Jian)飼料中的豆油[5],部分替代虹鱒(Oncorhynchus mykiss)飼料中魚(yú)油[3,7],ST-Hilaire等[6]認(rèn)為黑水虻是替代動(dòng)物飼料魚(yú)油的適宜脂肪源。

黃顙魚(yú)(Pelteobagrus fulvidraco)是我國(guó)主要的水產(chǎn)名特養(yǎng)殖品種之一,其肉質(zhì)細(xì)嫩、無(wú)肌間刺、味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富、藥用價(jià)值較高。2017年我國(guó)黃顙魚(yú)養(yǎng)殖產(chǎn)量為43.44×107kg[8],每年以20%左右的幅度迅猛增長(zhǎng),國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)發(fā)展?jié)摿薮?。黃顙魚(yú)是雜食性動(dòng)物,對(duì)脂肪的最適需要量為9%—12%[9],目前豆油仍是黃顙魚(yú)配合飼料主要的脂肪來(lái)源。因此,鑒于豆油供應(yīng)短缺的現(xiàn)狀和飼料產(chǎn)業(yè)發(fā)展需求的矛盾,本試驗(yàn)選取黃顙魚(yú)為研究對(duì)象,旨在研究黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率、血清生化指標(biāo)、血清抗氧化能力、炎癥因子和肝臟脂滴面積的影響,為黑水虻蟲(chóng)油在黃顙魚(yú)幼魚(yú)配合飼料中的應(yīng)用提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 黑水虻蟲(chóng)油制備

取適量新鮮幼蟲(chóng)(7—8日齡,由廣州飛禧特生物科技有限公司提供)倒入小型果蔬料理機(jī),快速磨碎。然后按照料液比1∶3加入乙酸乙酯,4℃萃取24h,收集提取液,于4℃下6000 r/min離心10min,除去沉淀,得到粗提液,使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對(duì)粗提液進(jìn)行濃縮,待有機(jī)溶劑蒸發(fā)完畢直至恒重,收集油脂,用于試驗(yàn)。

1.2 試驗(yàn)飼料

以國(guó)產(chǎn)魚(yú)粉、豆粕、花生粕作為主要的蛋白質(zhì)源,黑水虻蟲(chóng)油分別替代0、20%、40%、60%、80%和100%的豆油,配制6種等氮等脂的試驗(yàn)飼料,飼料配方見(jiàn)表1。飼料制備之前,將魚(yú)粉和豆粕等飼料原料經(jīng)粉碎后過(guò)60目篩網(wǎng),再按配比梯度混勻后倒入V型攪拌機(jī)充分混合20min。將大豆卵磷脂、黑水虻蟲(chóng)油和豆油放入燒杯中混合均勻,將其倒入已混合均勻的干粉,V型攪拌機(jī)攪拌均勻再加入30%左右的水繼續(xù)攪拌,攪拌均勻后利用雙螺桿擠條機(jī)(F-75型,華南理工大學(xué)研制),擠壓溫度為(43±2)℃,將其制成直徑為1.5 mm的硬顆沉性飼料,在55℃條件下烘12h后進(jìn)行冷卻回潮處理,所制飼料采用雙層塑料袋包裝并封口,-20℃冰箱保存?zhèn)溆?以防止飼料受潮氧化變質(zhì)。飼料原料和試驗(yàn)飼料脂肪酸組成見(jiàn)表2。

1.3 試驗(yàn)魚(yú)與飼養(yǎng)管理

黃顙魚(yú)幼魚(yú)購(gòu)于廣州市白云區(qū)錦龍漁業(yè)有限公司,暫養(yǎng)期間投喂黃顙魚(yú)配合飼料(錦龍漁業(yè)有限公司提供),待試驗(yàn)開(kāi)始前1周再用自制硬顆粒飼料(對(duì)照組飼料)暫養(yǎng)使其適應(yīng)試驗(yàn)飼料。養(yǎng)殖試驗(yàn)在廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院動(dòng)物科學(xué)研究所水產(chǎn)研究室水產(chǎn)養(yǎng)殖基地內(nèi)進(jìn)行,挑選初始重為(2.12±0.01) g的黃顙魚(yú)幼魚(yú)840尾,隨機(jī)分到24個(gè)缸,每缸300L水,35尾魚(yú),然后隨機(jī)分成6組,每種飼料飼喂一組試驗(yàn)魚(yú)。每天09:00和16:00飽食投喂2次,投喂結(jié)束后40min將缸內(nèi)剩余的飼料和糞便用虹吸管吸走。記錄水溫、氣溫、pH、攝食量及死亡情況等,養(yǎng)殖周期為56d。本試驗(yàn)采用獨(dú)立循環(huán)養(yǎng)殖系統(tǒng),控制水流速2 L/min。每天晚上8:00打開(kāi)排污系統(tǒng)排污,在試驗(yàn)前4周,每3天更換一次循環(huán)水,每次更換2/3,之后每天更換1/2。養(yǎng)殖水溫20—29℃,溶氧濃度不低于5 mg/L,氨氮和亞硝酸鹽濃度均低于

0.25 mg/L。

1.4 樣品采集和分析

每天投飼40min后清理殘餌,養(yǎng)殖試驗(yàn)開(kāi)始1個(gè)月后開(kāi)始收集糞便,投飼1.5h后采用網(wǎng)撈法收集包膜完整的糞便,連續(xù)收集糞便至檢測(cè)樣品需求量,為期20d。將收集到的糞便60℃烘干,粉碎后裝袋密封,-20℃冰箱中保存?zhèn)溆谩Ｔ陴B(yǎng)殖試驗(yàn)結(jié)束后停食24h,統(tǒng)計(jì)每缸尾數(shù)并稱量每缸魚(yú)體終末體重,然后每個(gè)缸隨機(jī)選取15尾魚(yú),從中隨機(jī)選取3尾魚(yú)置于-20℃保存,用于測(cè)定全魚(yú)常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分,剩余的12尾魚(yú)快速放入40 mg/L的MS-222溶液中麻醉,靜脈取血,測(cè)量體長(zhǎng)、體重,其中6尾魚(yú)冰上解剖,測(cè)定其內(nèi)臟重、肝臟重及腹脂重,然后其中3尾魚(yú)分離肌肉和肝臟用于測(cè)定脂肪酸組成,另3尾魚(yú)取肝臟進(jìn)行油紅O染色分析;其余6尾魚(yú)用于分子樣品分析。尾靜脈血于冷凍離心機(jī)4℃下4000 r/min離心10min制備血清樣品,保存于-80℃冰箱中,用于血清生化、抗氧化指標(biāo)和炎癥因子測(cè)定。

試驗(yàn)飼料、全魚(yú)及糞便常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的測(cè)定方法如下: 能量釆用氧彈量熱儀(IKA-C2000)測(cè)定,粗脂肪含量采用乙醚抽提的方法(GB/T6433-2006)進(jìn)行測(cè)定,灰分含量采用550℃灼燒至恒重的方法(GB/T6438-2007)測(cè)定,水分含量采用105℃烘箱烘干至恒重的方法(GB/T6435-2014)進(jìn)行測(cè)定,粗蛋白質(zhì)含量采用凱氏定氮法(GB/T6432-2018)進(jìn)行測(cè)定,磷含量采用鉬黃比色法(GB/T6436-2002)進(jìn)行測(cè)定,鈣含量采用乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)滴定法(GB/T6436-2002)進(jìn)行測(cè)定。飼料及糞便中Y2O3含量采用等離子體光譜儀(SPECTRO CIOSCCD)進(jìn)行測(cè)定。

血清總蛋白(Total protein,TP)、白蛋白(Albumin,ALB)、球蛋白(Globulin,GLO)、尿素氮(Urea nitrogen,UN)、膽固醇(Cholesterol,CHO)、甘油三酯(Triglycerides,TG)、高密度脂蛋白膽固醇(High density lipoprotein Cholesterol,HDL-CH)、低密度脂蛋白膽固醇(Low density lipoprotein Cholesterol,LDL-DH)、血糖(Glucose,GLU)、乳酸脫氫酶(Lactic dehydrogenase,LDH)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(Alanine transaminase,ALT)及谷草轉(zhuǎn)氨酶(Aspatate transaminase,AST)采用全自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行檢測(cè)?？寡趸富钚圆捎媚暇┙ǔ稍噭┖袦y(cè)定。白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素-8(Interleukin-8,IL-8)、白介素-10(Interleukin-10,IL-10)采用酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒測(cè)定。

表 1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ), %)Tab.1 Composition and nutrient levels of experimental diets (air-dry basis,%)

油紅O染色: 首先對(duì)肝臟組織采用冷凍切片法進(jìn)行肝臟組織切片制作,且切片厚度要求為6 μm,將制作好的肝臟切片放在配置好的10% 福爾馬林1% CaCl2固定液中固定15min轉(zhuǎn)移至60%異丙醇中漂洗2min,隨后將組織切片放入油紅O工作液中染色10min,接著用60%異丙醇溶液分化漂洗,自來(lái)水沖洗,最后用甘油明膠封固,于顯微鏡下觀察染色情況并拍照。每組內(nèi)每張切片隨機(jī)挑選至少3個(gè)200倍視野進(jìn)行拍照。拍照時(shí)盡量讓組織充滿整個(gè)視野,保證每張照片的背景光一致。應(yīng)用Image-Pro Plus 6.0軟件選取相同的紅色作為判斷所有照片脂滴的統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn),對(duì)每張照片進(jìn)行分析得出每張照片紅色脂滴占整個(gè)組織面積的比率即脂滴的面積百分比(%)。

1.5 指標(biāo)計(jì)算

成活率(Survivalrate,SR,%)=100×Nt/N0;

增重率(Weightgainrate,WGR,%)=100×(Wt-W0)/W0;

特定生長(zhǎng)率(Specificgrowthrate,SGR,%/d)=100×(lnWt-lnW0)/t;

飼料系數(shù)(Feedconversionratio,FCR)=Wf/(Wt-W0);

攝食量(Foodintake,FI,g/d)=Wf/t

肝體比(Hepatosomaticindex,HSI,%)=100×Wh/W;

臟體比(Viscerosomaticindex,VSI,%)=100×Wv/W;

肥滿度(Conditionfactor,CF,g/cm3)=100×W/L3;

腹脂指數(shù)(Intraperitionealfatindex,IPF,%)=Wi/Wt×100;

干物質(zhì)的表觀消化率(ADC,%)=100×(1-Dy/Fy);

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率(ADC,%)=100×[1-(Fn×Dy)/(Dn/Fy)]式中,Nt為終末尾數(shù);N0為初始尾數(shù);Wt為終末體質(zhì)量(g);W0為初始體質(zhì)量(g);t為實(shí)驗(yàn)天數(shù)(d);Wf為攝入飼料量(g);Wh為魚(yú)肝臟重(g);Wv為魚(yú)內(nèi)臟重(g);W為魚(yú)體質(zhì)量(g);L為魚(yú)體長(zhǎng)(cm);Wi為腸系膜脂肪質(zhì)量(g);Fn為糞便中營(yíng)養(yǎng)素百分含量或能量值;Dn為飼料中營(yíng)養(yǎng)素百分含量或能量值;Fy為糞便中Y2O3的含量;Dy為飼料中Y2O3的含量。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤差(n=3)表示。采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。首先對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),若滿足方差齊性則用單因素方差分析(One-WayANOVA)分析數(shù)據(jù),差異顯著者再用LSD檢驗(yàn)方法進(jìn)行多重比較,若不滿足方差齊性則采用Dunnett’sT3檢驗(yàn)法進(jìn)行多重比較。P＜0.05表示差異顯著。

表 2 原料和飼料脂肪酸組成(%總脂肪酸)Tab.2Fattyacidcompositionoflipidsourcesandthediet(%oftotalfattyacids)

2 結(jié)果

2.1 黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能和形體指標(biāo)的影響

由表3可知,黑水虻蟲(chóng)油脂替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)的末均重、增重率、特定生長(zhǎng)率、存活率、飼料系數(shù)、肥滿度、臟體比、肝體比及腹脂指數(shù)均無(wú)顯著影響(P＞0.05)。

2.2 黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)體成分的影響

由表4可知,與對(duì)照組相比黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)粗蛋白、粗脂肪、水分、灰分、鈣和磷含量無(wú)顯著影響(P＞0.05)。

2.3 黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

由表5可知,各處理組飼料干物質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂肪、鈣、磷及能量的表觀消化率與對(duì)照組相比均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。替代組鈣的表觀消化率與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05),但T100組顯著低于T60組與T80組(P＜0.05)。

2.4 黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響

由表6可知,與對(duì)照組相比各處理組黃顙魚(yú)幼魚(yú)血清白蛋白、低密度脂蛋白膽固醇、甘油三酯、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶、尿素氮、球蛋白、乳酸脫氫酶、血糖、總蛋白的含量差異不顯著(P＞0.05)。高密度脂蛋白膽固醇隨著替代比例的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì),T60組和T80組顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

表 3 黑水虻蟲(chóng)油替代魚(yú)油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能和形體指標(biāo)的影響Tab.3 Effects of dietary soybean oil replaced with Hermetia illucens larvae oil on growth performance and physical indicators of juvenilePelteobagrus fulvidraco

表 4 黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)體成分的影響(干重, %)Tab.4 Effects of dietary soybean oil replaced with Hermetia illucens larvae oil on body composition of juvenile Pelteobagrus fulvidraco(dry weight %)

2.5 黑水虻蟲(chóng)油替代魚(yú)油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)血清抗氧化指標(biāo)和炎癥因子的影響

由表7可知,與對(duì)照組相比各替代組黃顙魚(yú)幼魚(yú)血清抗超氧陰離子、過(guò)氧化氫酶、超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量均無(wú)顯著差異(P＞0.05)。與對(duì)照組相比,各處理組血清腫瘤壞死因子-α濃度無(wú)顯著差異(P＞0.05);當(dāng)黑水虻蟲(chóng)油替代比例超40%時(shí),各處理組血清中白介素-10、白介素-6及白介素-8的濃度均顯著高于對(duì)照組(P＜0.05)。

2.6 黑水虻蟲(chóng)油脂替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)肝臟脂滴面積的影響

由表8和圖1可知,與對(duì)照組相比黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)肝臟脂滴面積無(wú)顯著影響(P＞0.05)。

表 5 黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響Tab.5 Effects of dietary soybean oil replaced with H. illucens larvae oil on ADC’s of feed nutrients (%)

表 6 黑水虻蟲(chóng)油替代魚(yú)油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)血清生化指標(biāo)的影響Tab.6 Effects of dietary soybean oil replaced with H. illucens larvae oil on serum biochemical indices of juvenile Pelteobagrus fulvidraco

表 7 黑水虻蟲(chóng)油替代魚(yú)油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)血清抗氧化能力和炎癥因子的影響Tab.7 Effects of dietary soy bean oil replaced with H. illucens larvae oil on serum antioxidant and inflammatory factors of juvenilePelteobagrus fulvidraco

3 討論

3.1 黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能和形體指標(biāo)的影響

脂肪為魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)發(fā)育提供必需脂肪酸和能量。本試驗(yàn)結(jié)果顯示,黑水虻蟲(chóng)油完全替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)的末均重、增重率、特定生長(zhǎng)率、存活率、飼料系數(shù)未產(chǎn)生顯著影響,說(shuō)明黑水虻蟲(chóng)油可以100%替代黃顙魚(yú)幼魚(yú)配合飼料中的豆油,這一結(jié)果與Li等[5]用黑水虻蟲(chóng)油完全替代豆油對(duì)建鯉的生長(zhǎng)性能未產(chǎn)生顯著影響的結(jié)果一致。本實(shí)驗(yàn)中豆油亞油酸含量達(dá)到50.2%,而黑水虻蟲(chóng)油中月桂酸含量19.20%、棕櫚酸含量20.80%、油酸含量23.70%、亞油酸含量18.7%。Li等[5]認(rèn)為黑水虻蟲(chóng)油月桂酸含量較高與椰子油相似,而且亞油酸含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于亞麻酸的組成則與豆油相似。當(dāng)椰子油(富含月桂酸)替代虹鱒[10]飼料中低劑量的魚(yú)油和紅姑魚(yú)(Sciaenops ocellatus)[11]飼料中其他脂肪源時(shí),對(duì)魚(yú)的生長(zhǎng)性能影響不顯著,但是當(dāng)椰子油替代高劑量魚(yú)油時(shí)虹鱒增重率降低[12],在以豆油為基礎(chǔ)油脂的飼料中添加椰子油黃顙魚(yú)生長(zhǎng)性能也不受影響[13]。已有研究表明,黃顙魚(yú)體內(nèi)具有把C18多不飽和脂肪酸(PUFA)去飽和及延長(zhǎng)合成高度不飽和脂肪酸(HUFA)的能力,豆油、棕櫚油與魚(yú)油都是黃顙魚(yú)適宜的脂肪源[14],棕櫚油能夠完全替代黃顙魚(yú)飼料中魚(yú)油和豆油混合物[15],上述研究結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明黃顙魚(yú)能夠利用黑水虻蟲(chóng)油中的大部分脂肪酸。

表 8 黑水虻蟲(chóng)油替代魚(yú)油對(duì)黃顙魚(yú)肝臟脂滴的影響Tab.8 Effects of dietary soy bean oil replaced with H. illucens larvae oil on liver lipid droplets in liver of juvenile Pelteobagrus fulvidraco

本試驗(yàn)中黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)形體指標(biāo)無(wú)顯著影響,然而隨著黑水虻蟲(chóng)油替代豆油比例的增加,幼建鯉臟體比和腹脂指數(shù)顯著降低[5]。研究認(rèn)為黑水虻蟲(chóng)油富含中鏈脂肪酸[5],而中鏈脂肪酸具有減少脂肪組織沉積,可在不增加脂脂沉積的情況下提高能量的利用[16,17]。本實(shí)驗(yàn)中黃顙魚(yú)的肥滿度、臟體比、肝體比及腹脂指數(shù)均未受豆油替代比例增加時(shí)飼料中飽和脂肪酸(SFA)增加的影響,這也可能是由于黑水虻蟲(chóng)油中的短鏈脂肪酸具有降低脂肪在組織中沉積的作用導(dǎo)致的。

3.2 黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)體成分的影響

飼料組成影響魚(yú)體的體成分組成[18],飼料中過(guò)量的脂肪會(huì)導(dǎo)致大量脂肪沉積在魚(yú)體腹腔和組織中[19—21]。在本試驗(yàn)中,配置各實(shí)驗(yàn)組飼料粗蛋白、粗脂肪和能量相等可能是造成黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)粗蛋白、粗脂肪影響不顯著的因素之一,同樣Li等[5]未發(fā)現(xiàn)黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)幼建鯉肝臟、肌肉和魚(yú)體的組成存在顯著影響。研究發(fā)現(xiàn)飼料中PUFA通過(guò)降低脂肪酸合成酶(FAS)和乙酰CoA羧化酶(ACC)的酶活和含量以及提高脂肪酸氧化酶活性,從而降低體脂沉積的作用[22,23]。在本試驗(yàn)中由于黑水虻蟲(chóng)油SFA和單不飽和脂肪酸(MUFA)含量較高,因此隨著替代量的增加飼料中PUFA含量降低,這一現(xiàn)象亦出現(xiàn)在Li等[5]的試驗(yàn)中,雖然飼料中PUFA含量下降,但未對(duì)體脂肪沉積產(chǎn)生顯著影響,這可能也與中鏈脂肪酸月桂酸的降脂作用有關(guān)。但陸游等[13]在研究黃顙魚(yú)對(duì)不同脂肪源利用情況時(shí),發(fā)現(xiàn)雖然椰子油中月桂酸含量較高但黃顙魚(yú)體脂沉積也顯著高于其他富含PUFA的脂肪源組。

3.3 黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)飼料營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率的影響

消化率是評(píng)定飼料營(yíng)養(yǎng)成分可利用性的重要指標(biāo)。脂肪的表觀消化率與脂肪酸的不飽和程度及碳鏈長(zhǎng)度有關(guān)[24]。在許多魚(yú)類(lèi)中研究發(fā)現(xiàn)魚(yú)類(lèi)對(duì)脂肪酸消化率的順序依次是HUFA＞C18PUFA＞MUFA＞SFA,在同一飽和程度下短鏈脂肪酸＞長(zhǎng)鏈脂肪[25—29]。在本試驗(yàn)中雖然隨著替代量的增加飼料不飽和脂肪酸含量下降,但黃顙魚(yú)對(duì)飼料脂肪的表觀消化率無(wú)顯著差異。彭墨等[30]使用亞麻籽油替代魚(yú)油時(shí)飼料中不飽和脂肪酸含量升高,但大菱鲆(Scophthalmus maximus)幼魚(yú)對(duì)飼料脂肪的表觀消化率也無(wú)顯著差異。Ng和Gibon[31]認(rèn)為個(gè)別脂肪酸消化率微小地降低對(duì)于魚(yú)類(lèi)來(lái)說(shuō)并沒(méi)有顯著的生物學(xué)意義。

3.4 黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)血清生化指標(biāo)、抗氧化能力和炎癥因子的影響

魚(yú)類(lèi)血液生理生化指標(biāo)與機(jī)體自身的營(yíng)養(yǎng)狀況、代謝和疾病密切相關(guān)[32]。在本試驗(yàn)中,黃顙魚(yú)幼魚(yú)高密度脂蛋白膽固醇隨著替代比例的增加呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。血清高密度脂蛋白膽固醇水平反應(yīng)肝臟合成高密度脂蛋白的能力,它將總膽固醇、甘油三酯等物質(zhì)從外周組織運(yùn)輸?shù)礁闻K分解,防止總膽固醇在血管壁沉積,其血漿含量與冠狀動(dòng)脈疾病的發(fā)生負(fù)相關(guān)[33,34]。已有研究顯示單月桂酸甘油酯能夠顯著提高蛋雞血清中高密度脂蛋白膽固醇的含量,改善蛋雞的脂肪代謝[35]。然而,Li等[5]在實(shí)驗(yàn)中未發(fā)現(xiàn)黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)幼建鯉血清生化指標(biāo)產(chǎn)生顯著影響。陸游等[13]用富含月桂酸的椰子油配置等氮等脂飼料投喂黃顙魚(yú)時(shí),各組血清生化指標(biāo)無(wú)顯著差異,Luo等[12]也認(rèn)為,從椰子油提取的中鏈脂肪酸對(duì)虹鱒血漿脂類(lèi)代謝產(chǎn)物影響較小。實(shí)驗(yàn)對(duì)象不同,待研究脂肪源脂肪酸組成差異,或者養(yǎng)殖時(shí)間長(zhǎng)短等都是影響動(dòng)物血脂類(lèi)代謝差異的重要因素。

動(dòng)物機(jī)體的抗氧化狀態(tài),在一定程度上反映了機(jī)體的健康狀況。在本試驗(yàn)中黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)血清抗氧化能力無(wú)顯著影響。但陸游等[13]發(fā)現(xiàn)富含月桂酸的椰子油添加到飼料中顯著提高了黃顙魚(yú)血清超氧化物歧化酶活性(SOD)和谷胱甘肽疏基轉(zhuǎn)移酶(GST)活性,降低了MDA含量,認(rèn)為這可能與椰子油的脂肪酸不飽和程度有關(guān)。已有研究表明,高含量DHA飼料可能會(huì)提高細(xì)胞膜脂質(zhì)過(guò)氧化的敏感性,破壞抗氧化系統(tǒng),從而對(duì)大鼠肝臟組織的抗氧化能力產(chǎn)生負(fù)面影響[36]。在虹鱒幼魚(yú)中,隨著橡膠籽油(其中不飽和脂肪酸含量為74.52%;α-亞麻酸的含量為20%—24%,是大豆油和菜籽油的3—4倍)替代豆油比例的升高,血漿一氧化氮含量顯著升高,過(guò)氧化氫酶活性顯著降低[37],魚(yú)油中n-3脂肪酸含量較高可以抑制尼羅羅非魚(yú)(Oreochromis niloticus)幼魚(yú)的抗氧化酶活性[38],同樣富含亞麻酸(Linolenic acid,LNA)的紫蘇籽油,因不飽和脂肪酸含量過(guò)高,則容易引起中華絨鰲蟹(Eriocheir Sinensis)幼蟹肝胰腺的脂質(zhì)氧化應(yīng)激[39]。在本試驗(yàn)中,黑水虻蟲(chóng)油替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)血清抗氧化能力無(wú)顯著影響,說(shuō)明黑水虻蟲(chóng)油未對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)的抗氧化能力產(chǎn)生負(fù)面影響,這是否與黑水虻蟲(chóng)油的不飽和程度或是中鏈脂肪酸有關(guān),需要進(jìn)一步探討。

腫瘤壞死因子-α(Tumor necrosis factor α,TNFα)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)和白介素-8(Interleukin-8,IL-8)是促炎癥因子,而白介素-10(Interleukin-10,IL-10)是抑制炎癥因子,它們?cè)诳咕?、抗病毒感染和免疫功能調(diào)節(jié)中發(fā)揮重要作用。已有研究表明,蠅蛆油溶液能減輕二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹度,有抗炎作用[40],而目前僅在大西洋鮭(Salmo salar)中發(fā)現(xiàn),黑水虻蟲(chóng)粉替代魚(yú)粉對(duì)頭腎細(xì)胞促炎基因IL-1β、IL-8、IL-10和TNF-α的轉(zhuǎn)錄無(wú)影響[41]。黑水虻幼蟲(chóng)脂肪酸的特殊性在于其中中鏈脂肪酸MCFA和月桂酸的濃度較高[42,43],中鏈脂肪酸MCFA是一種碳鏈為6-12碳的飽和脂肪酸,由于其快速氧化和吸收,以及其在養(yǎng)殖動(dòng)物腸道微生物群中抗菌和抗病毒的特性而被廣泛研究[44,45]。在本試驗(yàn)中黃顙魚(yú)血清促炎癥因子TNF-α、IL-6、IL-8和抗炎因子IL-10均隨著黑水虻蟲(chóng)油替代量的增加而升高,這是否表明黑水虻蟲(chóng)油替代時(shí)黃顙魚(yú)幼魚(yú)血清促炎和抗炎細(xì)胞因子的動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)?由于目前相關(guān)資料比較缺乏,因此黑水虻蟲(chóng)油的抗炎作用及其機(jī)理需要深入研究。

3.5 黑水虻蟲(chóng)油脂替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)肝臟脂滴面積的影響

肝臟是機(jī)體內(nèi)脂肪合成的主要部位。肝臟脂肪沉積與從脂肪組織攝取的脂肪酸和肝臟脂肪合成有關(guān)[46],已有研究表明,植物油替代魚(yú)油會(huì)造成飼料中PUFA的減少,促進(jìn)大菱鲆幼魚(yú)肝臟臟脂肪過(guò)多沉積[30],油酸和亞油酸比長(zhǎng)鏈多不飽和脂肪酸顯著增加了大黃魚(yú)(Larmichthys crocea)肝臟和肌肉脂肪沉積[47]。然而在本實(shí)驗(yàn)中黃顙魚(yú)幼魚(yú)肝臟脂滴面積未受黑水虻蟲(chóng)油的影響。相反,Li等[5]發(fā)現(xiàn)隨著黑水虻蟲(chóng)油替代量的增加,幼建鯉腹腔脂肪組織的脂肪細(xì)胞變小,認(rèn)為這可能與黑水虻蟲(chóng)油內(nèi)含有大量中鏈脂肪酸有關(guān)。魚(yú)類(lèi)代謝脂肪酸的能力與很多因素有關(guān),比如魚(yú)的種類(lèi)、大小、生長(zhǎng)周期等都可能對(duì)研究結(jié)果造成一定影響。

4 結(jié)論

黑水虻蟲(chóng)油完全替代豆油對(duì)黃顙魚(yú)幼魚(yú)生長(zhǎng)性能、形體指標(biāo)、體成分、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)表觀消化率和抗氧化指標(biāo)無(wú)顯著影響,但提高了血清高密度脂蛋白膽固醇、抗炎和促炎因子含量,肝臟脂滴面積無(wú)顯著變化。以生長(zhǎng)性能為評(píng)價(jià)指標(biāo),當(dāng)黃顙魚(yú)幼魚(yú)基礎(chǔ)飼料中添加4%豆油時(shí),黑水虻蟲(chóng)油能夠完全替代豆油。