復(fù)方沙棘片的制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王小寧，楊黎彬，張存勞

（西安醫(yī)學(xué)院，陜西西安710021）

復(fù)方沙棘片的制備和質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王小寧，楊黎彬，張存勞

（西安醫(yī)學(xué)院，陜西西安710021）

優(yōu)化復(fù)方沙棘片的制備工藝和處方，研究制定復(fù)方沙棘片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。以顆粒性狀、片劑的外觀、硬度和崩解時限為指標(biāo)，確定最優(yōu)制備工藝和處方；采用薄層色譜鑒別法對復(fù)方沙棘片中總黃酮和原花青素進(jìn)行定性鑒別；采用紫外-可見分光光度法對有效成分總黃酮和原花青素進(jìn)行定量測定。結(jié)果表明，復(fù)方沙棘片的最優(yōu)處方和制備工藝為：以淀粉和糊精（2∶1）的混合物為稀釋劑，60%乙醇為黏合劑，0.5%硬脂酸鎂為潤滑劑，用16目篩濕法制粒，50℃下干燥60 min，整粒后壓片。薄層色譜鑒別法專屬性強(qiáng)，黃酮、原花青素的斑點清晰，紫外-可見分光光度法測定沙棘總黃酮和葡萄籽原花青素的線性范圍分別為：0.01 mg/mL～0.05 mg/mL（r＝0.999 0），0.01 mg/mL～0.05 mg/mL（r＝0.999 5），平均加樣回收率分別為 100.36%（RSD＝0.97%，n＝5）、98.53%（RSD＝2.66%，n＝5）。所制的復(fù)方沙棘片外觀好、硬度適中、崩解速度快，所建立的定性、定量分析方法簡便易行，準(zhǔn)確度高，能夠有效控制片劑的質(zhì)量。

沙棘；葡萄籽；原花青素；片劑；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

沙棘（Hippophae rhamnoides）為胡頹子科酸刺屬的灌木或小喬木，別名醋柳、黑刺、酸刺，我國主要分布在西北、華北、東北及西南等十多個省區(qū)。沙棘為藥食同源植物，它含有多種生理活性物質(zhì)，如 VC、VE、VA、胡蘿卜素、葉酸、氨基酸、蛋白質(zhì)、不飽和脂肪酸等，能提高人體免疫能力、抗腫瘤、有效防止冠心病和動脈粥樣硬化以及抗氧化抗衰老等，因此具有很好的營養(yǎng)保健和藥用價值[1-2]。原花青素（proanthocyanidins，PC）是天然植物中廣泛存在的一大類多酚類化合物的總稱，是目前為止所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)的抗氧化劑和自由基清除劑[3]。已有研究證實葡萄籽提取物中原花青素的含量豐富，因此目前對葡萄籽中原花色素的開發(fā)利用備受重視[4-5]。沙棘和原花青素因其較高的生物活性價值被認(rèn)可，但在開發(fā)保健藥品方面涉及的比較少。本實驗立足于沙棘提取物和葡萄籽提取物的保健功效，將其作為片劑主要成分，研究復(fù)方沙棘片劑的處方和制備工藝，并建立片劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為沙棘和原花青素的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與儀器

1.1 儀器

101-3-5型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：上海躍進(jìn)醫(yī)療器械廠；北洋YD-20型智能片劑硬度儀、ZB-1D型智能崩解儀：天津天大天發(fā)科技有限公司；KQ3200E型超聲波清洗器：昆山市超聲儀器有限公司；BS210S電子分析天平：北京賽多利斯天平有限公司；UV762紫外-可見分光光度計：上海佑科有限公司；方篩（12、16、100目）。

1.2 試劑

沙棘果粉、葡萄籽提取物：青?？灯盏律锟萍脊煞萦邢薰?；糊精（藥用級）、淀粉（藥用級）、硬脂酸鎂（藥用級）、滑石粉（藥用級）、微粉硅膠（藥用級）：智誠生物科技有限公司；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品（批號：MUST-13040302）、原花青素標(biāo)準(zhǔn)品（批號：MUST-13031802）：成都曼斯特生物科技有限公司。

2 方法與結(jié)果

2.1 處方篩選

2.1.1 稀釋劑的選擇

選擇淀粉與糊精不同配比的混合物作為稀釋劑，用60%的乙醇作為黏合劑制備軟材，16目篩制粒，在60℃的恒溫干燥箱中烘干，16目整粒，冷卻后稱重，加入總量0.5%的硬脂酸鎂，混勻送入壓片機(jī)壓片，考察制粒過程中的顆粒成型比及產(chǎn)品的光潔度、硬度、崩解度，結(jié)果見表1。

表1 不同稀釋劑對制粒及壓片的效果Table 1 The effect of different diluents on granulation and tablet

由表1可知，當(dāng)?shù)矸酆秃?∶1的比例混合時，顆粒成型性較好，片面光潔，硬度和崩解時限均符合要求。故選用這一配比固定稀釋劑來考察其他輔料對該壓片工藝的影響。

2.1.2 黏合劑的選擇

以淀粉和糊精（2∶1）的混合物作為稀釋劑，分別用水、30%乙醇、60%乙醇，30%PEG乙醇溶液作為黏合劑，16目篩制粒，烘干后，16目篩整粒，稱重后加入0.5%的硬脂酸鎂混勻后壓片，考察制得顆粒及壓片效果，結(jié)果見表2。

表2 不同黏合劑對制粒及壓片的效果Table 2 The effect of different adhesives on granulation and tablet

由表2可知，淀粉和糊精的混合物本身黏性不大，需要加入黏度較高的黏合劑；60%的乙醇溶液作為黏合劑，黏合效果最好，容易制粒，顆粒具有很好的可壓性，優(yōu)于其它3種黏合劑。

2.1.3 潤滑劑的選擇

以淀粉和糊精（2∶1）的混合物作為稀釋劑，60%的乙醇溶液作為黏合劑，16目篩制粒，16目篩整粒。稱重后分為3份，分別加入總量0.5%的硬脂酸鎂、滑石粉、微粉硅膠，混合均勻后分別壓片，考察壓片的效果。結(jié)果見表3。

表3 不同潤滑劑對制粒及壓片的效果Table 3 The effect of different lubricants on granulation and tablet

試驗結(jié)果表明滑石粉和微粉硅膠潤滑效果一般；硬脂酸鎂潤滑效果較好，片劑表面光滑。通過試驗對比，可以選擇0.5%硬脂酸鎂作為該沙棘復(fù)方片劑的潤滑劑。

2.2 制備工藝優(yōu)化

2.2.1 制粒粒徑的選擇

按選定處方制備軟材后分為2份，分別用14、16目篩制粒，50℃烘干60 min，分別用14、16目篩整粒。同時考察片劑的硬度、表面光潔度、崩解時限。實驗結(jié)果見表4。

由表4可知，各粒徑均較易制粒，16目篩制粒后，顆粒均勻性好，片劑表面光滑度較好，從整體效果考慮，16目篩制粒效果最佳。

表4 不同粒徑對制粒和壓片的效果Table 4 The effect of different size on granulation and tablet

2.2.2 烘干時間的選擇

按選定處方制粒，將制備的顆粒平均分為3份于恒溫干燥箱中50℃下干燥，分別在60、80、100 min時從干燥箱中取出，加入潤滑劑混勻后進(jìn)行壓片，檢查片劑的表面光潔度、硬度、崩解時限，結(jié)果見表5。

表5 不同烘干時間對制粒和壓片的效果Table 5 The effect of different drying time on granulation and tablet

由表5可知，當(dāng)干燥時間為100 min時，顆粒較硬，時間為60、80 min時，顆粒松散度較好且片劑光滑度較好，綜合片劑的硬度和崩解時限，將烘干時間選定在60 min。

2.2.3 烘干溫度的選擇

按選定的處方制粒，將制備的顆粒平均分為3份于恒溫干燥箱中，分別在40、50、60℃下干燥60 min后，從干燥箱中取出，加入潤滑劑混勻后進(jìn)行壓片，檢查片劑的表面光潔度、硬度、崩解時限，結(jié)果見表6。

表6 烘干溫度對制粒和壓片的效果Table 6 The effect of drying temperature on granulation and tablet

由表6可知，當(dāng)溫度在60℃時，片劑表面光潔度和硬度均較好。

綜上所述，通過單因素考察法確定最佳工藝為：制粒粒徑為16目、干燥時間為60 min、烘箱溫度為50℃。最佳處方為：稀釋劑為淀粉和糊精（2∶1）的混合物、黏合劑為60%乙醇、潤滑劑為0.5%硬脂酸鎂。

2.3 TLC鑒別

2.3.1 供試液、對照品溶液和陰性對照液的制備

取復(fù)方沙棘片劑6片，搗碎，取粗粉約2.0 g，精密稱定，將粉末置50 mL具塞錐形瓶中，加60%乙醇50 mL，超聲5 min，放冷，稱重，用60%乙醇補(bǔ)足減失重量，用干燥濾紙過濾，精密量取續(xù)濾液1 mL，作供試液。分別精密稱取蘆丁對照品5.0 mg，用60%乙醇制成濃度為0.1 mg/mL的蘆丁對照品溶液和原花青素對照品溶液。陰性對照液：模擬復(fù)方沙棘片的制備方法，不加沙棘和葡萄籽提取物制備片劑，用60%乙醇提取后作陰性對照液。

2.3.2 黃酮的TLC鑒別

照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）分別吸取對照品和樣品溶液3 μL，點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以v（甲苯）∶v（乙酸乙酯）∶v（甲酸）＝ 5∶2∶1 為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈（254 nm）下視檢，樣品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示出相同顏色的斑點。結(jié)果見圖1。

圖1 黃酮的薄層鑒別Fig.1 TLC chromatogram of Proanthocyanidins

2.3.3 原花青素的TLC鑒別

照薄層色譜法（中國藥典2010年版一部附錄ⅥB）分別吸取對照品和樣品溶液3 μL，點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以v（甲苯）∶v（丙酮）∶v（乙酸）＝ 3∶4∶1為展開劑，展開，展距 8 cm，取出，晾干，置紫外燈（254 nm）下視檢，樣品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯示出相同顏色的斑點，結(jié)果見圖2。

2.4 含量測定

2.4.1 最大吸收波長的確定

按2.4.2項下的方法分別對蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液顯色，在400 nm～700 nm波長處掃描，結(jié)果顯示蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品在510 m波長處有最大吸收，原花青素標(biāo)準(zhǔn)品在570 nm處有最大吸收。

圖2 原花青素的薄層鑒別Fig.2 TLC chromatogram of Proanthocyanidins

2.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

分別精密量取“2.3.1”項下的蘆丁對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 至 10 mL 容量瓶中，各加 60%乙醇溶液使成5 mL，精密加入5%NaNO2溶液0.3 mL，搖勻，靜置6 min，加入10%Al（NO3）30.3 mL，搖勻，靜置6 min；加入4%NaOH溶液4mL，搖勻，用60%乙醇定容至刻度，搖勻，靜置15 min顯色，于510 nm波長處測定其吸光度[6]。以吸光度A為縱坐標(biāo)，對照品濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程 A＝6.610 0C+0.017 7，r＝0.999 0，蘆丁的線性范圍為0.01 mg/mL～0.05 mg/mL。

分別精密量取“2.3.1”項下的原花青素對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 mL 于 10 mL 容量瓶中，加入1%香草醛溶液2.25 mL，8%鹽酸溶液1.75 mL，用甲醇定容至10 mL，搖勻，顯色20 min，于529 nm處測量吸光度值[7]。以吸光度A為縱坐標(biāo)，對照品濃度C（mg/mL）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程A＝14.880C+0.009 2，r＝0.999 5，原花青素的線性范圍為0.01 mg/mL～0.05 mg/mL。

2.4.3 精密度試驗

精密量取蘆丁對照品溶液，按照“2.4.2”項下的方法顯色，在510 nm處連續(xù)測定6次吸光度，其RSD為0.2%，精密量取1.0 mL原花青素對照品溶液，按照“2.4.2”項下的方法顯色，在529 nm處連續(xù)測定6次吸光度，RSD為0.1%。結(jié)果表明：該法儀器的精密度良好。

2.4.4 重復(fù)性試驗

取供試品溶液5份，按照“2.4.2”項下方法分別對總黃酮和原花青素成分顯色，測定吸光度，計算總黃酮成分的RSD為0.20%，原花青素成分的RSD為0.45%。結(jié)果表明：該方法重復(fù)性良好。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗

分別精密量取供試品溶液，按照“2.4.2”項下方法顯色后，分別于 0、1、4、8、12、24 h 測定其吸光度，計算總黃酮成分的RSD為2.38%（n＝5），原花青素成分的RSD為1.31%（n＝5）。結(jié)果表明：供試品溶液中的總黃酮和原花青素成分在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.6 加樣回收率試驗

分別精密量取已知含量的處方溶液各5份，每份1.0 mL，分別加入蘆丁對照品和原花青素對照品溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，按照“2.4.2”項下方法顯色，于510 nm波長下測定吸光度，計算其加樣回收率，結(jié)果表明：該法測定結(jié)果的準(zhǔn)確度較高。結(jié)果見表7。

表7 加樣回收率試驗結(jié)果（n=5）Table 7 Results of the sample recovery tests（n=5）

2.4.7 樣品測定

取三批復(fù)方沙棘片，按2.3.1項下方法制備供試液，按總黃酮和原花青素含量測定方法測定吸收度，計算總黃酮和原花青素的含量，結(jié)果見表8。

表8 樣品含量測定結(jié)果Table 8 Results of content determination in 3 batches of samples

3 討論

1）通過單因素考察法確定復(fù)方沙棘片的最佳制備工藝為：制粒粒徑為16目、干燥時間為60 min、烘干溫度為50℃。最優(yōu)處方為：稀釋劑為淀粉和糊精（2∶1）混合物、黏合劑為60%乙醇、潤滑劑為0.5%硬脂酸鎂。

2）本研究采用薄層色譜（TLC）法對復(fù)方沙棘片中的沙棘黃酮和原花青素進(jìn)行了定性鑒別，所采用的方法具有較強(qiáng)的專屬性，斑點清晰，分離效果好。

3）目前研究中沙棘的檢測方法常用的有：高效液相色譜法和紫外-可見分光光度法，但高效液相色譜法常用來測定單一成分，紫外法多用來測定總含量[8]。復(fù)方沙棘片中的總黃酮和原花青素的含量測定選用紫外-可見分光光度法，測定方法簡便、可行，其中原花青素的含量測定根據(jù)文獻(xiàn)報道采用改良后的方法，顯色時間較快，顯色穩(wěn)定性較好[9]。該含量測定方法既滿足了沙棘總黃酮和原花青素的含量測定要求又節(jié)約了試驗成本，達(dá)到了試驗預(yù)期的效果。

4）本研究所制備的復(fù)方沙棘片的保健效果及功效還有待考究，后期本課題組將對片劑功能性成分的釋放及對人體的保健效果進(jìn)行深入探索。沙棘和原花青素的藥理作用使其在食品、藥品以及化妝品領(lǐng)域均有廣闊的前景，值得進(jìn)一步研究。

[1] 劉勇,廉永善,王穎莉,等.沙棘的研究開發(fā)評述及其重要意義[J].中國中藥雜志,2014,39(9)：1547-1552

[2] 張郁松,羅倉學(xué).沙棘資源開發(fā)與沙棘黃酮提取[J].食品研究與開發(fā),2005,26(3)：46-47

[3] 張冰若,勞業(yè)興,蘇薇薇.原花青素的研究現(xiàn)狀及開發(fā)前景[J].中藥材,2003,26(12)：90-95

[4] 辛立波,李曉波,於洪建,等.葡萄籽低聚原花青素化學(xué)成分及抗氧化研究[J].食品研究與開發(fā),2012,33(8)：40-43

[5] 趙超英.葡萄籽提取物原花青素的營養(yǎng)保健功能[J].中國食品衛(wèi)生雜志,2000,12(6)：38-40

[6] 鄭京.沙棘葉中總黃酮的提取與測定[J].江蘇化工,2008,36(1)：36-38

[7] 樊金玲,陶冠軍,朱文學(xué).香草醛/硫酸比色法測定兩種原花色素含量的比較[J].食品科學(xué),2007,28(9)：467-472

[8] 陸敏,張紹巖,張文娜.高效液相色譜法測定沙棘汁中7種有機(jī)酸[J].食品科學(xué),2012,33(14)：235-237

[9] 李春陽,許時嬰,王璋.低濃度香草醛-鹽酸法測定葡萄籽、梗中原花青素含量的研究[J].食品工業(yè)科技,2004,25(6)：128-133

Study on Preparation and Quality Standard of Compound Sea Buckthorn Tablets

WANG Xiao-ning，YANG Li-bin，ZHANG Cun-lao

（Xi'an Medical University，Xi'an 710021，Shaanxi，China）

To optimize the preparation and prescription of tablets and study the quality standards of sea buckthorn tablets.Used mesh size，drying time and drying temperature as factors to determine the best preparation process，and used the different kinds of fillers，adhesives，lubricants as factors to optimize the prescription.The total flavonoids and proanthocyanidins were identified by TLC and determined by UV-visible spectrophotometry.Use a mixture of starch and dextrin （2 ∶1）as the filler，60%ethanol as binder and 0.5%magnesium stearate as lubricant.Granulate by 16 mesh sieve with 50℃as drying temperature and 60 min as drying time.The identification method was exclusive．The TLC sports were fairly clear.The determination of flavonoids and proanthocyanidins kept the good linear relation in the concentration ranges of 0.01 mg/mL～0.05 mg/mL（r＝0.999 0），0.01 mg/mL～0.05 mg/mL （r＝0.999 5）.The average recoveries of flavonoids and proanthocyanidins were 100.36%and 98.53%respectively.The compound sea buckthorn tablets have good appearance，hardness and disintegrate fast.The qualitative and quantitative analysis method is simple and accurate.It can effectively control the quality of the tablet.

hippophae rhamnoides；grape seeds；proanthocyanidins；tablet；quality standard

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.14.020

陜西省科技廳項目：沙棘抗氧化功能食品研發(fā)（2012k17-04-01）

王小寧（1987—），女（漢），講師，碩士，主要從事新藥研發(fā)。

2015-05-13