新疆石河子地區(qū)牛結(jié)核病檢測方法的比較研究

王宏偉，李新萍，李劼，史文軍，李留江，張孝恩，陳強斌

（1.第八師石河子畜牧獸醫(yī)工作站，石河子 832000；2.石河子大學(xué)，石河子 832000）

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種人和動物共患的一種慢性傳染病，我國將其列為二類動物疫病，主要有人型、牛型及禽型等，病原可在人、畜、禽之間相互傳播[1～3]。據(jù)資料報道，人的結(jié)核病有10%～15%以上是由牛分枝桿菌引起，因此，控制牛結(jié)核病是防控人類結(jié)核病的重要途徑之一。牛結(jié)核病防制的有效措施之一是根據(jù)每個牛場結(jié)核病發(fā)生的實際情況制定出適合本場的檢測防控方案，準(zhǔn)確及時地檢出結(jié)核病牛，并對檢出陽性牛按照《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行隔離-撲殺-無害化處理。

多年來石河子地區(qū)結(jié)核病嚴(yán)格按照《動物結(jié)核病診斷技術(shù)》(GB/T 18645-2002)要求，采用牛型提純結(jié)核菌素（PPD）皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行檢測，對檢測出的陽性牛進(jìn)行撲殺-無害化處理，有效控制了結(jié)核病的進(jìn)一步擴(kuò)散傳播，凈化了疾病。近年來要求在皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢測基礎(chǔ)上需對陽性牛隔離45d后進(jìn)一步進(jìn)行比較變態(tài)反應(yīng)，對比較變態(tài)反應(yīng)檢測出的牛型結(jié)核陽性牛，才能按照《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行隔離-撲殺-無害化處理。但由于受隔離條件的限制，在隔離期間病牛通過呼吸道、消化道等的排泄物，加大了對環(huán)境的污染，增加了牛群中健康牛感染結(jié)核桿菌的風(fēng)險，增大了防控難度，這在一定程度上影響了疾病的控制與凈化。采用經(jīng)濟(jì)實用有效的手段，實現(xiàn)疾病的快速準(zhǔn)確診斷并撲殺是防控結(jié)核病的關(guān)鍵，同時還可為決策部門防控結(jié)核病提供有效的數(shù)據(jù)資料。為此，筆者所在研究團(tuán)隊于2019年3～10月份對牛型PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢出的475頭陽性牛，隔離45d后使用牛型提純結(jié)核菌素、禽型提純結(jié)核菌素采用比較變態(tài)反應(yīng)方法進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示采用比較變態(tài)反應(yīng)方法對牛型提純結(jié)核菌素檢測出的475頭陽性牛進(jìn)行檢測，其中檢測出牛型結(jié)核陽性牛457頭，吻合率平均為96.21%；禽型結(jié)核11頭。在現(xiàn)有飼養(yǎng)條件下，石河子地區(qū)部分牛場沒有獨立的符合防疫條件的隔離圈地舍，用于隔離檢測陽性牛的圈舍無法與場內(nèi)檢測陰性牛完全隔開，致使陰性?？赡芡ㄟ^病牛呼吸道、消化道等的排泄物或直接接觸陽性牛增加了感染結(jié)核桿菌的風(fēng)險，增大了防控難度，造成了結(jié)核桿菌難以根除。為驗證這一結(jié)論，筆者在四個沒有建立符合防疫條件的獨立隔離圈舍的牛場分兩組做了對照試驗，第一組是單純采用牛型提純結(jié)核菌素對全場20日齡以上的牛全群檢測，檢測出的陽性牛按照《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行隔離-撲殺-無害化處理，全群剩余的牛間隔45d再次用牛型提純結(jié)核菌素檢測；第二組是對全場20日齡以上的牛全群先采用牛型提純結(jié)核菌素檢測，檢測出的陽性牛及可疑牛隔離45d再采用比較變態(tài)反應(yīng)檢測，比較變態(tài)反應(yīng)檢測確認(rèn)為牛型陽性牛按照《病死及病害動物無害化處理技術(shù)規(guī)范》進(jìn)行隔離-撲殺-無害化處理，結(jié)果顯示第一組間隔45d連續(xù)3次檢測時，至第四次檢測時新增陽性牛數(shù)量為4頭；第二組隔離45d檢測時陽性牛數(shù)量增加，新增陽性頭數(shù)為81頭。因此，對沒有建立符合防疫條件的獨立隔離圈地舍的場采用牛型提純結(jié)核菌檢測，通過增加檢測次數(shù)對檢測出的陽性牛進(jìn)行撲殺-無害化處理才能有效根除結(jié)核桿菌。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 結(jié)核菌素來源

牛型提純結(jié)核菌素（液體制品）購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所（批號：201701，規(guī)格：10mL/瓶，2萬IU/mL）；禽型提純結(jié)核菌素（凍干制品）購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所（批號：201601，規(guī)格：5mL/瓶，2.5萬IU/mL）。

1.1.2 器材

電動剪毛剪、1mL注射器、電子游標(biāo)卡尺、0.9%NaCl、75%酒精等。

1.1.3 供檢測牛場及供檢牛

石河子地區(qū)的10家規(guī)模牛場（編號分別為牛場一、牛場二、牛場三、牛場四、牛場五、牛場六、牛場A、牛場B、牛場C、牛場D），供檢牛型提純結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗檢測的陽性牛。

1.1.4 前期準(zhǔn)備

奶牛結(jié)核病通過牛型PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)方法檢測完成后，對檢出的陽性牛，要求奶牛場立刻采取隔離措施，加強消毒，減少外來因素的干擾，并記錄牛號，45d后用牛型提純結(jié)核菌素和禽型提純結(jié)核菌素進(jìn)行皮內(nèi)比較變態(tài)反應(yīng)試驗。

1.2 試驗方法

按照國家標(biāo)準(zhǔn)-動物結(jié)核病診斷技術(shù)（GB/T18645-2002）規(guī)定的操作方法及結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行。

2 結(jié)果

2.1 奶牛結(jié)核病比較變態(tài)反應(yīng)檢測結(jié)果

表1 奶牛結(jié)核病比較變態(tài)反應(yīng)檢測結(jié)果

從表1中牛型結(jié)核和禽型結(jié)核比較變態(tài)反應(yīng)檢測統(tǒng)計結(jié)果看，對采用牛型PPD頸部皮膚變態(tài)反應(yīng)檢測的475頭陽性牛，45d后用牛型和禽型結(jié)核分枝桿菌PPD進(jìn)行比較皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗，結(jié)果顯示：患有牛型結(jié)核病的457頭，符合率在93.18%～100%之間，平均96.21%。禽型結(jié)核牛11頭，陽性率在0～6.8%之間，平均2.32%。

2.2 單純采用牛型提純結(jié)核菌素與先采用牛型提純結(jié)核菌素再采用比較變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行確認(rèn)的檢測對比

石河子地區(qū)絕大多數(shù)的奶牛養(yǎng)殖場無符合防疫條件的獨立的隔離圈舍，大部分隔離圈舍是在本牛場原圈舍改造而成，無法將陽性牛與健康牛完全分開。針對這一實際情況項目組選擇了四個牛場分成兩組進(jìn)行了試驗，一組是對牛型PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢出的結(jié)核陽性牛隔離45d后使用牛型提純結(jié)核菌素、禽型提純結(jié)核菌素采用比較變態(tài)反應(yīng)方法進(jìn)行牛型與禽型確認(rèn)；另一組是只進(jìn)行牛型PPD檢測，檢出了陽性牛按照國家相關(guān)規(guī)定進(jìn)行撲殺無害化處理等措施，間隔45d再次用相同方法進(jìn)行檢測。試驗詳情如下：

表2 采用牛型提純結(jié)核菌素、禽型提純結(jié)核菌素比較變態(tài)反應(yīng)檢測結(jié)果

表3 采用單純牛型結(jié)核菌素皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)檢測結(jié)果

從表2、表3可以看出，采用單純牛型結(jié)核菌素對每次檢出的陽性牛按照國家相關(guān)規(guī)定進(jìn)行撲殺、無害化處理，間隔45d后再次檢測時新增陽性數(shù)明顯下降，而采用比較變態(tài)反應(yīng)檢測的場由于無獨立隔離圈舍不能將陽性牛與健康牛完全分開，間隔45d再次檢測時新增陽性數(shù)量明顯增加。

3 討論與分析

3.1 由于牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗具有便于野外作業(yè)、價格低廉、易于操作等優(yōu)點，是我國國家標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法之一，是當(dāng)前石河子地區(qū)區(qū)最常用的牛結(jié)核病診斷方法。此方法雖存在一些非特異性反應(yīng)，但在奶牛結(jié)核檢測中出現(xiàn)非特異性反應(yīng)情況十分復(fù)雜，如：由人型和禽型結(jié)核分枝桿菌引起、由副結(jié)核及其他分枝桿菌引起、奶牛生理性的（發(fā)情期、妊娠后期，其敏感性增高）、飼料配合不平衡，日糧中蛋白質(zhì)飼料過高，或過度飲食酸性飼料、臨床上使用激素、藥物制劑及接種某些疫苗、機體患有某些傳染病或寄生蟲病以及人為操作不當(dāng)?shù)鹊仍?。因此，在奶牛結(jié)核檢測中，在綜合考慮上述因素基礎(chǔ)上，不斷提高檢測人員的技術(shù)水平，在檢測過程中嚴(yán)格按照操作規(guī)程要求進(jìn)行，減少由非特異性因素及人為因素對檢測結(jié)果的影響從而確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確。

3.2 2019年筆者使用牛型提純結(jié)核菌素PPD和禽型結(jié)核菌素PPD試驗，對采用牛型提純結(jié)核菌素檢測出的475頭結(jié)核陽性牛進(jìn)一步采用比較變態(tài)反應(yīng)進(jìn)行檢測，結(jié)果顯示，采用比較變態(tài)反應(yīng)檢測出的牛結(jié)核與單純采用牛型提純結(jié)核菌素檢測的結(jié)果符合率在93.18%～100%之間，平均96.21%，感染禽型結(jié)核比例很低。

3.3 石河子地區(qū)絕大多數(shù)奶牛養(yǎng)殖場無符合條件的隔離圈舍，或者隔離圈舍的建設(shè)和改造不甚規(guī)范，在距離、位置設(shè)定等方面與標(biāo)準(zhǔn)要求有較大的差距，同時也不能做到人員、飼養(yǎng)工具設(shè)備完全隔離，此外新疆冬季時間較長，冬季封閉式管理， 都存在較大的風(fēng)險。

3.4 檢測診斷牛結(jié)核病的主要目的是及時檢出牛群中陽性牛，對其進(jìn)行撲殺并無害化處理，以凈化牛群、控制結(jié)核的傳播擴(kuò)散。根據(jù)筆者在石河子地區(qū)所做的大量實驗并對數(shù)據(jù)進(jìn)行科學(xué)分析后得出結(jié)論，單純使用牛型提純結(jié)核菌素檢測與采用比較變態(tài)反應(yīng)檢測結(jié)核兩種檢測方法檢出率差異不顯著。

為此建議，針對牛結(jié)核控制凈化的需要，應(yīng)依據(jù)本地的實際情況采用符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求的檢測方法，對檢出的陽性牛及時進(jìn)行撲殺并進(jìn)行無害化處理，縮短陽性牛在養(yǎng)殖場生活時間，對有效控制疾病的傳播至關(guān)重要。

4 結(jié)論

根據(jù)本研究團(tuán)隊所做的試驗結(jié)果及本地區(qū)奶牛場的實際情況，通過不斷提高檢測技術(shù)水平的基礎(chǔ)上，在符合國家標(biāo)準(zhǔn)要求的前提下，對結(jié)核病污染牛場按照《動物結(jié)核病診斷技術(shù)》(GB/T 18645-2002)要求，通過加大對牛群檢測頻次，采用牛型結(jié)核分枝桿菌PPD皮內(nèi)變態(tài)反應(yīng)試驗對牛場進(jìn)行結(jié)核病的檢測，并對檢測出的陽性牛嚴(yán)格按相關(guān)法律法規(guī)進(jìn)行隔離撲殺無害化處理，最大限度降低患病牛通過消化道、呼吸道等排泄物對環(huán)境的污染，降低與牛群中健康奶牛的接觸，牛結(jié)核陽性檢出率呈明顯下降 ，從而加快結(jié)核病控制凈化的步伐。將健康牛感染的風(fēng)險降至最低，實現(xiàn)公共衛(wèi)生安全。