水蓮石斛的組織培養(yǎng)與快速繁殖

莫遠(yuǎn)琪 李漢文 江南 鄭楓 房林 李琳 周依清 吳坤林 曾宋君

摘? 要：以水蓮石斛（DendrobiumHibiki）幼嫩假鱗莖為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)和快速繁殖研究。結(jié)果表明：利用75%乙醇結(jié)合0.1% HgCl₂，以及適宜程序進(jìn)行外植體消毒，成功率達(dá)92.50%;誘導(dǎo)腋芽的最適培養(yǎng)基為改良MS添加3.0 mg/L 6-BA和0.5 mg/L NAA，腋芽誘導(dǎo)率為91.90%;叢生芽增殖最適培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基添加5.0 mg/L 6-BA和0.5 mg/L NAA，平均增殖系數(shù)為2.77;生根壯苗最適培養(yǎng)基為1/2 MS+0.5 mg/L IBA+1.5 g/L活性炭+30 g/L蔗糖+100 g/L土豆泥，生根率100%，生根效果最好;體積比1∶1的植金石與椰殼混合基質(zhì)適合于移栽，移栽成活率為95.56%。

關(guān)鍵詞：水蓮石斛;假鱗莖;快速繁殖;移栽

中圖分類號：Q813.1+2?????文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

Tissue Culture and Rapid Propagation ofDendrobiumHibiki

MO Yuanqi^{1， 2}， LI Hanwen³， JIANG Nan³， ZHENG Feng²， FANG Lin²， LI Lin²， ZHOU Yiqing²， WU Kunlin²， ZENG Songjun^{2， 4*}

1. Institute of Crop Germplasm Resources， Guizhou Academy of Agricultural Sciences， Guiyang， Guizhou 550006， China; 2. Key Laboratory of South China Agricultural Plant Molecular Analysis and Gene Improvement， South China Botanical Garden， Chinese Academy of Sciences， Guangzhou， Guangdong 510650， China; 3. Dongguan Agricultural Science Research Center， Dongguan， Guangdong 523000， China; 4. Guangdong Provincial Key Laboratory of Applied Botany， South China Botanical Garden， Chinese Academy of Sciences， Guangzhou， Guangdong 510650， China

Abstract： The young pseudobulbs ofDendrobiumHibiki were taken as the explants for tissue culture and rapid propagation. The results showed that the success rate of explants disinfection reached 92.50% when treating the explants with proper disinfection methodsby 75% alcohol and 0.1% HgCl₂. The modified MS supplemented with 3 mg/L 6-BA and 0.5 mg/L NAA was the most suitable medium for axillary bud induction， in which the induction rate was 91.90%. MS supplemented with 5.0?mg/L 6-BA and 0.5 mg/L NAA was the most suitable medium for the multiplication of clustered shoots， in which the multiplication coefficient was 2.77. 1/2 MS supplemented with 0.5 mg/L IBA， 1.5 g/L activated carbon， 30 g/L sucrose and 100 g/L potato homogenate was the most suitable medium for the rooting and growth， the rooting rate was 100% and growth status of the plantlets was the best. On the mixture of Zhijing stone： coconut husk=1∶1 （V∶V）， the plantlets transplanted grew fastly and the survival percentage was 95.56%.

Keywords： Dendrobium Hibiki; pseudobulbs; proliferation; transplantion

DOI： 10.3969/j.issn.1000-2561.2020.06.016

石斛屬（Dendrobium）是蘭科中第2大屬，全球大約1500～1600個(gè)原生種，13 600多個(gè)雜交種^[1-4]。石斛屬原生種主要分布于東南亞的熱帶、亞熱帶以及大洋洲^[5]。水蓮石斛（DendrobiumHibiki）是以長苞石斛（D. bracteosum）為母本、雪山石斛（D. laevifolium）為父本雜交獲得的新品種。其株型較小、花型緊湊，冬天老莖上的葉片掉落，春天出新芽，葉片質(zhì)地稍硬，莖稈泛淺紫紅，花朵呈紫紅色，常盛開在老莖上，與葉片交相輝映，絢麗奪目，花期較長，一般可達(dá)40～50?d，且一年中可多次開花;同時(shí)，其易栽培且長速快，適合作為盆栽，是近年來我國花卉市場中較受歡迎的石斛新品種之一，因其花型和水蓮相近，在中國花卉市場上稱為水蓮石斛。我國花卉市場上的水蓮石斛多從中國臺灣引進(jìn)，價(jià)格昂貴。水蓮石斛可采用普通的分株和扦插繁殖，但繁殖周期較長，繁殖速度慢，且容易受到環(huán)境的影響;采用種子進(jìn)行無菌播種會發(fā)生性狀分離;只有采用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行優(yōu)質(zhì)種苗的快速繁殖，才能滿足市場需求。目前以假鱗莖為外植體，通過組織培養(yǎng)建立快速繁殖及種苗生產(chǎn)體系在石斛蘭雜交種中已廣泛應(yīng)用，但不同種類所需的最適培養(yǎng)基成分和培養(yǎng)條件存在較大差異^[6]。國內(nèi)外關(guān)于水蓮石斛的組織培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)尚未見報(bào)道。本研究以水蓮石斛的幼嫩假鱗莖為外植體進(jìn)行組織培養(yǎng)與快速繁殖研究，旨在建立其種苗快繁體系，以利于水蓮石斛的應(yīng)用和推廣，也為其他優(yōu)良石斛新品種的種苗生產(chǎn)提供參考。

1? 材料與方法

1.1材料

水蓮石斛母株（DendrobiumHibiki）（圖1A）由廣州華大錦蘭花卉有限公司提供，引種于中國臺灣，栽培于華南植物園科研區(qū)溫室內(nèi)（溫度15～32?℃，濕度50%～90%，常規(guī)管理），取幼嫩的假鱗莖為外植體（圖1B）用于組培實(shí)驗(yàn)。

1.2方法

1.2.1? 培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件? 根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪x擇不同的培養(yǎng)基，添加不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑，以MS^[7]、1/2MS（大量元素減半）或改良的MS培養(yǎng)基（包括MS的大量、微量和鐵鹽及B₅維生素：肌醇100?mg/L、煙酸4?mg/L、煙酸吡哆醇4?mg/L、鹽酸硫胺素40 mg/L）為基本培養(yǎng)基。培養(yǎng)室培養(yǎng)條件為光周期12?h/d，光照強(qiáng)度40～ 45?μmol/（m²·s），溫度（25±2）℃，培養(yǎng)周期45 d。

1.2.2 ?外植體的消毒? 在超凈工作臺上，去除假鱗莖多余葉片，用75%乙醇浸泡過的棉花擦拭3次后，于75%乙醇中浸泡30 s;無菌水沖洗3次后置于含有1滴吐溫的0.1% HgCl₂中浸泡6?min，再用無菌水沖洗3次;剝?nèi)デo段表面的假鱗片，再次用0.1% HgCl₂浸泡2?min，無菌水沖洗3次獲得消毒的外植體。

1.2.3? 不同培養(yǎng)基對腋芽誘導(dǎo)的影響? 分別取外植體的上、中、下3個(gè)節(jié)位，接種在MS+3?mg/L 6-BA，改良MS培養(yǎng)基及改良MS+6-BA（1.0、3.0、5.0、7.0?mg/L）上，每個(gè)處理10瓶，每瓶接入含一個(gè)節(jié)位的外植體，重復(fù)3次。休眠芽萌動的起始時(shí)間以芽體明顯變大為標(biāo)準(zhǔn)，腋芽誘導(dǎo)率=已誘導(dǎo)出芽的外植體數(shù)/接種的外植體總數(shù)×100%。

1.2.4? 叢生芽的增殖? MS+15%椰汁為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加0.5 mg/L NAA+6-BA（0、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0、8.0、10.0?mg/L）、TDZ（0.1、0.25、0.5、1.0 mg/L）、KT（0.5、1.0、2.0、3.0、5.0 mg/L）、2，4-D（1.0、2.0、3.0、4.0?mg/L）進(jìn)行叢生芽的增殖，以不添加任何植物生長調(diào)節(jié)劑為對照，每處理10瓶（10叢雙芽/瓶），重復(fù)3次。生長芽增殖倍數(shù)=新增芽數(shù)/接種數(shù)。

1.2.5? NAA和IBA對生根壯苗的影響? 1/2MS+ 15%椰汁為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加NAA（0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L）、IBA（0.5、1.0、1.5、2.0 mg/L），以不添加植物生長調(diào)節(jié)劑為對照。每處理10瓶，20株單芽/瓶，重復(fù)3次;實(shí)驗(yàn)結(jié)束后測量株高、葉片數(shù)、根數(shù)、根長、鮮重增量并評價(jià)其生長狀況。

1.2.6? 活性炭、蔗糖和其他有機(jī)添加物對生根壯苗的影響? 以1/2 MS+0.5 mg/L NAA+150 g/L土豆泥為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加活性炭（0.25、0.5、1.0、1.5 g/L），以不添加活性炭為對照;在蔗糖濃度實(shí)驗(yàn)中，在1/2 MS培養(yǎng)基中加入蔗糖（0、10、20、30、40 g/L），以不含土豆泥及蔗糖為對照。

以1/2?MS+0.5?mg/L NAA+30?g/L蔗糖+1.5?g/L活性炭為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加椰汁（5%、10%、15%、20%）、香蕉泥（50、100、150、200?g/L）、土豆泥（50、100、150、200 g/L）或蘋果泥（25、50、75、100 g/L）進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，以不添加有機(jī)添加物為對照。培養(yǎng)條件及測量方法同上。

1.2.7? 試管苗移栽? 選用蘭石、植金石（日本進(jìn)口）、泥炭土（德國進(jìn)口）、水苔、椰殼、松樹皮共6種基質(zhì)，設(shè)置單一基質(zhì)或不同配比的兩種復(fù)合基質(zhì)共30個(gè)處理（表7）。將生長健壯的幼苗（株高約3.5?cm，含4～5片葉，長勢大體一致）移栽到各基質(zhì)中，每個(gè)處理30盆（花盆內(nèi)徑10?cm，高9?cm，每盆盛裝基質(zhì)85%），每盆3株，培養(yǎng)于華南植物園溫室內(nèi)，2個(gè)月后觀測其生長狀況。

1.3數(shù)據(jù)處理

采用SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，采用Duncans法進(jìn)行多重比較。

2? 結(jié)果與分析

2.1外植體的消毒及腋芽的誘導(dǎo)

在消毒后接種的40個(gè)外植體，污染3個(gè)，污染率為7.5%，未污染的外植體均成活并誘導(dǎo)出腋芽，成功率92.5%。預(yù)備實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn)改良的MS培養(yǎng)基附加3.0?mg/L?6-BA適合于水蓮石斛腋芽的誘導(dǎo)和前期增殖（圖1B）。

以改良MS為基本培養(yǎng)基，測試了6-BA濃度對誘導(dǎo)不定芽及休眠芽起始萌動時(shí)間的影響。結(jié)果表明（表1）：1.0、3.0、5.0?mg/L的6-BA均能促進(jìn)腋芽的誘導(dǎo)，其中6-BA濃度為3.0?mg/L時(shí)誘導(dǎo)效果最好，對上段、中段、下段外植體腋芽的誘導(dǎo)率分別為24.07%、81.90%、91.90%，均顯著高于對照。當(dāng)6-BA濃度為7.0 mg/L時(shí)，與對照相比，有抑制作用。

從外植體的部位上分析，在供試的5種培養(yǎng)基上，均以假鱗莖下段為外植體的腋芽誘導(dǎo)率最高，中段次之，上段最低。從腋芽起始萌動時(shí)間上看，下段的腋芽起始萌動時(shí)間最短，為11～16?d;中段次之，為11～17?d;上段最長，為20～22?d。綜合分析腋芽的誘導(dǎo)率和起始萌動時(shí)間可知，水蓮石斛腋芽誘導(dǎo)的最適宜培養(yǎng)條件是以假鱗莖下段為外植體在改良MS+3.0 mg/L 6-BA培養(yǎng)基上進(jìn)行培養(yǎng)。

2.2叢生芽的增殖

在研究不同濃度植物生長調(diào)節(jié)劑NAA、6-BA、2，4-D、TDZ、KT對叢生芽增殖效率的影響時(shí)發(fā)現(xiàn)，在供試的5種植物生長調(diào)節(jié)劑中，除2，4-D對叢生芽增殖有抑制作用并引起外植體全部死亡外，其余4種均能促進(jìn)叢生芽增殖。

在一定的濃度范圍內(nèi)，NAA與6-BA配合使用效果顯著，當(dāng)NAA的濃度為0.5?mg/L時(shí)，在0.5～5.0 mg/L范圍內(nèi)隨著6-BA濃度的增加，不定芽增殖系數(shù)逐步增大，當(dāng)6-BA濃度為5.0?mg/L時(shí)增殖系數(shù)達(dá)最大值2.77，生長狀況良好，但與添加1.5、2.0、3.0 mg/L 6-BA的培養(yǎng)基無顯著性差異（圖1C）;當(dāng)6-BA濃度增加到8.0?mg/L及以上時(shí)，不定芽增殖系數(shù)下降（表2）。單獨(dú)添加TDZ及KT對其增殖效果不顯著，而且添加TDZ會導(dǎo)致母株基部畸形膨大。

2.3? NAA、IBA對生根的影響

在1/2 MS培養(yǎng)基上添加或不添加植物生長調(diào)節(jié)劑NAA、IBA，水蓮石斛均能生根，且生根率達(dá)100%，添加NAA、IBA對生根壯苗有顯著影響。與對照相比，在測試的0.5～2.0?mg/L濃度范圍內(nèi)，NAA、IBA均能刺激生根，植株根數(shù)顯著增加，根長縮短，但差異不顯著;其中以0.5?mg/L的NAA、2.0 mg/L的IBA處理根數(shù)最多，分別為5.57和5.63。NAA、IBA處理顯著降低株高和增加植株鮮重，表現(xiàn)出明顯的壯苗特征;在測試的0.5～2.0?mg/L濃度范圍內(nèi)，表現(xiàn)出隨NAA和IBA濃度升高植株株高降低、鮮重增加的趨勢（表3）。

NAA濃度等于或大于1.0?mg/L及IBA濃度等于或大于1.5?mg/L時(shí)，個(gè)別試管苗出現(xiàn)開花現(xiàn)象（圖1D）。綜合根數(shù)、根長、株高、鮮重等參數(shù)，0.5?mg/L IBA最適用于水蓮石斛的生根壯苗（表3）。

2.4活性炭、蔗糖和其他有機(jī)添加物對生根壯苗的影響

在以1/2 MS+0.5 mg/L NAA+150 g/L土豆泥為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加不同濃度（0.25、0.50、1.00、1.50?g/L）活性炭的培養(yǎng)基上，從植株長勢來看，添加活性炭的植株生長狀況均優(yōu)于對照;隨著活性炭濃度的增加，株高、葉片數(shù)、根長逐漸增加，但根數(shù)和鮮重增量顯著下降，1.50?g/L活性炭對水蓮石斛生長促進(jìn)作用最佳（表4）。

在1/2 MS培養(yǎng)基中加入不同濃度（0、10、20、30、40 g/L）蔗糖，以不含土豆泥及蔗糖為對照的實(shí)驗(yàn)中，添加蔗糖對生根壯苗促進(jìn)效果顯著，在不添加蔗糖，添加或不添加150?g/L土豆泥的培養(yǎng)基上，生根率分別為77.74%和72.22%，均顯著低于添加蔗糖的培養(yǎng)基，生長狀況均優(yōu)于不加蔗糖的對照，因此，在生根培養(yǎng)基中必須添加蔗糖;在分別添加10、20、30?g/L蔗糖時(shí)，株高與對照無差異，但葉片數(shù)、根數(shù)、鮮重增量均顯著高于對照，而添加40?g/L蔗糖時(shí)，株高顯著低于對照和其他處理，對生根壯苗具有抑制作用。綜合上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在培養(yǎng)基中添加30?g/L蔗糖對水蓮石斛的生根壯苗效果最好（表5）。

以1/2?MS+0.5?mg/L NAA+30?g/L蔗糖+1.5?g/L活性炭為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加不同濃度的有機(jī)添加物對水蓮石斛生根壯苗有顯著影響。由于培養(yǎng)基中加入了30?g/L蔗糖，生根率均為100%（數(shù)據(jù)在表6中沒有顯示）。從表6可看出，與對照相比，添加50、75、100?g/L蘋果泥，150、200?g/L香蕉泥，以及200?g/L土豆泥對植株生長有抑制作用，不適于水蓮石斛生根壯苗。添加不同濃度的椰汁時(shí)，株高均不同程度降低，葉片數(shù)變化不顯著，根長顯著增加;當(dāng)添加5%、10%濃度椰汁時(shí)根數(shù)顯著增加，但鮮重增量減少，而20%濃度時(shí)鮮重增量顯著。添加50、100?g/L香蕉泥時(shí)，株高顯著降低、葉片數(shù)稍少，根數(shù)和根長、鮮重增量顯著增加。添加50、100、150?g/L土豆泥，植株株高、根長顯著增加，葉片數(shù)、根數(shù)變化不顯著，添加100?g/L土豆泥時(shí)鮮重增量顯著。綜合考慮各參數(shù)，添加15%、20%的椰汁、100 g/L香蕉泥或100?g/L土豆泥對生根壯苗促進(jìn)效果較好，其中添加100 g/L土豆泥效果最佳（圖1E），適用于水蓮石斛的生根壯苗培養(yǎng)。

2.5試管苗的移栽

表7顯示，在供試的6種單一基質(zhì)中，試管苗的移栽成活率在62.23%～83.34%之間，松樹皮的最低，泥炭土的最高;從生長狀況看，葉寬增加的葉片數(shù)比例在17.78%～53.33%，以椰殼為基質(zhì)時(shí)最低，以泥炭土和蘭石的最高;從葉片光澤度看，以泥炭土為基質(zhì)時(shí)的光澤度最好。綜合以上參數(shù)，泥炭土是最適于水蓮石斛試管苗移栽的單一基質(zhì)。在實(shí)驗(yàn)的24個(gè)復(fù)合基質(zhì)中，試管苗的移栽成活率在48.89%～100%之間（表7），泥炭土∶松樹皮=1∶1的存活率最高，為100%，其次分別為植金石∶椰殼=1∶1（成活率95.56%）和植金石∶泥炭土=1∶1（成活率95.55%）。從生長狀況看，葉寬增加的葉片數(shù)比例最高的是植金石∶泥炭土=1∶1（66.67%的葉寬增加），其次依次為泥炭土∶松樹皮=1∶1（64.44%的葉寬增加），植金石∶泥炭土=1∶2（48.89%的葉寬增加）;從葉片光澤度上看，表現(xiàn)最好的前3種基質(zhì)分別為植金石∶椰殼=1∶1，植金石∶泥炭土=1∶1和泥炭土∶松樹皮=1∶1。綜合以上參數(shù)，適于水蓮石斛試管苗移栽的復(fù)合基質(zhì)為：泥炭土∶松樹皮= 1∶1、植金石∶泥炭土=1∶1（圖1F）及植金石∶椰殼=1∶1。

3? 討論

3.1不同基本培養(yǎng)基對水蓮石斛腋芽生長的影響

石斛組織培養(yǎng)常用基本培養(yǎng)基有MS、1/2MS、2MS、KC^[8]、1/2KC、VW、B₅^[9]、N₆^[10]、Phytotechnology、Mitra、改良RM^[11]等，其中，使用較多的是MS（67%）、1/2MS、KC、VW^[6]。本研究結(jié)果顯示，改良MS培養(yǎng)基（含有B₅培養(yǎng)基維生素，維生素含量較高）比MS培養(yǎng)基更適于水蓮石斛腋芽的誘導(dǎo)。

組織培養(yǎng)中添加硫胺素（VB₁），煙酸（VB₃）及煙酸吡哆醇（VB₆）、氨基酸等有益于細(xì)胞生長^[12]。比較多種培養(yǎng)基對石斛芽誘導(dǎo)及增殖時(shí)，周俊輝等^[13]、楊聯(lián)河等^[14]、劉驊等^[15]等均發(fā)現(xiàn)B₅優(yōu)于其他基本培養(yǎng)基。周華偉等^[16]也報(bào)道2.0?mg/L煙酸能促進(jìn)石斛蘭試管苗的生長。在以水蓮石斛假鱗莖為外植體誘導(dǎo)腋芽時(shí)，由于改良MS培養(yǎng)基中維生素的含量遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于MS培養(yǎng)基中的量，所以在添加同一植物生長調(diào)節(jié)劑的條件下，高維生素含量的改良MS培養(yǎng)基比MS培養(yǎng)基在腋芽的誘導(dǎo)速率上有明顯優(yōu)勢，說明維生素對叢生芽的誘導(dǎo)有促進(jìn)作用，本研究結(jié)果與周華偉等^[16]在石斛蘭組織培養(yǎng)中的結(jié)果相似。

3.2不同植物生長調(diào)節(jié)劑對水蓮石斛增殖、生根的影響

傅玉蘭等^[17]發(fā)現(xiàn)3.0 mg/L KT、0.2 mg/L 2，4-D能促進(jìn)霍山石斛試管苗生長和繼代增殖。石蘭英等^[18]在含1.0 mg/L 6-BA及0.1 mg/L NAA的MS培養(yǎng)基中添加較低濃度的TDZ能使石斛蘭幼芽基部膨大并分化成芽。水蓮石斛叢生芽增殖過程中加入不同濃度的TDZ會導(dǎo)致水蓮石斛植株畸形，而在培養(yǎng)基加入1.0～4.0 mg/L 2，4-D時(shí)，外植體全部死亡，說明不同種類的石斛對植物生長調(diào)節(jié)劑的要求存在差異。在培養(yǎng)基中加入2，4-D時(shí)導(dǎo)致植株死亡，可能是由于2，4-D雖具有激素活性，但也具毒性^[19]，其氯代謝中間產(chǎn)物可使植物突變或生長畸形^[20]，本研究結(jié)果與盧文蕓^[21]的報(bào)道相似。

生長素用于誘導(dǎo)細(xì)胞的分裂和分化，但若使用濃度過高則會產(chǎn)生乙烯而導(dǎo)致抑制效果^[13]。杜啟蘭^[22]報(bào)道，石斛蘭增殖培養(yǎng)適宜的6-BA和NAA濃度均為0.5 mg/L，根誘導(dǎo)以1.0～2.0?mg/L IAA較好。石瑋等^[23]在研究0.2～2.0 mg/L NAA以及0.1～1.5?mg/L IBA對霍山石斛試管苗生根影響時(shí)發(fā)現(xiàn)二者具有相同的效應(yīng)，低濃度的生長素促進(jìn)生根，高濃度則抑制生根及苗的發(fā)育，0.2?mg/L NAA或0.1 mg/L IBA有利于霍山石斛生根。本研究表明，在不添加任何植物生長調(diào)節(jié)劑的1/2 MS基本培養(yǎng)基中，水蓮石斛能正常生根，添加一定濃度的生長調(diào)節(jié)劑后其根數(shù)增多，但株高及葉片數(shù)在一定程度上降低，其伸長生長受到抑制，推測水蓮石斛在生根培養(yǎng)時(shí)，幼芽中可能具有較高濃度的內(nèi)源激素所引起，這個(gè)結(jié)論與黃肇宇等^[24]、石瑋等^[23]的報(bào)道一致。

高磷低氮能夠刺激蘭花試管開花^[25-26]，馮瑩^[27]在單莖型雜種蘭花花芽誘導(dǎo)和發(fā)育的研究中發(fā)現(xiàn)添加6-BA可促使石斛蘭的花芽發(fā)育成熟并開花，Sim等^[28-29]也發(fā)現(xiàn)相似的研究結(jié)果。水蓮石斛生根過程中，以MS為基本培養(yǎng)基添加15%椰汁、0.5 mg/L NAA以及不同濃度6-BA，隨著6-BA濃度的增加，少量植株有試管內(nèi)開花現(xiàn)象。推測水蓮石斛的試管開花可能與培養(yǎng)基的高磷低氮以及添加6-BA和椰子汁有關(guān)，此結(jié)果與李璐^[30]的報(bào)道一致，但有關(guān)水蓮石斛的試管開花機(jī)制有待深入研究。

3.3活性炭及不同有機(jī)添加物對水蓮石斛壯苗的影響

培養(yǎng)基中富含氨基酸、植物生長調(diào)節(jié)劑和維生素的天然復(fù)合物可促進(jìn)愈傷組織和器官的生長。在石斛屬的組織培養(yǎng)中，已報(bào)道的有機(jī)添加物有椰子汁、香蕉泥、土豆泥、蘋果泥、西瓜汁、白蘿卜汁、殼聚糖、極可善、海藻等^[31-33]。本研究試驗(yàn)了椰汁、蘋果泥、香蕉泥、土豆泥的壯苗效果，結(jié)果表明以1/2 MS為培養(yǎng)基時(shí)，添加100?g/L土豆泥適用于水蓮石斛的生根壯苗培養(yǎng)。

活性炭具有吸附作用，在植物組織培養(yǎng)中，添加一定量的活性炭可吸附植物分泌的有害物質(zhì)，以解決培養(yǎng)過程中的褐化問題，但由于活性炭對物質(zhì)的選擇性不高，吸附有害物質(zhì)的同時(shí)也能吸附某些植物生長必需的營養(yǎng)成分，包括植物生長調(diào)節(jié)劑，因此，活性炭的添加量因植物種類而異^[34-35]。本研究發(fā)現(xiàn)添加1.5 g/L活性炭對水蓮石斛的生根壯苗促進(jìn)效果最佳。

3.4水蓮石斛移栽過程中基質(zhì)的選擇

水蓮石斛的生長勢較弱，采用單一基質(zhì)時(shí)，移栽成活率較低，因此本研究進(jìn)行了大量的移栽基質(zhì)實(shí)驗(yàn)。研究的6種單一基質(zhì)各有特點(diǎn)，植金石、蘭石持水性透氣性好，但營養(yǎng)成分較低;水苔持水能力、透氣性較好，但容重不足;椰殼保水性好，但其鹽分過高，浸泡后具有較高的電導(dǎo)率，對植物根系傷害較大且不利于作物對營養(yǎng)成分的吸收;松樹皮透氣性好但持水性不高;進(jìn)口泥炭土營養(yǎng)成分及保水能力較高，但價(jià)格較為昂貴且通氣性較差，栽培過程中較難管理。本研究中采用松樹皮移栽成活率較低的原因可能與其持水性較差有關(guān)，其他基質(zhì)也存在著一些缺點(diǎn)。根據(jù)各種基質(zhì)的優(yōu)缺點(diǎn)，將單一組合成混合基質(zhì)能有效地解決這些問題，結(jié)合移栽后植株生長狀況來看，泥炭土∶松樹皮=1∶1，植金石∶泥炭土=1∶1，植金石∶椰殼=1∶1較佳，這些混合基質(zhì)既有較好的保水性，又具有較好的透水性。綜合考慮種植成本，市場上植金石單價(jià)10元/L，德國進(jìn)口泥炭土單價(jià)1.5元/L，椰殼單價(jià)0.5元/L，松樹皮單價(jià)0.4元/L。因此，基質(zhì)植金石∶泥炭土=1∶1和基質(zhì)植金石∶椰殼=1∶1兩種混合基質(zhì)，盡管移栽成活率較高，但由于植金石較貴，適用于少量水蓮石斛盆栽，而泥炭土∶松樹皮= 1∶1成本較低，成活率高，適用于大規(guī)模的商業(yè)化生產(chǎn)。

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