丹參酮ⅡA對ApoE-/-小鼠肝臟脂質(zhì)沉積及鐵死亡相關(guān)蛋白表達的影響*

吳 瑤， 宋 囡， 賈連群， 王 杰， 陳 絲， 曹慧敏

（遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥創(chuàng)新工程技術(shù)中心，遼寧沈陽110847）

動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）是心腦血管疾病前期的主要病理基礎(chǔ)，其基本病理改變皆因脂質(zhì)代謝障礙或轉(zhuǎn)運異常所引起。脂質(zhì)代謝異常造成的脂類物質(zhì)沉積于肝細(xì)胞內(nèi)是導(dǎo)致AS 發(fā)生的重要危險因素之一，同時肝臟生產(chǎn)了各種炎癥因子來調(diào)控全身的炎癥反應(yīng)，而AS 的發(fā)生與發(fā)展過程又與很多炎細(xì)胞及炎癥因子參與密切相關(guān)。因此，肝臟是AS 及其相關(guān)疾病啟動和發(fā)展中最易受損的器官之一，肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積以及膽固等流出障礙等亦成為AS 形成與發(fā)展的重要因素。研究發(fā)現(xiàn)，鐵死亡（ferroptosis）是一種區(qū)別于細(xì)胞凋亡、自噬及焦亡的全新細(xì)胞死亡方式，其主要特點是鐵離子大量沉積而致活性氧簇（reactive oxygen species，ROS）大量產(chǎn)生，氧化應(yīng)激激活狀態(tài)下的脂質(zhì)過氧化反應(yīng)致使細(xì)胞大量死亡［1］。目前，鐵死亡在缺血再灌注損傷、動脈粥樣硬化、腫瘤、神經(jīng)系統(tǒng)疾病等疾病中均發(fā)揮重要作用［2］。

丹參酮ⅡA（tanshinone ⅡA）來源于我國的傳統(tǒng)中藥丹參，具有抑制炎癥反應(yīng)、抗動脈粥樣硬化、降低氧化應(yīng)激損傷、減少肝臟脂質(zhì)沉積等作用［3-5］。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA 通過降低ROS 和丙二醛（malondialdehyde，MDA）的產(chǎn)生、增強總超氧化物歧化酶（total superoxide dismutase，T-SOD）和谷胱甘肽過氧化物酶（glutathione peroxidase，GSH-Px）的活性來減輕氧化應(yīng)激，從而抑制肝細(xì)胞凋亡，減輕肝臟脂肪變性［6］。那么丹參酮ⅡA 抑制肝臟脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)生且保護肝臟細(xì)胞免受ROS損傷的作用有可能是通過拮抗肝細(xì)胞發(fā)生鐵死亡實現(xiàn)的。因此，本研究以載脂蛋白E 基因敲除（apolipoprotein E gene knockout，ApoE-/-）小鼠為 AS 動物模型，以細(xì)胞鐵死亡為切入點，探討丹參酮ⅡA 對ApoE-/-小鼠肝臟脂質(zhì)沉積的影響及作用機制，為中醫(yī)藥的臨床應(yīng)用提供科學(xué)實驗依據(jù)。

材 料 和 方 法

1 動物

實驗所用ApoE-/-小鼠和C57BL/6J品系小鼠均為雄性，8周齡，體質(zhì)量（20±2）g，均購自北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司，許可證號為SCXK（京）2012-0001。動物飼養(yǎng)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心，SPF 級，自由飲食飲水，環(huán)境溫度為（22±1）℃，濕度50%±5%。

2 主要藥品、試劑及儀器

丹參酮ⅡA 購自上海源葉生物科技有限公司（貨號S31459，純度≥95%）；辛伐他汀（浙江海正藥業(yè)股份有限公司）。總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（lowdensity lipoprotein cholesterol，LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDLC）測定試劑盒（上?？迫A生物技術(shù)有限公司）；還原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）檢測試劑盒購自南京建成生物工程研究所有限公司；ROS 檢測試劑盒、I抗稀釋液和HE 染色液購自碧云天生物科技有限公司；抗鐵蛋白重鏈1（ferritin heavy chain 1，F(xiàn)TH1）、谷胱甘肽過氧化物酶4（glutathione peroxidase 4，GPX4）、p53 和 xCT/SLC7A11 抗 體 購 于 ABclonal Technology。Tanon 5200 化學(xué)發(fā)光成像系統(tǒng)（上海天能科技有限公司）；7180 型全自動生化分析儀（Hitachi High-Tech）；BOND-MAX 全自動免疫組化染色機（Leica Biosystems）。

3 主要方法

3.1 模型制備、分組及干預(yù) 將32 只ApoE-/-小鼠隨機分為 4 組:模型（model）組、丹參酮ⅡA 高劑量（high-dose tanshinone ⅡA）組、丹參酮ⅡA 低劑量（low-dose tanshinone ⅡA）組及辛伐他?。╯imastatin）組，每組8只。8只C57BL/6J小鼠作為正常對照（normal control）組。正常對照組每日給予基礎(chǔ)飼料。動脈粥樣硬化模型制備采用ApoE-/-小鼠給予高脂飼料喂飼，每日給予高脂飼料（含0.15%膽固醇和21%脂肪）喂飼8 周。造模8 周后灌胃給藥，給藥劑量按人與動物體表面積折算系數(shù)進行換算，丹參酮ⅡA高劑量組、丹參酮ⅡA 低劑量組及辛伐他汀組分別采用60 mg·kg-1·d-1丹參酮ⅡA、30 mg·kg-1·d-1丹參酮ⅡA 和 2.275 mg·kg-1·d-1辛伐他汀灌胃 4 周，正常對照組與模型組給予等體積生理鹽水灌胃4周。

3.2 血脂檢測 小鼠取材前12 h 內(nèi)禁食不禁水，取材當(dāng)天稱重，10%水合氯醛麻醉，摘除眼球取血，室溫靜置后，3 500 r/min 離心25 min，-20℃保存待用。全自動生化分析儀檢測小鼠血清TC、TG、LDL-C和HDL-C的含量。

3.3 HE 染色觀察肝組織的病理形態(tài) 將小鼠肝組織固定于4%多聚甲醛72 h，按HE 染色常規(guī)方法進行，70%～100%梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、切片（切片厚度5 μm）、貼片及烤片后，二甲苯脫蠟，70%～100%梯度乙醇復(fù)水，蘇木精染色，70%鹽酸乙醇分色，伊紅復(fù)染，再用70%～100%梯度乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片，石蠟包埋，光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織形態(tài)。

3.4 油紅O 染色觀察肝臟脂質(zhì)沉積 取各組肝臟依次放入15%和30%蔗糖中脫水，包埋做成冰凍切片，油紅O 染色10 min，75%乙醇分化2 s，蘇木素復(fù)染2 min，流水沖洗返藍，甘油明膠封片。

3.5 各組小鼠肝組織ROS 和GSH 含量的檢測 取0.1 g 的小鼠肝組織研磨成組織勻漿液，用預(yù)冷PBS將其50 倍稀釋待用。將100 μL 的待測樣品稀釋液與0.2 μmol/L 的DCFH-DA 熒光染料等體積混合均勻后，37℃恒溫箱避光孵育15 min。用酶標(biāo)儀在激發(fā)波長499 nm 和發(fā)射波長525 nm 下檢測吸光度（A）。分光光度法檢測肝組織中GSH表達。上述檢測均按試劑盒說明書操作。

3.6 全自動免疫組化一體機檢測小鼠肝臟p53 和GPX4 蛋白的表達 將小鼠肝臟進行石蠟包埋后，以5μm 厚連續(xù)切片5 張并標(biāo)記序號，全自動免疫組化機中將切片分別進行p53 和GPX4 免疫組織化學(xué)染色，將染色后的標(biāo)本進行脫水、封片，在光學(xué)顯微鏡下觀察并采集圖像，各組標(biāo)本圖像運用Image-Pro Plus 6.0圖像分析軟件計算平均吸光度。

3.7 Wes 全自動蛋白質(zhì)印跡定量分析系統(tǒng)檢測GPX4、xCT、p53及FTH1蛋白的表達 不同樣品上樣量均為4.5 μL（包括5× Master Mix 0.9 μL，待檢樣品與0.1× Sample Buffer合為3.6 μL），95℃、5 min變性。樣品制備完全，按照樣品、封閉液、I 抗、II 抗、發(fā)光液及清洗緩沖液的順序分別加入板內(nèi)，機器自檢后分別放入毛細(xì)管芯及板子，設(shè)計板子布局，開始檢測，150 min完成檢測，進行結(jié)果分析。

3.8 RT-qPCR 法檢測肝組織相關(guān)mRNA 的表達水平 取20 mg 肝組織，采用離心柱法提取總RNA，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進行操作，測定濃度，將樣本總RNA濃度稀釋為200 mg/L后反轉(zhuǎn)錄為cDNA，加入擴增反應(yīng)體系運用RT-qPCR 法擴增，40 個循環(huán)結(jié)束后采用2-ΔΔCt法進行相對定量分析，檢測基因mRNA 相對表達水平。引物由武漢金開瑞生物工程有限公司合成，序列見表1。

表1 RT-qPCR相關(guān)引物的序列Table 1.The sequences of the primers for RT-qPCR

4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 19.0 軟件進行統(tǒng)計分析。實驗數(shù)據(jù)均為計量資料，用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD）表示。多組之間比較采用單因素方差分析。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié) 果

1 各組小鼠血脂水平比較

與正常對照組相比，模型組小鼠血清中TG、TC和LDL-C 水平顯著升高（P＜0.01），HDL-C 水平無顯著變化；與模型組相比，辛伐他汀組、丹參酮ⅡA 低劑量組及丹參酮ⅡA 高劑量組小鼠血清中TG、TC 和LDL-C水平顯著降低，并且丹參酮ⅡA高劑量組和辛伐他汀組效果優(yōu)于丹參酮ⅡA 低劑量組（P＜0.05 或P＜0.01），各組間HDL-C 水平的差異無統(tǒng)計學(xué)顯著性（P＞0.05），見表2。

表2 各組小鼠血清TG、TC、LDL-C和HDL-C含量的比較Table 2.Comparison of the serum lipid levels in the mice from each group（mmol/L.Mean±SD. n=8）

2 各組小鼠肝臟病理學(xué)變化

正常對照組肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞為圓形，細(xì)胞核居中，胞漿內(nèi)未見脂滴，排列方式為條索狀且肝竇不狹窄；模型組肝細(xì)胞體積變大，胞漿內(nèi)可見大量的脂肪空泡，且大小不等，肝竇狹窄或消失；辛伐他汀組脂滴明顯減少，其病理改變較模型組明顯減輕，可見到正常的肝細(xì)胞，肝竇狹窄程度有所減輕；丹參酮ⅡA 高劑量組恢復(fù)程度與辛伐他汀組類似，肝細(xì)胞脂肪變性程度減輕，脂肪空泡明顯減少，肝竇狹窄有所減輕；丹參酮ⅡA 低劑量組較模型組相比，病理改變有所減輕，肝細(xì)胞形態(tài)變小，胞漿內(nèi)脂滴減少，但其治療效果不如辛伐他汀組和丹參酮ⅡA 高劑量組，見圖1。

Figure 1.Morphological characteristics of liver tissues in all groups（HE staining，×400）.A:normal control group；B:model group；C:simvastatin group；D:low-dose tanshinoneⅡA group；E:high-dose tanshinone ⅡA group.圖1 HE染色觀察各組肝組織的形態(tài)學(xué)特點

3 油紅O染色結(jié)果

正常對照組小鼠肝臟細(xì)胞排列規(guī)整，肝細(xì)胞內(nèi)未見橘紅色脂滴，細(xì)胞核為藍色，肝竇結(jié)構(gòu)正常；模型組小鼠肝臟細(xì)胞腫脹明顯，肝細(xì)胞間隙變寬，視野出現(xiàn)彌漫性橘紅色脂滴，細(xì)胞核大小不等，脂質(zhì)蓄積程度明顯加重；辛伐他汀組和丹參酮ⅡA 高劑量組肝臟細(xì)胞內(nèi)橘紅色脂滴顯著減少，細(xì)胞核明顯變小，肝竇結(jié)構(gòu)有所恢復(fù)或恢復(fù)正常，脂質(zhì)蓄積程度顯著減輕；丹參酮ⅡA 低劑量組肝臟細(xì)胞內(nèi)橘紅色脂滴有所減輕，但相鄰肝細(xì)胞內(nèi)脂滴有融合現(xiàn)象，脂質(zhì)蓄積減輕效果不如辛伐他汀組和丹參酮ⅡA 高劑量組，見圖2。

Figure 2.Oil red O staining of liver tissues in all groups（×400）.A:normal control group；B:model group；C:simvastatin group；D:low-dose tanshinone ⅡA group；E:high-dose tanshinone ⅡA group.圖2 油紅O染色觀察各組肝組織脂質(zhì)沉積情況

4 各組小鼠肝組織ROS和GSH含量的比較

與正常對照組相比，模型組小鼠肝組織ROS 含量顯著增高（P＜0.01），GSH 含量顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，辛伐他汀組、丹參酮ⅡA 低劑量組及丹參酮ⅡA 高劑量組小鼠肝組織ROS 含量顯著降低（P＜0.01），GSH 含量顯著升高（P＜0.01）；丹參酮ⅡA 高劑量組的作用效果較丹參酮ⅡA 低劑量組更顯著（P＜0.01），見表3。

表3 各組小鼠肝組織ROS和GSH含量的變化Table 3.The contents of ROS and GSH in the liver tissues of mice in all group（Mean±SD. n=3）

5 免疫組化結(jié)果

與正常對照組相比，模型組小鼠肝組織p53 蛋白陽性表達呈現(xiàn)棕黃色顆粒狀，染色較深，數(shù)量較多，排列密集，肝細(xì)胞核被染成藍色，統(tǒng)計結(jié)果表明p53 蛋白陽性表達顯著升高（P＜0.01）；與模型組相比，辛伐他汀組及丹參酮ⅡA 高、低劑量組小鼠肝組織棕黃色較淡，密度下降，排列稀疏，p53蛋白陽性表達顯著下降（P＜0.01）；丹參酮ⅡA 高劑量組治療效果優(yōu)于丹參酮ⅡA低劑量組（P＜0.01），見圖3。

Figure 3.p53 expression in the liver tissues of mice in each group（×400）.A:normal control group；B:model group；C:simvastatin group；D:low-dose tanshinone ⅡA group；E:high-dose tanshinone ⅡA group.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs normal control group；▲▲P＜0.01 vs model group；△△P＜0.01 vs low-dose tanshinone ⅡA group.圖3 各組小鼠肝組織中p53的表達情況

正常對照組中GPX4 蛋白陽性免疫產(chǎn)物呈現(xiàn)棕黃色顆粒狀或點狀標(biāo)記，數(shù)量較多，染色較深，排列密集，細(xì)胞核被染成藍色；與正常對照組相比，模型組小鼠肝組織GPX4 蛋白陽性表達顯著降低（P＜0.01）；與模型組相比，辛伐他汀組及丹參酮ⅡA 高、低劑量組小鼠肝組織GPX4 蛋白陽性表達顯著上升（P＜0.01）；丹參酮ⅡA 高劑量組治療效果優(yōu)于丹參酮ⅡA低劑量組（P＜0.01），見圖4。

6 Wes全自動蛋白質(zhì)印跡定量分析結(jié)果

與正常對照組相比，模型組小鼠肝組織GPX4、xCT 及FTH1 蛋白表達均呈現(xiàn)下降趨勢，p53 蛋白表達呈上升趨勢（P＜0.05 或P＜0.01）；與模型組相比，辛伐他汀組、丹參酮ⅡA低劑量組和丹參酮ⅡA高劑量組肝組織GPX4、xCT 及FTH1 蛋白表達均呈現(xiàn)上升趨勢，p53 蛋白表達呈下降趨勢，其中辛伐他汀組促進GPX4、xCT 和FTH1蛋白表達及降低p53蛋白表達的效果均優(yōu)于丹參酮ⅡA 低劑量組（P＜0.01），丹參酮ⅡA高劑量組促進FTH1蛋白表達及降低p53蛋白表達的效果亦優(yōu)于丹參酮ⅡA 低劑量組（P＜0.01），見圖5。

Figure 4.GPX4 expression in liver tissues of mice in each group（×400）.A:normal control group；B:model group；C:simvastatin group；D:low-dose tanshinone ⅡA group；E:high-dose tanshinone ⅡA group.Mean±SD. n=3.**P＜0.01 vs normal control group；▲▲P＜0.01 vs model group；△△P＜0.01 vs low-dose tanshinone ⅡA group.圖4 各組小鼠肝組織中GPX4的表達情況

Figure 5.The protein levels of GPX4，xCT，p53 and FTH1 in liver tissues of the mice in each group.Mean±SD. n=3.*P＜0.05，**P＜0.01 vs normal control group；▲P＜0.05，▲▲P＜0.01 vs model group；△P＜0.05，△△P＜0.01 vs low-dose tanshinone ⅡA group.圖5 各組小鼠肝組織GPX4、xCT、p53及FTH1蛋白水平

7 RT-qPCR 檢測 GPX4、SLC7A11、p53 及 FTH1的mRNA表達

與正常對照組比較，模型組小鼠肝組織GPX4、SLC7A11 和 FTH1 的 mRNA表達顯著下降（P＜0.01），p53 的mRNA 表達顯著上升（P＜0.01）；與模型組相比，辛伐他汀組及丹參酮ⅡA 高、低劑量組小鼠肝組織 GPX4、SLC7A11 和 FTH1 的 mRNA 表達顯著上升（P＜0.01，P＜0.05），p53的mRNA 表達顯著下降（P＜0.01），且丹參酮ⅡA 高劑量組的效果高于丹參酮ⅡA低劑量組（P＜0.05），見表4。

表4 丹參酮ⅡA對小鼠肝臟GPX4、SLC7A11、p53和FTH1 mRNA表達水平Table 4.Effects of tanshinone ⅡA on the mRNA expression of GPX4，SLC7A11，p53 and FTH1 in the liver tissues of mice（Mean±SD. n=3）

討 論

隨著人們生活水平顯著提高，飲食結(jié)構(gòu)也有所改變，在高膽固醇飲食與高強度工作壓力等因素下，心血管疾病的發(fā)病率逐漸增高，AS 為心血管疾病最主要的死亡因素，對其防治具有重要的意義。中醫(yī)典籍中并無“動脈粥樣硬化”這一病名，但據(jù)其不同的臨床表現(xiàn)及受累部位，將其分散于“中風(fēng)”、“眩暈”、“胸痹”、“脈痹”等病癥中。窺其致病因素多有臟腑功能失調(diào)，氣虛血瘀、痰濁、津液運行不暢等。中醫(yī)理論講到脾居中焦，主運化水谷精微?！夺t(yī)宗必讀》曰:“脾土虛弱，清者難升，濁者難降，留中滯膈，瘀而成痰”。若脾失健運，則清陽不升，濁陰不降。脾為生痰之源，痰濁亦從水谷化生而來，且依賴于脾敷布周身，而后黏滯于血脈，日久瘀阻于脈絡(luò)，逐漸形成AS［7］。由此可見，脂代謝紊亂是AS 發(fā)生發(fā)展最重要的危險因素之一［8］，因此調(diào)控脂代謝平衡即為防治AS主要手段之一。

丹參自古以來便作為活血化瘀的良藥，具有祛瘀、涼血、養(yǎng)心除煩等功效，臨床中血瘀、疼痛等癥大多配伍此藥。丹參酮ⅡA 是從丹參中提取的重要活性成分之一，其抗AS、抗心室肥厚、抗氧化、抗心律失常等藥理作用都已明確［9］。

課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA 具有抗炎、抗氧化的作用，且能夠調(diào)控血脂水平，減少脂質(zhì)沉積，采用高脂飼料喂養(yǎng)ApoE-/-小鼠發(fā)現(xiàn)，丹參酮ⅡA 能夠降低ApoE-/-小鼠肝臟 LDL-R 和 LCAT 的 mRNA 表達，從而減少肝臟脂質(zhì)沉積［5，10-12］。本實驗研究結(jié)果顯示，模型組ApoE-/-小鼠血清中的TC、TG 和LDL-C水平顯著升高，HDL-C 含量并無顯著差異；HE 染色顯示小鼠肝臟存在大量脂肪空泡，脂肪變性明顯。相對于模型組而言，治療組ApoE-/-小鼠血清中的TC、TG 和LDL-C 水平顯著下降，肝細(xì)胞脂肪變性程度也明顯減輕，提示丹參酮ⅡA 在降低ApoE-/-小鼠血脂水平的同時可減少肝臟脂質(zhì)沉積。

鐵死亡是由GPX4 活性喪失以及脂質(zhì)ROS 大量累積所致的一種細(xì)胞死亡形式，這種由鐵依賴的細(xì)胞死亡形式在遺傳、生化和形態(tài)學(xué)上均不同于其他細(xì)胞死亡模式。2003 年，Dolma 等［13］發(fā)現(xiàn)由 erastin致死的RAS 突變的腫瘤細(xì)胞，沒有細(xì)胞核形態(tài)學(xué)的改變及DNA片段化等。幾年后，Yang等［14］研究證實這一過程可被鐵螯合劑所抑制，并伴隨細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平的大量增加。近幾年研究發(fā)現(xiàn)，鐵死亡與脂質(zhì)代謝性疾病密切相關(guān)，脂質(zhì)過氧化反應(yīng)的發(fā)生可能是導(dǎo)致鐵死亡發(fā)生所必需的條件之一［15］。GPX4 是一種抗氧化酶，作用于底物GSH 后，可將過氧化氫及脂質(zhì)ROS 分別降解為水和相應(yīng)的醇，可減少細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化的損傷，對細(xì)胞能否生存至關(guān)重要［16］。GPX4也是鐵死亡環(huán)節(jié)中的關(guān)鍵因子，GSH是GPX4 的主要底物，若GSH 水平下降可導(dǎo)致GPX4喪失活性，GPX4的抑制將導(dǎo)致大量脂質(zhì)過氧化物聚集進而致使大量ROS 產(chǎn)生，從而導(dǎo)致鐵死亡的發(fā)生［17］。細(xì)胞膜上的轉(zhuǎn)鐵蛋白受體可將Fe3+轉(zhuǎn)運進入細(xì)胞，多余鐵則儲存于鐵蛋白之中。鐵蛋白內(nèi)含有FTH1 和鐵蛋白輕鏈（ferritin light chain，F(xiàn)TL），可調(diào)控儲存的鐵離子［18］。膜鈉離子依賴性胱氨酸/谷氨酸反向轉(zhuǎn)運體（membrane Na+-dependent cysteine/glutamate antiporter，System xC-）是由重鏈亞基（CD98hc/SLC3A2）和輕鏈亞基（xCT/SLC7A11）組成的。System xC-可將胞內(nèi)谷氨酸轉(zhuǎn)移至細(xì)胞外，并將胱氨酸轉(zhuǎn)移進來，細(xì)胞內(nèi)的胱氨酸可用于GSH 的合成［19］。在細(xì)胞發(fā)生鐵死亡的過程中p53、GPX4和FTH1均發(fā)揮了重要的作用。研究表明，p53 可抑制SLC7A11 的表達，阻止細(xì)胞對胱氨酸的攝取，進而降低GSH的合成并促進鐵死亡的形成。此外，細(xì)胞內(nèi)p53 的增加可致使細(xì)胞內(nèi)ROS 的大量積累，并觸發(fā)其誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，進而加速鐵死亡的進程。本研究結(jié)果表明，模型組小鼠肝臟 GPX4、SLC7A11、p53 和FTH1的蛋白及mRNA 表達均顯著升高，提示細(xì)胞鐵死亡發(fā)生于AS 小鼠模型肝細(xì)胞的損傷過程，而引起肝細(xì)胞鐵死亡發(fā)生的一系列相關(guān)因子GPX4、SLC7A11、p53 和 FTH1 可能是肝臟 ROS 含量升高、GSH 減少而致肝臟脂質(zhì)過氧化發(fā)生的重要因素。經(jīng)丹參酮ⅡA治療后，小鼠肝臟GPX4、SLC7A11、p53 和FTH1 蛋白及mRNA 表達均顯著降低，且高劑量比低劑量的效果更好一些，表明丹參酮ⅡA 具有抑制ApoE-/-小鼠肝臟細(xì)胞鐵死亡的作用。

綜上所述，丹參酮ⅡA 可通過拮抗肝細(xì)胞鐵死亡相關(guān)因子進而實現(xiàn)對AS 小鼠肝臟的保護作用，也可降低肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化的發(fā)生，從而減輕肝臟脂質(zhì)沉積。本研究可為臨床防治AS 肝臟疾病提供新靶點。