深圳地區(qū)血紅蛋白E的血液學(xué)特征調(diào)查*

闞麗娟，蔡欽泉，覃俊龍，陳亞瓊，張麗軍，莫云均，李 悅，張秀明，李育敏

(廣東省深圳市羅湖區(qū)人民醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科，廣東深圳 518001)

血紅蛋白疾病分為異常血紅蛋白病和珠蛋白生成障礙性貧血(以下簡(jiǎn)稱地貧)兩大類，前者是由于珠蛋白基因缺陷導(dǎo)致血紅蛋白結(jié)構(gòu)改變所致，后者則是由血紅蛋白含量(Hb)改變引起[1]。血紅蛋白E(HbE)是我國(guó)南方地區(qū)最常見(jiàn)的異常血紅蛋白之一[2-4]，其分子基礎(chǔ)為β珠蛋白基因第26位密碼子發(fā)生點(diǎn)突變(GAG→AAG)，導(dǎo)致β珠蛋白鏈該位點(diǎn)賴氨酸取代谷氨酸，從而產(chǎn)生結(jié)構(gòu)變異的HbE。由于該密碼子靠近外顯子與內(nèi)含子的拼接部位，發(fā)生堿基替換后激活了鄰近的隱蔽切接點(diǎn)，造成mRNA前體加工障礙，導(dǎo)致β珠蛋白基因表達(dá)減少，因此在功能上屬于β+地貧。不同性別及年齡段血液學(xué)指標(biāo)參數(shù)存在差異，本研究按年齡段分別分析成人、兒童及新生兒HbE的血液學(xué)特征，并按性別分類統(tǒng)計(jì)成人HbE的血液學(xué)參數(shù)，為HbE病和β地貧的篩查提供系統(tǒng)、詳細(xì)的臨床血液學(xué)表型參考資料。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年6月至2019年5月本院門診和住院進(jìn)行血紅蛋白檢測(cè)的受試者為調(diào)查對(duì)象。本研究受試者共72 397例。采集EDTA-K2抗凝外周靜脈全血2 mL，2～8 ℃保存，用于紅細(xì)胞參數(shù)和血紅蛋白電泳分析，以及地貧基因檢測(cè)。

1.2儀器與試劑 紅細(xì)胞參數(shù)分析采用XN-1000血細(xì)胞分析儀(日本Sysmex公司)，血紅蛋白分析采用Capillarys2全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀(法國(guó)Sebia公司)，試劑均為廠家原裝配套試劑。地貧基因檢測(cè)采用T960擴(kuò)增儀(中國(guó)黑馬公司)、ChemiDocTMMP全自動(dòng)凝膠成像分析儀(美國(guó)Bio-Rad公司)、DYY-6C型電泳儀(中國(guó)北京六一儀器廠)、YN-H16恒溫雜交儀(深圳亞能公司)，試劑購(gòu)自深圳亞能生物技術(shù)有限公司。

1.3方法

1.3.1血液學(xué)分析 采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行各項(xiàng)紅細(xì)胞參數(shù)分析，分析指標(biāo)為Hb、平均紅細(xì)胞體積(MCV)、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量(MCH)。采用毛細(xì)管電泳法進(jìn)行血紅蛋白分析，鑒別Hb條帶類型及分析各條帶所占相對(duì)比例。以上檢測(cè)均按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3.2地貧基因檢測(cè) 采用跨越斷裂點(diǎn)聚合酶鏈反應(yīng)(Gap-PCR)法檢測(cè)3種中國(guó)人群常見(jiàn)的缺失型α地貧基因(--SEA、-α3.7和-α4.2)和3種罕見(jiàn)缺失型β地貧基因：中國(guó)臺(tái)灣型、中國(guó)型[Gγ+(Aγδβ)0]和東南亞型(SEA-HPFH)。采用PCR結(jié)合反向點(diǎn)雜交(PCR-RDB)法檢測(cè)常見(jiàn)的3種非缺失α地貧基因(αQS、αCS、αWS)和17種β地貧基因點(diǎn)突變類型(-28、-29、CD17、CD41-42、CD43、βE、CD71-72、IVS-Ⅱ-654、-32、-30、CAP、Initiation condon、CD14-15、CD27-28、IVS-Ⅰ-1、IVS-Ⅰ-5、CD31)。按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行以上操作及結(jié)果判讀。

2 結(jié) 果

2.1基因型分析 檢出HbE共計(jì)76例，發(fā)生率為0.105%(76/72 397)，包括73例HbE雜合子，其中成年男性24例，成年女性34例，兒童7例，新生兒8例。3例HbE復(fù)合α、β地貧，均為成人，其中HbE復(fù)合α地貧2例，為HbE復(fù)合αWS雜合子和HbE復(fù)合-α3.7純合子，HbE復(fù)合β地貧1例，為HbE復(fù)合Gγ+(Aγδβ)0。

2.2血液學(xué)表型分析 成人單純HbE雜合子、HbE復(fù)合αWS雜合子對(duì)血液學(xué)表型影響較輕，表現(xiàn)為Hb正常，MCV和MCH輕度降低，各年齡段及性別具體血液學(xué)指標(biāo)分析見(jiàn)表1。HbE復(fù)合-α3.7純合子表現(xiàn)為輕型地貧，MCV和MCH降低；HbE復(fù)合Gγ+(Aγδβ)0表現(xiàn)為中間型β地貧，MCV和MCH明顯降低，HbE和HbF明顯升高，見(jiàn)表2。新生兒HbE雜合子毛細(xì)管電泳分析結(jié)果為血紅蛋白A(HbA)(7.5±1.5)%、血紅蛋白F(HbF)(90.2±2.0)%和HbE (2.6±0.7)%，見(jiàn)表3。

表1 單純HbE雜合子的血液學(xué)表型

表2 HbE復(fù)合α、β地貧的基因型與血液學(xué)表型

表3 8例新生兒HbE雜合子的毛細(xì)管電泳結(jié)果(%)

3 討 論

HbE主要分布于我國(guó)長(zhǎng)江以南及沿海地區(qū)。秦良誼[2]早期調(diào)查顯示HbE以云南最多見(jiàn)，在廣東和廣西的β鏈異常血紅蛋白分布中也主要為HbE，但攜帶率較云南低，而近年報(bào)道廣西地區(qū)人群HbE的攜帶率高達(dá)0.5%[3]。廣東梅州地區(qū)HbE的攜帶率為0.118%[5]，韶關(guān)地區(qū)為0.072%[6]，筆者前期也報(bào)道深圳地區(qū)為0.130%[7]，本次納入更多的樣本研究表明為0.105%，高于韶關(guān)地區(qū)。秦良誼[2]認(rèn)為HbE的地域分布可能與瘧疾有關(guān)，在曾流行過(guò)瘧疾的地區(qū)其發(fā)生頻率明顯高于其他地區(qū)，說(shuō)明HbE攜帶者可能對(duì)瘧疾有較強(qiáng)的抵抗力，帶有HbE的紅細(xì)胞不利于瘧原蟲生長(zhǎng)。

HbE攜帶者的血液學(xué)表型取決于其基因型，單純HbE雜合子可無(wú)貧血及臨床癥狀[3,8-9]。根據(jù)我國(guó)《地中海貧血預(yù)防控制操作指南》[1]，地貧篩查包括紅細(xì)胞參數(shù)和血紅蛋白分析，前者觀察指標(biāo)為MCV和MCH。鑒于成年男性、女性及兒童紅細(xì)胞參數(shù)的參考區(qū)間不同，且進(jìn)行地貧篩查的很大部分成年女性處于妊娠期，孕期由于營(yíng)養(yǎng)需求增加以及血液稀釋，存在生理性貧血的可能，因此本研究對(duì)HbE雜合子的血液學(xué)表型按性別及年齡段進(jìn)行了分析。結(jié)果表明，各年齡段HbE雜合子對(duì)紅細(xì)胞參數(shù)指標(biāo)的影響較輕，僅表現(xiàn)為MCV和MCH輕度降低，而Hb正常，這提示臨床在觀察到MCV和MCH降低時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步行血紅蛋白電泳分析。李友瓊等[3]報(bào)道HbE攜帶者中有部分血液學(xué)表型正常，本研究也發(fā)現(xiàn)2例HbE雜合子的血細(xì)胞分析結(jié)果正常，這提示對(duì)于地貧篩查應(yīng)嚴(yán)格按照指南檢測(cè)血常規(guī)和血紅蛋白電泳，兩者結(jié)合分析以避免漏診。

HbE復(fù)合其他地貧類型，其臨床表現(xiàn)存在異質(zhì)性[3-4,8-10]。HbE復(fù)合α地貧時(shí)，由于α和β珠蛋白基因均表達(dá)減少，α鏈和β鏈相對(duì)平衡，臨床癥狀較輕。HbE復(fù)合靜止型α地貧，如αWS雜合子的表型同HbE雜合子，而復(fù)合標(biāo)準(zhǔn)型α地貧表現(xiàn)為輕型地貧[3,10]。本研究中HbE復(fù)合αWS雜合子的血液型表型也同HbE雜合子，而HbE復(fù)合-α3.7純合子的紅細(xì)胞參數(shù)較HbE雜合子低，但HbE水平也較HbE雜合子低，與李友瓊等[3]報(bào)道的HbE復(fù)合--SEA雜合子相符合，但與張桂青等[10]報(bào)道存在差異。這一方面可能與血紅蛋白分析檢測(cè)方法不同有關(guān)，另一方面表明HbE復(fù)合α地貧的臨床表型存在異質(zhì)性，這也提示臨床在血紅蛋白疾病篩查時(shí)必須結(jié)合血紅蛋白電泳進(jìn)行分析。HbE純合子或HbE復(fù)合β地貧時(shí)，由于兩種突變均發(fā)生于β珠蛋白基因上，造成β鏈合成減少或不合成，α鏈除了形成HbF和血紅蛋白A2(HbA2)外，其余形成包涵體附著于紅細(xì)胞膜，導(dǎo)致紅細(xì)胞在骨髓或脾內(nèi)被破壞。HbE復(fù)合β地貧的病理生理機(jī)制較為復(fù)雜，具有高度異質(zhì)性，對(duì)于不同或同一突變基因型，其臨床表現(xiàn)都可能存在差異，大部分表現(xiàn)為中間型或重型地貧，也有表現(xiàn)為輕型地貧的報(bào)道[3-4,8-10]。本研究發(fā)現(xiàn)1例HbE復(fù)合中國(guó)型β缺失[Gγ+(Aγδβ)0]，其血液學(xué)表型符合中間型β地貧的特征[1]。

臍帶血血紅蛋白電泳分析在新生兒地貧篩查中具有重要作用，較傳統(tǒng)的紅細(xì)胞脆性試驗(yàn)及血細(xì)胞分析篩查效果更佳[11-12]。本研究分析8例新生兒HbE雜合子的電泳結(jié)果，其HbE水平均較低，為(2.6±0.7)%，最低為1.4%。由于HbE電泳條帶位置與HbA2非常接近，且毛細(xì)管電泳檢測(cè)靈敏度高，新生兒HbA2通常在0.1%～1.0%，因此臨床應(yīng)注意區(qū)別HbE與HbA2條帶，必要時(shí)詢問(wèn)父母基因型，并進(jìn)一步行地貧基因檢測(cè)。

綜上所述，深圳地區(qū)人群HbE的攜帶率較高，以雜合子為主，檢測(cè)HbE對(duì)產(chǎn)前篩查和產(chǎn)前診斷具有重要指導(dǎo)意義。臨床醫(yī)師和檢驗(yàn)醫(yī)師應(yīng)重視HbE的臨床血液學(xué)特征，熟悉基因型與血液學(xué)表型的相關(guān)規(guī)律。