盧宣霖,胡 燃
(重慶兩江新區(qū)第一人民醫(yī)院檢驗科,重慶 401147)
慢性乙型肝炎是一種常見的傳染性疾病,指乙型肝炎病毒(HBV)檢測陽性,病程超過6個月或發(fā)病時間不明確但有相關(guān)癥狀出現(xiàn)的疾病[1]。臨床主要表現(xiàn)為惡心、厭食、腹脹和乏力等。近年來慢性乙型肝炎在全球有不斷流行趨勢,據(jù)統(tǒng)計,我國慢性乙型肝炎患者已高達1.3億[2]。由于該病難以治愈,且發(fā)展到后期能夠?qū)е赂斡不⒏伟┑认嚓P(guān)疾病的發(fā)生,對人們生命健康造成嚴重威脅。因此,及早診斷、及時治療意義重大。盡管目前對慢性乙型肝炎的發(fā)病機制尚不清楚,但學(xué)術(shù)界普遍認為該病與HBV感染后肝細胞損傷、免疫應(yīng)答紊亂關(guān)系密切[3]。濾泡輔助性T淋巴細胞(Tfh)是由BREITFELD等[4]在扁桃體中發(fā)現(xiàn)的一種新型CD4+T淋巴細胞亞群,有研究發(fā)現(xiàn)HBV感染者外周血Tfh不同程度升高,推測Tfh可能參與了HBV感染后的相關(guān)免疫反應(yīng)[5]。免疫球蛋白(Ig)是免疫活性分子中的一類,當有病毒入侵時,機體產(chǎn)生免疫反應(yīng),導(dǎo)致Ig水平升高。目前,Tfh和Ig水平與乙型肝炎嚴重程度的相關(guān)性研究仍較少,因此,本研究通過檢測乙型肝炎患者Tfh和Ig水平,探討其與疾病嚴重程度的相關(guān)性,現(xiàn)報道如下。
1.1一般資料 選取2016年3月至2018年10月本院收治的112例慢性乙型肝炎患者為研究對象,根據(jù)病情嚴重程度分為慢性非重型乙型肝炎組(69例)和慢性重型乙型肝炎組(43例)。以起病時臨床表現(xiàn)同亞急性重型肝炎,血清總膽紅素(TBIL)>10倍正常值,凝血酶原活動度低于40%判斷為慢性重型乙型肝炎。另選取同期本院70例健康體檢者作為對照組。3組研究對象性別、年齡比較,差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),具有可比性,見表1。本研究經(jīng)本院倫理委員會批準執(zhí)行。納入標準:(1)符合中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會、中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會制定的《慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)》[6]中的診斷標準;(2)年齡18~65歲;(3)Child-Pugh評分為A級;(4)自愿參與本研究,并簽署知情同意書。排除標準:(1)合并惡性腫瘤者;(2)伴有抑郁、精神疾病史者;(3)合并其他類型肝炎病毒感染者;(4)合并腎、心、肺功能異常者;(5)近期接受過免疫調(diào)節(jié)劑或抗菌藥物治療者;(6)孕婦或妊娠期女性。
表1 3組研究對象一般資料比較
1.2方法
1.2.1外周血Tfh水平測定 本文中Tfh通過檢測CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例來反映。于清晨空腹狀態(tài)下采集研究對象靜脈血1 mL,置于含有肝素鋰的試管中。取100 μL,依次加入5 μL熒光抗體PerCP-anti-CD4-PerCP(美國BD公司)和5 μL FITC-anti-CXCR5(美國BD公司),避光染色30 min,隨后加入紅細胞裂解液(按1∶10的比例),混勻后避光10 min,3 000 r/min離心5 min,棄上清液。加入2 mL 磷酸鹽緩沖液(PBS)重懸,1 000 r/min離心1 min,棄上清液,加入200 μL PBS重懸細胞后采用EPICS XL型流式細胞儀(美國Coulter公司)檢測外周血Tfh(檢測項目為CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例)水平,所有試劑購自美國Beckman公司,嚴格按照說明書要求操作。
1.2.2Ig水平測定 于清晨空腹狀態(tài)下抽取研究對象肘靜脈血2 mL,3 000 r/min離心10 min,分離血漿后-80 ℃保存,采用免疫比濁法測定IgA、IgG和IgM水平。試劑盒由美國Beckman公司提供,嚴格按照說明書要求操作。
1.2.3其他指標檢測 于清晨空腹狀態(tài)下抽取研究對象靜脈血6 mL,取4 mL 1 500 r/min離心15 min,取上清液置于-80 ℃下保存。采用LX20全自動生化分析儀(美國Beckman公司)測定血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)和TBIL水平,采用雙縮脲法測定血清總蛋白(TP)水平。將2 mL靜脈血加入含有枸櫞酸鈉的抗凝管中,3 000 r/min離心10 min,采用ACL7000全自動血凝儀(美國Beckman公司)測定凝血酶原時間(PT),試劑盒均購自美國Beckman公司,嚴格按照說明書要求操作。采用Piko Real型實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)儀(美國賽默飛公司)檢測慢性非重型乙型肝炎組和慢性重型乙型肝炎組患者HBV DNA水平,試劑購自上??迫A生物有限公司。
2.13組CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例,Ig、HBV DNA水平比較 慢性重型乙型肝炎組患者CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例,IgA、IgG和IgM水平顯著高于慢性非重型乙型肝炎組和對照組,并且慢性非重型乙型肝炎組患者CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例,IgA、IgG和IgM水平顯著高于對照組,差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。慢性重型乙型肝炎組HBV DNA水平高于慢性非重型乙型肝炎組(P<0.05)。見表2。
表2 3組CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例,Ig、HBV DNA水平比較
2.23組生化指標水平比較 對照組、慢性非重型乙型肝炎組和慢性重型乙型肝炎組ALT、TBIL水平和PT水平逐級遞增,組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);3組TP水平相近,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表3。
表3 3組生化指標水平比較
2.3CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例、Ig水平與ALT、TBIL、PT、HBV DNA的相關(guān)分析 Pearson相關(guān)分析表明,CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例,IgA、IgG和IgM水平與ALT、TBIL、PT和HBV DNA呈正相關(guān)(P<0.05),見表4。
表4 慢性乙型肝炎患者CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例、Ig水平與ALT、TBIL、PT、HBV DNA的相關(guān)性分析
慢性乙型肝炎是由HBV感染而引起的一種肝臟炎性病變,具有傳染性。慢性乙型肝炎是一種全球性疾病,全世界無癥狀HBV攜帶者超過2億,尤其在發(fā)展中國家多見[7]。我國HBV感染者中有1/3會發(fā)生肝臟損傷。慢性乙型肝炎的早期臨床癥狀不典型,難以及時發(fā)現(xiàn)患者[8]。HBV傳播方式較多,近年來乙型肝炎發(fā)病率具有不斷升高趨勢[9]。目前尚無完全根除HBV的方法,抑制病毒蔓延是目前臨床治療乙型肝炎的主要手段。及時、有效的診斷對于乙型肝炎尤為重要。
盡管目前對乙型肝炎的發(fā)病機制尚未研究透徹,但一直以來學(xué)術(shù)界認為HBV感染后引起的肝細胞損傷并不是直接由HBV造成的,而是HBV侵入后使機體產(chǎn)生的一系列免疫反應(yīng),導(dǎo)致組織及細胞損傷。Tfh是一種新型CD4+T淋巴細胞亞群,定位于次級淋巴細胞,檢測時難以取材。IgA、IgM和IgG是機體主要的Ig,是目前慢性乙型肝炎患者常規(guī)檢測指標。綜合以上背景,本文探討了不同群體CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例和Ig水平,結(jié)果顯示,慢性重型乙型肝炎組和慢性非重型乙型肝炎組CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例,IgA、IgG和IgM水平均顯著高于對照組(P<0.05),且慢性重型乙型肝炎組患者各指標水平顯著高于慢性非重型乙型肝炎組(P<0.05),說明慢性乙型肝炎患者CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例和Ig水平顯著高于健康人群,且隨著疾病程度的加重,以上指標的水平更高,提示Tfh和Ig可能參與了慢性乙型肝炎的發(fā)生和發(fā)展過程。Tfh具有獨立的分化調(diào)節(jié)機制,在B淋巴細胞的活化、分化等過程中具有輔助作用。近年的研究顯示,Tfh與慢性乙型肝炎的發(fā)生、發(fā)展具有一定關(guān)系。CXCR5是Tfh最重要的表面標記分子[10],目前一般認為外周血CD4+CXCR5+T淋巴細胞具有與Tfh相似的功能,能夠反映機體Tfh水平[11]。HBV屬于非細胞性病毒,機體感染后免疫功能發(fā)生紊亂,從而刺激機體產(chǎn)生更多B淋巴細胞,轉(zhuǎn)化為漿細胞后與Ig結(jié)合發(fā)揮免疫應(yīng)答作用。Tfh與乙型肝炎血清學(xué)轉(zhuǎn)化有關(guān),參與了HBV介導(dǎo)的免疫反應(yīng)。吳翠萍等[12]的研究認為,Tfh參與慢性乙型肝炎的免疫反應(yīng),且與患者高球蛋白血癥緊密相關(guān)。有研究顯示,慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例,IgA、IgG和IgM水平明顯高于健康人群,且Ig水平與疾病嚴重程度關(guān)系密切[13-14],這與本研究結(jié)果相似。
ALT是反映肝實質(zhì)損傷最敏感的指標之一,肝細胞即使壞死率僅為1%,血清ALT水平即可升高1倍。膽紅素在肝臟的代謝和排泄等過程中發(fā)揮重要作用,肝臟受損后,間接膽紅素無法轉(zhuǎn)化,導(dǎo)致TBIL水平升高。PT是反映肝損傷嚴重程度及預(yù)后的常用指標,并且凝血酶原為肝臟合成維生素的重要依賴因子。一般認為,排除其他因素后,患者ALT、TBIL水平越高,PT越長,肝臟受損越嚴重。因此,臨床常用這些指標反映肝臟損傷程度。本研究結(jié)果顯示,健康體檢者ALT、TBIL和PT水平均顯著低于慢性乙型肝炎患者,且隨著病情進展,這些指標水平具有遞增趨勢,而TP水平在3組中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),表明ALT、TBIL和PT能夠反映肝臟損傷的程度。 HBV DNA是HBV感染最直接的指標,本研究結(jié)果顯示,隨著乙型肝炎患者病情加重,HBV DNA水平越高,且HBV DNA水平與CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例、Ig水平呈正相關(guān),提示乙型肝炎的惡化與機體細胞免疫和體液免疫紊亂有密切關(guān)系。
此外,本研究顯示,CD4+CXCR5+T淋巴細胞比例,IgA、IgG和IgM水平與ALT、TBIL和PT呈正相關(guān),表明Tfh和Ig水平與慢性乙型肝炎嚴重程度具有相關(guān)性,二者能夠輔助判斷疾病進展情況。
綜上所述,檢測Tfh和Ig水平能反映慢性乙型肝炎的病情變化,可為臨床診治慢性乙型肝炎提供重要的依據(jù)。