新型冠狀病毒核酸和抗體檢測(cè)臨床應(yīng)用專家共識(shí)

上海市醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)

當(dāng)前，復(fù)工復(fù)產(chǎn)逐步推進(jìn),疫情境外輸入壓力不斷增大以及無(wú)癥狀感染者存在一定傳播風(fēng)險(xiǎn)等，這對(duì)新型冠狀病毒檢測(cè)工作提出了新的要求。上海市衛(wèi)生健康委員會(huì)貫徹《關(guān)于進(jìn)一步做好疫情期間新冠病毒檢測(cè)有關(guān)工作的通知》[1]精神，發(fā)布加強(qiáng)本市醫(yī)療機(jī)構(gòu)新型冠狀病毒檢測(cè)工作的通知，強(qiáng)調(diào)結(jié)合國(guó)家聯(lián)防聯(lián)控機(jī)制文件,做好貫徹落實(shí)工作。文件指出，原則上二級(jí)以上綜合性醫(yī)療機(jī)構(gòu)應(yīng)當(dāng)建立符合生物安全二級(jí)及以上標(biāo)準(zhǔn)的臨床檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，具備獨(dú)立開(kāi)展新型冠狀病毒檢測(cè)的能力，常態(tài)化防控要提升檢測(cè)能力，大規(guī)模開(kāi)展核酸和抗體檢測(cè)。這有利于精準(zhǔn)防控，保障群眾健康，推動(dòng)全面復(fù)工復(fù)產(chǎn)。要提高檢測(cè)技術(shù)水平，抓緊擴(kuò)大更簡(jiǎn)便、高效的檢測(cè)設(shè)備的生產(chǎn)規(guī)模和商業(yè)化應(yīng)用，努力做到應(yīng)檢盡檢、愿檢盡檢。這對(duì)諸多醫(yī)院檢驗(yàn)科的檢驗(yàn)流程、檢驗(yàn)質(zhì)量和生物安全提出了更高的要求。

本共識(shí)在上海醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)分會(huì)查閱文獻(xiàn)、咨詢相關(guān)專家的基礎(chǔ)上進(jìn)行編寫(xiě)，以對(duì)新型冠狀病毒臨床實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)、臨床應(yīng)用和生物安全提供有指導(dǎo)性的建議。本共識(shí)適用于從事新型冠狀病毒核酸和血清抗體檢測(cè)的臨床實(shí)驗(yàn)室，旨在規(guī)范新型冠狀病毒核酸和抗體的檢測(cè)方法與流程，為臨床提供規(guī)范可靠的檢測(cè)結(jié)果與合理的報(bào)告解讀。新型冠狀病毒是一個(gè)全新的病毒,人類對(duì)新型冠狀病毒的認(rèn)識(shí)還在不斷深入，本共識(shí)將適時(shí)修訂，以適應(yīng)臨床應(yīng)用的需求。

1 標(biāo)本采集

1.1核酸檢測(cè)標(biāo)本 具體過(guò)程參照《新型冠狀病毒肺炎實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)技術(shù)指南》[2]，采集過(guò)程須兼顧安全和目標(biāo)。在能夠達(dá)成目標(biāo)的情況下，盡量減少接觸,盡量避免氣溶膠和飛沫產(chǎn)生,盡量縮短在床旁的持續(xù)時(shí)間。嚴(yán)格落實(shí)采樣人員個(gè)人防護(hù)措施，確保“一人一采一消毒”，并按規(guī)范做好場(chǎng)所消毒隔離、醫(yī)療廢棄物處置、剩余生物樣本處置等工作。(1)采集因素是造成核酸結(jié)果假陰性的重要原因，采樣人員應(yīng)經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化培訓(xùn)及考核。(2)輕癥患者、高度疑似患者或有密切接觸史者，核酸標(biāo)本采集優(yōu)先順序?yàn)楸茄适米?、口咽拭子、痰液。為提高檢出率，可同時(shí)采集1份鼻咽拭子和1份口咽拭子于同一標(biāo)本采集管中。采樣時(shí)應(yīng)選擇有國(guó)家醫(yī)療器械注冊(cè)證、質(zhì)量好的無(wú)菌植絨拭子，拭子的采集及保存方法應(yīng)規(guī)范。推薦使用帶有異硫氰酸胍等病毒滅活劑的采樣管，滅活病毒的同時(shí)可提高檢出率。(3)為觀察治療期間的病毒清除效果，應(yīng)收集標(biāo)本并多次檢測(cè)。(4)新型冠狀病毒還會(huì)影響人體多個(gè)主要器官，可對(duì)疑似患者其他部位的體液(如腦脊液、血液等)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2抗體檢測(cè)標(biāo)本 血清、血漿、靜脈全血標(biāo)本都可以進(jìn)行抗體檢測(cè)，成人建議采集3～5 mL全血以保證能分離獲得足量的血清。全血標(biāo)本可直接使用乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝采血管。

2 標(biāo)本送檢[3]

2.1核酸檢測(cè)標(biāo)本 標(biāo)本應(yīng)送至具備檢測(cè)資質(zhì)并經(jīng)省級(jí)衛(wèi)生健康行政主管部門(mén)批準(zhǔn)，可從事新型冠狀病毒核酸檢測(cè)的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)實(shí)驗(yàn)室。

2.1.1送檢時(shí)間和溫度控制 (1)標(biāo)本采集后應(yīng)盡快送檢，建議標(biāo)本采集后室溫放置不超過(guò)4 h，應(yīng)盡可能在2～4 h送到實(shí)驗(yàn)室。在2～8 ℃下轉(zhuǎn)運(yùn)，運(yùn)送時(shí)間一般不超過(guò)24 h(根據(jù)采集管中保存液的差異，最長(zhǎng)不應(yīng)超過(guò)72 h)。如超過(guò)72 h，應(yīng)于-70 ℃或更低的溫度下保存和轉(zhuǎn)運(yùn)。如果需要外送標(biāo)本，建議采用冰袋或者干冰等制冷方式進(jìn)行保存。(2)血液標(biāo)本應(yīng)分離血漿后進(jìn)行保存和轉(zhuǎn)運(yùn)。

2.1.2運(yùn)輸容器 標(biāo)本運(yùn)輸容器應(yīng)當(dāng)防水、防破損、防泄露、耐高(低)溫和高壓。運(yùn)輸容器和包裝材料上應(yīng)有相關(guān)部門(mén)規(guī)定的生物危害標(biāo)識(shí)、警示語(yǔ)和提示語(yǔ)。運(yùn)輸容器應(yīng)使用三層包裝系統(tǒng)，即內(nèi)層包裝、中層容器和外層容器。防漏的內(nèi)層包裝應(yīng)貼上生物危害標(biāo)識(shí)，每袋限1份新型冠狀病毒核酸標(biāo)本，裝入中層容器，將“感染性物品”標(biāo)記貼在外層容器上。內(nèi)層包裝和中層容器間應(yīng)放置足量的吸水性材料，中層容器應(yīng)固定在硬質(zhì)外層容器中。中層容器與外層容器間應(yīng)放置冰袋。

2.1.3院內(nèi)運(yùn)輸 標(biāo)本運(yùn)送人員進(jìn)行二級(jí)防護(hù)并隨身攜帶75%乙醇，以便發(fā)生意外時(shí)能及時(shí)處理。轉(zhuǎn)運(yùn)期間應(yīng)保持轉(zhuǎn)運(yùn)箱平穩(wěn)，標(biāo)本直立不倒，避免劇烈震蕩、顛簸。轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程中運(yùn)送人員不可自行打開(kāi)轉(zhuǎn)運(yùn)箱，不可直接接觸標(biāo)本；轉(zhuǎn)運(yùn)期間如果發(fā)生意外，如傾倒、泄漏等突發(fā)事件，不應(yīng)自行處理轉(zhuǎn)運(yùn)箱，須立即向有關(guān)部門(mén)匯報(bào)，由相關(guān)部門(mén)委派專業(yè)人員處理。條件允許時(shí)應(yīng)配備標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)監(jiān)控裝置。標(biāo)本應(yīng)單獨(dú)轉(zhuǎn)運(yùn)，不能和其他物品混雜放置，禁止氣動(dòng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)標(biāo)本。

2.1.4長(zhǎng)距離運(yùn)輸 若標(biāo)本需要長(zhǎng)距離運(yùn)輸，應(yīng)當(dāng)按照《可感染人類的高致病性病原微生物菌(毒)種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》[4]辦理《準(zhǔn)運(yùn)證書(shū)》。醫(yī)療機(jī)構(gòu)等委托第三方醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行標(biāo)本檢測(cè)，應(yīng)由委托方負(fù)責(zé)辦理《準(zhǔn)運(yùn)證書(shū)》。新型冠狀病毒標(biāo)本運(yùn)輸包裝屬于A類，對(duì)應(yīng)的聯(lián)合國(guó)編號(hào)為UN2814。轉(zhuǎn)運(yùn)者安全防護(hù)按二級(jí)防護(hù)要求，并隨身攜帶75%乙醇。司機(jī)佩戴外科口罩或N95口罩，通過(guò)專用車輛運(yùn)輸。如果經(jīng)航空運(yùn)輸，包裝還應(yīng)符合國(guó)際民航組織文件Doc9284-AN/905《危險(xiǎn)品航空安全運(yùn)輸技術(shù)細(xì)則》的PI602分類包裝要求。至少由1名標(biāo)本運(yùn)送人員和司機(jī)同時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)標(biāo)本，宜配備標(biāo)本轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程監(jiān)控設(shè)施。標(biāo)本應(yīng)單獨(dú)轉(zhuǎn)運(yùn)，不能和其他物品混雜放置，禁止氣動(dòng)系統(tǒng)轉(zhuǎn)運(yùn)標(biāo)本。

2.1.5標(biāo)本接收 在二級(jí)生物安全柜內(nèi)完成標(biāo)本接收。實(shí)驗(yàn)室接收人員用0.55%及以上含氯消毒液或75%乙醇對(duì)轉(zhuǎn)運(yùn)容器消毒。打開(kāi)轉(zhuǎn)運(yùn)容器后立即使用0.55%及以上含氯消毒液或75%乙醇噴霧，檢查轉(zhuǎn)運(yùn)盒或者密封袋及標(biāo)本的密閉性，核對(duì)標(biāo)本信息，包括被檢者姓名、性別、年齡、編號(hào)及檢測(cè)項(xiàng)目等。待檢標(biāo)本的狀態(tài)如有異常，需注明。

2.1.6標(biāo)本保存 用于核酸檢測(cè)的標(biāo)本應(yīng)盡快進(jìn)行檢測(cè)，能在24 h內(nèi)檢測(cè)的標(biāo)本可置于4 ℃保存；24 h內(nèi)無(wú)法檢測(cè)的標(biāo)本則應(yīng)置于-70 ℃或以下保存(如無(wú)-70 ℃保存條件，則于-20 ℃冰箱暫存)。應(yīng)設(shè)立專庫(kù)或?qū)９駟为?dú)保存標(biāo)本，避免反復(fù)凍融；條件允許時(shí)應(yīng)配備標(biāo)本保存監(jiān)控裝置。

2.1.7標(biāo)本管理 新型冠狀病毒陽(yáng)性標(biāo)本應(yīng)由專柜、雙人、雙鎖、專人管理，準(zhǔn)確記錄標(biāo)本的來(lái)源、種類、數(shù)量，編號(hào)登記，采取有效措施確保標(biāo)本的安全，嚴(yán)防發(fā)生誤用、惡意使用、被盜、被搶、丟失、泄露等事件。條件允許時(shí)可配備標(biāo)本保存監(jiān)控裝置。

2.2抗體檢測(cè)標(biāo)本

2.2.1送檢時(shí)間和溫度控制 標(biāo)本采集后應(yīng)30 min內(nèi)送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，不宜超過(guò)2 h。標(biāo)本抵達(dá)實(shí)驗(yàn)室后，血清標(biāo)本應(yīng)盡快離心，避免溶血。

2.2.2標(biāo)本保存 血清及全血標(biāo)本如果在5 d內(nèi)可完成檢測(cè)則保存于2～8 ℃，全血標(biāo)本不得凍存。血清標(biāo)本若5 d內(nèi)無(wú)法檢測(cè)則應(yīng)置于-70 ℃或以下保存，如無(wú)-70 ℃保存條件，則于-20 ℃冰箱暫存。標(biāo)本避免反復(fù)凍融。條件允許時(shí)應(yīng)配備標(biāo)本保存監(jiān)控裝置。

2.2.3運(yùn)輸容器、院內(nèi)及長(zhǎng)距離運(yùn)輸、標(biāo)本接收和標(biāo)本管理等要求 參見(jiàn)“2.1”項(xiàng)下內(nèi)容。

3 標(biāo)本檢測(cè)

3.1核酸標(biāo)本檢測(cè)

3.1.1檢測(cè)方法 新型冠狀病毒常用的核酸檢測(cè)方法有兩種：病毒核酸特異基因檢測(cè)和病毒基因組測(cè)序。熒光PCR法是目前臨床上廣泛應(yīng)用于新型冠狀病毒核酸檢測(cè)的方法，具有快速、靈敏、特異等特點(diǎn)。由于新型冠狀病毒是RNA病毒，試劑盒檢測(cè)基本都采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法，擴(kuò)增病原體的核酸，同時(shí)通過(guò)熒光探針實(shí)時(shí)檢測(cè)擴(kuò)增產(chǎn)物。

熒光PCR法基本原理是通過(guò)熒光標(biāo)記的特異性探針，通過(guò)對(duì)反應(yīng)過(guò)程中PCR產(chǎn)物的標(biāo)記跟蹤，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)產(chǎn)物量的增長(zhǎng)，根據(jù)擴(kuò)增曲線計(jì)算出起始模板量。新型冠狀病毒核酸熒光PCR法檢測(cè)試劑盒檢測(cè)靶標(biāo)主要分為病毒基因組中開(kāi)放讀碼框1a/b(ORF1ab)、核殼蛋白(N)和包膜蛋白(E)。推薦選用至少包含針對(duì)新型冠狀病毒ORF1ab和N基因區(qū)域的試劑。

除熒光PCR法外，目前已獲批的新型冠狀病毒核酸檢測(cè)試劑盒采用的方法還有測(cè)序法、等溫?cái)U(kuò)增法、雜交捕獲免疫熒光法和RNA捕獲探針?lè)ā?/p>

基因測(cè)序技術(shù)在疫情初期甄別病原體起到了至關(guān)重要的作用，也為后續(xù)基因擴(kuò)增檢測(cè)新型冠狀病毒的開(kāi)展提供了特異性基因組序列信息。但基因測(cè)序存在儀器昂貴、操作復(fù)雜、耗時(shí)長(zhǎng)、需要專業(yè)人員進(jìn)行分析等不足，無(wú)法在臨床上大范圍推廣使用?；驕y(cè)序可用于臨床高度疑似但RT-PCR檢測(cè)陰性患者的確認(rèn)，同時(shí)也可進(jìn)一步獲得病毒是否發(fā)生變異等信息，為后續(xù)的疫苗、藥物研發(fā)等提供數(shù)據(jù)。

等溫?cái)U(kuò)增法與傳統(tǒng)PCR法相比，技術(shù)設(shè)備簡(jiǎn)單，擴(kuò)增時(shí)間縮短，同時(shí)保持了較高的靈敏度及特異度，并能快速檢測(cè)，在病原體檢測(cè)及分子診斷中被廣泛應(yīng)用。該技術(shù)擴(kuò)充了新型冠狀病毒的檢測(cè)手段，但等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)具有引物設(shè)計(jì)要求高、不能擴(kuò)增較長(zhǎng)目的片段、易產(chǎn)生假陽(yáng)性結(jié)果等局限性，其在新型冠狀病毒的檢測(cè)中能否克服上述缺陷，達(dá)到快速、精準(zhǔn)檢測(cè)的目的，仍有待于臨床進(jìn)一步應(yīng)用評(píng)估。

雜交捕獲免疫熒光法可快速檢測(cè)病原體核酸，無(wú)須核酸提取純化，無(wú)須PCR擴(kuò)增，通過(guò)處理液直接裂解病原體并釋放靶核酸，靶核酸和探針形成DNA/RNA雜交體，熒光粒子對(duì)DNA/RNA雜交體進(jìn)行熒光信號(hào)識(shí)別，實(shí)現(xiàn)對(duì)標(biāo)本中目標(biāo)核酸的定性判斷。

3.1.2核酸檢測(cè)過(guò)程的質(zhì)量保證 經(jīng)過(guò)衛(wèi)生健康行政部門(mén)檢查認(rèn)證通過(guò)，具備生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增檢測(cè)能力，滿足國(guó)家規(guī)定的開(kāi)展新型冠狀病毒核酸檢測(cè)能力條件的醫(yī)療機(jī)構(gòu)(含醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室)，可開(kāi)展新型冠狀病毒核酸檢測(cè)服務(wù)。

目前使用的核酸檢測(cè)試劑盒有部分缺乏充分的臨床評(píng)估，臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)選擇國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的試劑開(kāi)展臨床檢測(cè)，并在正式使用試劑前進(jìn)行性能驗(yàn)證。在實(shí)際檢測(cè)中應(yīng)嚴(yán)格按照操作規(guī)程，注意規(guī)范各種細(xì)節(jié)，避免假陰性及假陽(yáng)性結(jié)果的產(chǎn)生，保證結(jié)果快速、準(zhǔn)確。

3.1.2.1性能驗(yàn)證 性能驗(yàn)證參數(shù)至少包括精密度、符合率和檢出限，同時(shí)還需要在臨床檢測(cè)過(guò)程中累積室內(nèi)質(zhì)量控制和臨床標(biāo)本檢測(cè)得到的數(shù)據(jù)，以及與其他實(shí)驗(yàn)室間的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，開(kāi)展進(jìn)一步的評(píng)價(jià)和其他性能指標(biāo)的驗(yàn)證(如特異度、抗干擾能力等)。通過(guò)性能驗(yàn)證形成實(shí)驗(yàn)室最優(yōu)的檢測(cè)系統(tǒng)，建立具有可操作性的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOPs)。

試劑和關(guān)鍵耗材(離心管、吸頭等)在正式用于常規(guī)檢測(cè)前，應(yīng)進(jìn)行耗材質(zhì)檢。使用的關(guān)鍵耗材應(yīng)不含抑制物，僅使用帶濾芯的吸頭。試劑及關(guān)鍵耗材更換批號(hào)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)新批號(hào)的試劑和關(guān)鍵耗材進(jìn)行批間差異的質(zhì)量檢驗(yàn)。不同批號(hào)試劑間的差異驗(yàn)證，建議選擇陰性(2份)和陽(yáng)性(3份，其中至少1份是弱陽(yáng)性)的樣品，使結(jié)果符合預(yù)期。

3.1.2.2室內(nèi)質(zhì)量控制 開(kāi)展新型冠狀病毒感染檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室必須建立健全生物安全防范、技術(shù)操作規(guī)程、質(zhì)量保證措施及結(jié)果報(bào)告的規(guī)范。每批檢測(cè)至少包括1份弱陽(yáng)性質(zhì)控品(通常為檢測(cè)限的3倍)和3份陰性質(zhì)控品(通常2份為試劑盒自帶陰性質(zhì)控品，1份為生理鹽水標(biāo)本)，質(zhì)控品應(yīng)隨機(jī)放在臨床標(biāo)本中參與從提取到擴(kuò)增檢測(cè)的全過(guò)程。弱陽(yáng)性質(zhì)控品測(cè)定應(yīng)為陽(yáng)性，3份陰性質(zhì)控品應(yīng)全部為陰性，視為在控。反之，則為失控，不可發(fā)出報(bào)告，應(yīng)及時(shí)分析原因，必要時(shí)重新檢測(cè)標(biāo)本。當(dāng)臨床陽(yáng)性標(biāo)本不易獲得時(shí)，可使用質(zhì)控品稀釋。每次檢測(cè)后，記錄弱陽(yáng)性質(zhì)控品檢測(cè)的循環(huán)閾值(Ct值)。

對(duì)所用儀器(生物安全柜、提取儀和擴(kuò)增儀等)按要求進(jìn)行驗(yàn)證和校準(zhǔn)，對(duì)儀器(如涉及2臺(tái)或以上儀器)、人員(所有檢測(cè)人員)、方法(如涉及2種不同試劑/方法)和試劑(不同批號(hào)間)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)比對(duì)。

建議每次試驗(yàn)帶入1份生理鹽水/焦碳酸二乙酯(DEPC)處理水，開(kāi)蓋放置在提取儀或操作臺(tái)面上過(guò)夜，用于環(huán)境污染的評(píng)估。建議選擇能監(jiān)控從采樣、提取、反轉(zhuǎn)錄到擴(kuò)增整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的試劑。如擴(kuò)增人核糖核酸酶(RNase)P基因作為內(nèi)部對(duì)照，以避免標(biāo)本因采樣問(wèn)題(如拭子未刮到上皮細(xì)胞)或?qū)嶒?yàn)操作不當(dāng)(如保存、運(yùn)輸不當(dāng)，核酸提取過(guò)程中的RNA降解等)引起假陰性結(jié)果。建議弱陽(yáng)性標(biāo)本應(yīng)至少用2個(gè)廠家的試劑復(fù)核，以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性。

3.1.2.3室間質(zhì)量控制 每家檢測(cè)機(jī)構(gòu)保證首次開(kāi)展新型冠狀病毒核酸檢測(cè)前參加1次室間質(zhì)評(píng)和生物安全督導(dǎo)，并合格；以后必須定期(至少每年1次)參加上海市或其他省級(jí)以上臨床檢驗(yàn)中心組織的室間質(zhì)評(píng)和生物安全督導(dǎo)，并合格。檢測(cè)機(jī)構(gòu)室間質(zhì)評(píng)和生物安全督導(dǎo)結(jié)果不合格，不允許開(kāi)展新型冠狀病毒檢測(cè)。

3.1.3結(jié)果報(bào)告 應(yīng)根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)判讀結(jié)果。如檢測(cè)結(jié)果為陰性，檢測(cè)機(jī)構(gòu)告知被檢測(cè)人員或單位檢測(cè)結(jié)果，并出具檢測(cè)報(bào)告。檢測(cè)報(bào)告應(yīng)統(tǒng)一備注：“檢測(cè)結(jié)果僅適用于此次采集標(biāo)本。單次核酸檢測(cè)陰性不能完全排除新型冠狀病毒感染”。如檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性，檢測(cè)機(jī)構(gòu)應(yīng)立即報(bào)告所在地區(qū)疾病預(yù)防控制中心，將陽(yáng)性標(biāo)本送至疾病預(yù)防控制中心復(fù)核；同時(shí)，聯(lián)系陽(yáng)性結(jié)果人員，協(xié)調(diào)安排急救車輛將其轉(zhuǎn)送至醫(yī)療機(jī)構(gòu)發(fā)熱門(mén)診隔離觀察，按照規(guī)范流程和要求進(jìn)行進(jìn)一步診治排查。根據(jù)《臨床基因檢驗(yàn)診斷報(bào)告模式專家共識(shí)》[5]及我國(guó)臨床實(shí)踐現(xiàn)狀，核酸檢測(cè)結(jié)果應(yīng)包括定性結(jié)果[(陽(yáng)性/陰性)或(檢出/未檢出)]、方法學(xué)、檢出限及必要的臨床建議。

3.2血清抗體檢測(cè) 新型冠狀病毒肺炎發(fā)病3～5 d后，血清特異性抗體逐漸產(chǎn)生，首先出現(xiàn)的是IgM抗體，然后出現(xiàn)IgG抗體。《新型冠狀病毒肺炎診療方案(試行第七版)》[6]明確將抗體檢測(cè)結(jié)果納入確診病例的診斷標(biāo)準(zhǔn)，以及疑似病例的排除標(biāo)準(zhǔn)。如果疑似病例血清特異性IgM和IgG抗體陽(yáng)性，IgG抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽(yáng)性或恢復(fù)期較急性期有4倍及以上升高，則可以診斷其感染了新型冠狀病毒。疑似病例的排除標(biāo)準(zhǔn)：需要同時(shí)滿足病毒核酸檢測(cè)結(jié)果陰性，以及發(fā)病7 d后新型冠狀病毒IgM和IgG抗體仍為陰性兩個(gè)條件。

有些患者無(wú)法觀察到新型冠狀病毒IgG抗體出現(xiàn)4倍及以上升高，這可能與檢測(cè)抗體時(shí)已進(jìn)入了IgG抗體平臺(tái)期有關(guān)。因此，對(duì)這些患者建議結(jié)合流行病學(xué)史、臨床癥狀和影像學(xué)檢查來(lái)綜合判斷。

3.2.1檢測(cè)方法 目前檢測(cè)抗體常用的方法有酶聯(lián)免疫吸附法、膠體金法、化學(xué)發(fā)光法等。目前已獲得國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的新型冠狀病毒IgM/IgG抗體檢測(cè)試劑盒主要基于膠體金法。肢體金法無(wú)須對(duì)標(biāo)本進(jìn)行特殊處理，僅需少量血液標(biāo)本即可在15 min內(nèi)通過(guò)肉眼觀察到檢測(cè)結(jié)果，突破了人員、場(chǎng)地對(duì)現(xiàn)有檢測(cè)技術(shù)的限制，縮短了檢測(cè)時(shí)間，操作方便快速，成本較低，應(yīng)用范圍廣，適合在基層醫(yī)療單位及現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)中廣泛使用，但無(wú)法滿足高通量檢測(cè)的要求，且無(wú)法定量，檢測(cè)靈敏度也低于其他兩種方法。

磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢測(cè)IgM/IgG抗體和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)N蛋白的試劑盒也通過(guò)了審批。酶聯(lián)免疫吸附法的靈敏度較高，載體標(biāo)準(zhǔn)化難度較低，但檢測(cè)速度慢、易污染、步驟較為煩瑣。磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法具有操作方便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、結(jié)果準(zhǔn)確性高且穩(wěn)定、自動(dòng)化程度高和檢測(cè)速度快等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)試劑無(wú)放射性污染，適合高通量檢測(cè)，但成本相對(duì)較高，依賴于大型儀器設(shè)備。

3.2.2抗體檢測(cè)過(guò)程的質(zhì)量保證

3.2.2.1性能驗(yàn)證 性能驗(yàn)證參數(shù)至少包括精密度、符合率和檢出限，同時(shí)還需要在臨床檢測(cè)過(guò)程中累積室內(nèi)質(zhì)控和臨床標(biāo)本檢測(cè)得到的數(shù)據(jù)，以及與其他實(shí)驗(yàn)室間的結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，開(kāi)展進(jìn)一步的評(píng)價(jià)和其他性能指標(biāo)的驗(yàn)證(如精密度、符合率等)。通過(guò)性能驗(yàn)證形成實(shí)驗(yàn)室最優(yōu)的檢測(cè)系統(tǒng)，建立具有可操作性的SOPs。

3.2.2.2質(zhì)量控制 建議每批檢測(cè)設(shè)立1個(gè)陽(yáng)性質(zhì)控、1個(gè)陰性質(zhì)控。陽(yáng)性質(zhì)控檢測(cè)為陽(yáng)性，陰性質(zhì)控檢測(cè)為陰性，視為在控。反之，則為失控，不可發(fā)出報(bào)告，應(yīng)分析原因，必要時(shí)重新檢測(cè)標(biāo)本。對(duì)所用儀器進(jìn)行驗(yàn)證和校準(zhǔn)，對(duì)儀器(如涉及 2 臺(tái)或以上儀器)、人員(所有檢測(cè)人員)、方法(如涉及 2 種不同試劑/方法)和試劑(不同批號(hào)間)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)比對(duì)。建議弱陽(yáng)性標(biāo)本應(yīng)至少用2個(gè)廠家的試劑復(fù)核，盡可能使用包被抗原基本一致的試劑盒。若包被抗原不一致，檢測(cè)結(jié)果可能有所不同，例如包被S、N或S+N的不同，檢測(cè)結(jié)果有可能不一致。

3.2.3核酸、抗體聯(lián)合檢測(cè)的結(jié)果報(bào)告 新型冠狀病毒肺炎發(fā)病3～5 d后，血清特異性抗體逐漸產(chǎn)生，首先出現(xiàn)的是IgM抗體，然后出現(xiàn)IgG抗體。因此，IgM抗體陽(yáng)性提示近期急性感染，IgG抗體陽(yáng)性提示既往感染。血清特異性抗體陽(yáng)性并不能說(shuō)明患者沒(méi)有傳染性，其體內(nèi)還可能有少量病毒復(fù)制。因此，抗體的出現(xiàn)不能作為出院的標(biāo)準(zhǔn)，抗體在疾病痊愈后可以維持很長(zhǎng)時(shí)間?？贵w檢測(cè)主要用于回顧性診斷以及對(duì)核酸檢測(cè)結(jié)果存疑時(shí)的輔助診斷，不能用于新型冠狀病毒肺炎的確診和排除，僅在無(wú)法使用RT-PCR時(shí)才建議使用血清學(xué)抗體進(jìn)行診斷，不適用于一般人群的篩查。

IgM/IgG抗體初次檢測(cè)可能出現(xiàn)的結(jié)果有IgM(+)/IgG(-)、IgM(+)/IgG(+)、IgM(-)/IgG(+)和IgM(-)/IgG(-)4種模式，可按表1所示流程進(jìn)行檢測(cè)以判斷患者是否為急性或近期感染。

表1 新型冠狀病毒核酸與抗體檢測(cè)結(jié)果解讀

核酸陰性結(jié)果也不能排除新型冠狀病毒感染，需要排除可能產(chǎn)生假陰性的因素，包括：(1)標(biāo)本質(zhì)量差，比如口、咽等部位的呼吸道標(biāo)本；(2)標(biāo)本收集的過(guò)早或過(guò)晚；(3)沒(méi)有正確保存、運(yùn)輸和處理標(biāo)本；(4)技術(shù)本身存在的原因，如病毒變異、PCR抑制等。

抗體檢測(cè)可能會(huì)因?yàn)闃?biāo)本中存在干擾物質(zhì)(如類風(fēng)濕因子、異嗜性抗體、補(bǔ)體、溶菌酶等)、標(biāo)本溶血、標(biāo)本被細(xì)菌污染、標(biāo)本凝固不全殘留有纖維蛋白原等因素影響而出現(xiàn)“假陽(yáng)性”結(jié)果。同時(shí)，由于血清學(xué)方法存在一定的窗口期以及檢測(cè)試劑盒靈敏度不同也會(huì)出現(xiàn)“假陰性”結(jié)果。因此，抗體檢測(cè)必須采用IgM和IgG抗體同時(shí)檢測(cè)的方法且通常需多次(2次以上)檢測(cè)確認(rèn)。

核酸和抗體檢測(cè)結(jié)果不能作為新型冠狀病毒肺炎確診和排除的唯一依據(jù)，應(yīng)結(jié)合患者流行病學(xué)史、臨床癥狀和其他實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果綜合判斷。

4 生物安全要求[7]

4.1病毒核酸檢測(cè) 病毒核酸檢測(cè)應(yīng)在二級(jí)生物安全及以上實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展。

4.1.1一般患者(感染新型冠狀病毒的概率較低) 采樣者須二級(jí)生物安全防護(hù)。

4.1.2疑似患者 采樣者應(yīng)采用三級(jí)生物安全防護(hù)，實(shí)驗(yàn)室按國(guó)家相關(guān)規(guī)定做好生物安全方面的工作。操作不開(kāi)蓋的血常規(guī)、血清學(xué)標(biāo)志物等檢測(cè)項(xiàng)目時(shí)，實(shí)驗(yàn)室人員至少采用二級(jí)生物安全防護(hù)；進(jìn)行核酸檢測(cè)必須采用三級(jí)生物安全防護(hù)。

4.1.3確診患者 采樣和檢測(cè)人員應(yīng)采用三級(jí)生物安全防護(hù)，實(shí)驗(yàn)室按國(guó)家相關(guān)規(guī)定做好生物安全方面的工作。實(shí)驗(yàn)室接收和處理標(biāo)本應(yīng)進(jìn)行三級(jí)生物安全防護(hù)，手工檢測(cè)的項(xiàng)目應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行。進(jìn)行核酸檢測(cè)必須采用三級(jí)生物安全防護(hù)。

4.2實(shí)驗(yàn)室清潔消毒

4.2.1實(shí)驗(yàn)室空氣消毒 實(shí)驗(yàn)室每次檢測(cè)完畢后，應(yīng)進(jìn)行紫外線消毒至少30 min。

4.2.2工作臺(tái)面、地面消毒 每天檢測(cè)后使用0.55%及以上含有效氯的消毒液進(jìn)行臺(tái)面、地面消毒。垃圾桶及垃圾袋應(yīng)噴灑0.55%及以上含有效氯的消毒液。

4.2.3生物安全柜消毒 每天檢測(cè)后用75%乙醇對(duì)生物安全柜進(jìn)行擦拭。配置紫外燈的生物安全柜，每次檢測(cè)完畢后，應(yīng)進(jìn)行紫外線消毒至少30 min。沒(méi)有配置紫外燈的生物安全柜，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，風(fēng)機(jī)開(kāi)啟30 min后關(guān)閉。

4.2.4轉(zhuǎn)運(yùn)容器消毒 轉(zhuǎn)運(yùn)及存放標(biāo)本的容器使用前后用0.55%含有效氯的消毒液或75%乙醇進(jìn)行擦拭或噴灑消毒。

4.2.5離心機(jī) 標(biāo)本離心無(wú)意外情況發(fā)生，離心停止10 min以上，開(kāi)離心機(jī)蓋用0.55%含有效氯的消毒液或75%乙醇進(jìn)行擦拭或噴灑消毒。

4.2.6標(biāo)本銷毀 完成檢測(cè)后，標(biāo)本應(yīng)在生物安全柜中重新加蓋或塞子(新的)，按規(guī)定保存。檢測(cè)結(jié)果陰性的標(biāo)本，保存2周后高壓滅菌銷毀并做好消毒、銷毀記錄。標(biāo)本經(jīng)高壓滅菌處理后應(yīng)符合生物安全要求，符合感染管理規(guī)范。廢棄物管理見(jiàn)《新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南(第二版)》[8]。

4.2.7檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性的標(biāo)本 在完成檢測(cè)工作后應(yīng)對(duì)剩余標(biāo)本執(zhí)行雙人、雙鎖、專柜、超低溫暫時(shí)保存并配備探頭監(jiān)視；及時(shí)通知上級(jí)疾病預(yù)防控制中心檢測(cè)部門(mén)，聯(lián)系取樣和復(fù)檢工作。