高效液相色譜法測定黃瓜果實中6-芐基腺嘌呤殘留量

摘 要：建立了測量黃瓜果實中6-芐基腺嘌呤殘留量的高效液相色譜法。樣品經(jīng)甲醇提取，C18固相萃取柱凈化，濃縮定容后上樣分析。該方法在0.04～10.0 μg/mL范圍內(nèi)線性良好，R2為0.999 8，檢出限為0.1 mg/kg，定量限為0.2 mg/kg，精密度為0.90%，回收率在86.77%～96.45%范圍內(nèi)，重復(fù)性為3.69%。該方法適用于黃瓜果實中6-芐基腺嘌呤殘留量的測定。

關(guān)鍵詞：6-芐基腺嘌呤（6-BA）;黃瓜;高效液相色譜法

芐基腺嘌呤（6-BA）是一種植物生長調(diào)節(jié)劑，屬于人工合成細(xì)胞分裂素，在水果、蔬菜的保鮮等方面有重要應(yīng)用。6-BA在黃瓜種子發(fā)芽、幼苗幼果生長等過程中也有應(yīng)用，可促進(jìn)黃瓜果實生長發(fā)育，提高果實品質(zhì)和產(chǎn)量[1-2]。但6-BA具有一定毒性，人體過量攝入會刺激皮膚黏膜，出現(xiàn)食道和胃黏膜損傷、惡心、嘔吐等癥狀[3]。

因此檢測黃瓜果實中6-BA殘留量很有必要，蔬菜中6-BA的檢測主要有高效液相色譜法和高效液相色譜-質(zhì)譜法等方法[4-5]。本試驗利用甲醇提取，固相萃取柱凈化，高效液相色譜-標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)法定量，操作簡便、準(zhǔn)確性好，可用于黃瓜果實中6-BA殘留量的測定。

1 材料與方法

1.1 試劑耗材與儀器

6-芐基腺嘌呤標(biāo)準(zhǔn)品（98.51%，Dr.Ehrenstorfer）;甲醇（色譜級，Dikma）;乙酸銨（色譜級，科密歐）;冰乙酸（分析純，開封化學(xué)試劑總廠）;C18固相萃取柱（1 g/6 mL，上海安譜實驗科技股份有限公司）。

U3000高效液相色譜儀（Thermo）;BSA224S-CW電子天平（賽多利斯）;3K15高速冷凍離心機（Sigma）;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（IKA）;KQ-400DE數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）;JYL-Y85高速破壁調(diào)理機（九陽）。

1.2 儀器條件

色譜柱：XBridge?C18柱，4.6 mm×

250 mm×5 μm（waters）;檢測器：紫外檢測器;波長：267 nm;流動相：甲醇+乙酸銨溶液（0.02 mol/L）=

50+50;柱溫：30 ℃;流速：1.0 mL/min;

進(jìn)樣量：10 μL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取6-BA標(biāo)準(zhǔn)品0.010 0 g，用甲醇溶解定容至100 mL，混勻，即得濃度為100 μg/mL的溶液。分別精密量取100 μg/mL溶液10.0、5.0 mL和2.0 mL，用甲醇定容至100 mL，即得濃度分別為10.0、5.0 μg/mL和2.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液。

分別精密量取2.0 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲備溶液5.0、2.0、1.0、5.0 mL和

2.0 mL，用甲醇定容至10、10、10、100 mL和100 mL，即得濃度分別為1.0、0.4、0.2、0.1μg/mL和0.04 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.4 樣品的制備和測定

稱取10 g（精確到0.001 g）均質(zhì)后的樣品于50 mL離心管中，加20 mL甲醇，超聲提取15 min，以10 000 r/min離心10 min，上清液轉(zhuǎn)入200 mL梨形瓶中，樣品再次用20 mL甲醇超聲提取15 min，離心合并上清液，于

50 ℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至盡干，殘液以2 mL/min的流速過預(yù)先活化好的固相萃取柱，用少量水洗滌梨形瓶，洗液過固相萃取柱，再用5 mL水洗滌固相萃取柱，去除雜質(zhì)后用甲醇洗脫并定容至

5 mL，混勻后過0.22 μm微孔濾膜，供檢測用。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜圖

將樣品按照“1.2儀器條件”進(jìn)樣檢測，所得圖譜如圖1所示，在目標(biāo)物時間附近不出峰，為陰性樣品。將標(biāo)準(zhǔn)儲備液按照“1.2儀器條件”進(jìn)樣檢測，目標(biāo)物在7.490 min出峰，見圖2。

2.2 線性范圍和檢出限、定量限

選取濃度為0.04、0.1、02、0.4、1.0、2.0、5.0 μg/mL與10.0 μg/mL的6-BA標(biāo)準(zhǔn)溶液，按“1.2儀器條件”進(jìn)樣測峰面積，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，進(jìn)行線性分析，結(jié)果表明該方法在0.04～10.0 μg/mL線性范圍內(nèi)線性良好，見表1。檢出限定量限的確定方法：向陰性樣品中加入從低到高不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測定，以3倍和10倍信噪比（S/N）對應(yīng)的6-BA濃度作為檢出限和定量限。

2.3 精密度試驗

用0.4 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)進(jìn)樣測定8次，測定峰面積，計算精密度。結(jié)果見表2，測得精密度為0.90%，符合要求。

2.4 回收率試驗

向10 g陰性樣品中添加一定量標(biāo)準(zhǔn)溶液，每個添加水平設(shè)定3次平行，結(jié)果見表3，加標(biāo)水平在99.4951 μg/mL（0.5 mL）時的色譜圖見圖3，

平均回收率在86.77%～96.45%內(nèi)，符合回收率要求。

3 結(jié)論

本試驗采用高效液相色譜法測定黃瓜果實6-BA殘留量，在0.04～10.0 μg/mL范圍內(nèi)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線，確定方法檢出限、定量限，驗證了回收率、精密度、重復(fù)性等指標(biāo)。該方法準(zhǔn)確高效，滿足試驗要求，為黃瓜果實6-BA殘留量的檢測提供了有效參考。

參考文獻(xiàn)

[1]劉運正，于洋，等.6-芐基腺嘌呤對黃瓜幼果生長及其激素含量的影響[J].北方園藝，2006（6）：13-15.

[2]張平.GA和6-BA對黃瓜產(chǎn)量和果實生長發(fā)育的影響[D].沈陽：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)，2005.

[3]穆嬌嬌，崔相勇.高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測豆芽中的6-芐基腺嘌呤含量[J].食品安全導(dǎo)刊，2016（8）：66-67.

[4]王成梅，張廣昊.液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測定蔬菜中6-芐基腺嘌呤的研究[J].食品安全導(dǎo)刊，2016（9）：139-140.

[5]馬雪豐，陳果，等.QuEChERS-高效液相色譜法對蔬菜中6-芐基腺嘌呤殘留量的測定[J].農(nóng)藥，2016（2）：124-126.

作者簡介：袁曉轉(zhuǎn)（1988—），女，河南洛陽人，碩士，助理工程師。研究方向：食品檢測。