IL-35在RA患者中水平變化及其與疾病相關(guān)性

吳濤　曹天歌　王文華　于海躍　宋健　李榮濱

【摘 要】 目的：探討類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)（rheumatoid arthritis，RA）患者體內(nèi)白介素-35（interleukin-35，IL-35）水平變化及其與疾病的相關(guān)性。方法：選取2017年5月至2018年9月齊齊哈爾市第一醫(yī)院收治的RA早期患者50例、RA中晚期患者50例以及骨關(guān)節(jié)炎（Osteoarthritis，OA）患者50例為研究對(duì)象，分別測(cè)定研究對(duì)象的血清和關(guān)節(jié)液中IL-35水平，血清C反應(yīng)蛋白（CRP）水平，RA患者的疾病程度通過28個(gè)關(guān)節(jié)活動(dòng)指數(shù)進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果：與OA患者比較，RA早期與RA中晚期患者治療前時(shí)血清IL-35水平顯著升高（P<0.05）;治療8周后，兩期患者IL-35水平均下降（P<0.05），IL-35能夠促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，并呈現(xiàn)劑量依賴性。中晚期RA患者中，關(guān)節(jié)液IL-35水平與CRP水平（r=0.327，P<0.05）及DAS28值（r=0.425，P<0.05）分別呈現(xiàn)中等相關(guān)。結(jié)論：IL-35在RA患者中發(fā)揮著重要作用。

【關(guān)鍵詞】 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié);OA;白細(xì)胞介素-35;血清;關(guān)節(jié)液

RA是一種慢性自身免疫性疾病，以往研究表明，其發(fā)病機(jī)制與許多細(xì)胞因子包括腫瘤壞死因子（TNF-α），白介素（IL-17）和IL-6相關(guān)[1]。RA是公認(rèn)的炎癥性關(guān)節(jié)炎，2010年估計(jì)全球患病率為0.24%，女性的這一比例大約是男性的兩倍。近年來研究表明，IL-35，一種抗炎細(xì)胞因子，膠原誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎（CIA）可減輕癥狀，降低CIA的發(fā)生率，防止骨損傷的進(jìn)展[2-3]，然而IL-35在人類RA中的作用還無被闡明。本研究通過研究RA患者血清IL-35水平，以及疾病持續(xù)時(shí)間、疾病活動(dòng)度、自身抗體產(chǎn)生等臨床特征，旨在幫助指導(dǎo)臨床對(duì)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的診治及對(duì)藥物治療效果的評(píng)價(jià)。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2017年5月至2018年9月齊齊哈爾市第一醫(yī)院收治的RA早期患者50例、RA中晚期患者50例以及OA患者50例為研究對(duì)象，所有研究對(duì)象均熟知研究流程，并簽署知情同意書，該研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 治療方法

將來氟米特按說明書劑量給與各組患者應(yīng)用治療，每日晚餐后頓服給藥，每晚20mg，治療周期為8周。

1.3 RA

患者的疾病程度評(píng)估通過28個(gè)關(guān)節(jié)活動(dòng)指數(shù)（28-Joint Count Disease Activity Score，DAS28）進(jìn)行RA患者的疾病程度評(píng)估。

1.4 標(biāo)本采集及指標(biāo)檢測(cè)

所有受試對(duì)象均于清晨空腹采集肘部靜脈血5mL，同時(shí)實(shí)施關(guān)節(jié)穿刺術(shù)，收集關(guān)節(jié)液。送至本院檢驗(yàn)科進(jìn)行IL-35水平測(cè)定。

1.5 成骨細(xì)胞培養(yǎng)

將購(gòu)買的成骨細(xì)胞放入37℃水浴鍋復(fù)蘇，加入1640常規(guī)培養(yǎng)基，加入10% FBS于培養(yǎng)基中，放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)。

1.6 CCK-8檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖情況

將20μL CCK-8溶液加入到96孔板孔內(nèi)，按照試劑盒說明書操作，利用酶標(biāo)儀測(cè)定450nm處的OD值。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

研究數(shù)據(jù)采用SPSS 17.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。組間比較采用重復(fù)測(cè)量，相關(guān)性采用Pearson's積差相關(guān)分析，P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床資料

RA早期組、RA中晚期組及OA患者在年齡、性別、抗-CCP陽性構(gòu)成方面差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;與OA組患者比，RA早期、RA中晚期患者BMI降低（P<0.05）;早期及中晚期RA患者DAS治療后均有所改善，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。

2.2 各組患者的血清、關(guān)節(jié)液IL-35水平變化情況

OA患者及藥物治療8周后的RA早期、RA中晚期患者其血清IL-35水平均明顯低于前期（P<0.01）。RA中晚期患者治療前時(shí)的關(guān)節(jié)液IL-35水平高于OA患者關(guān)節(jié)液水平（P<0.01），且明顯高于三組患者各時(shí)點(diǎn)的血清IL-35水平（P<0.01）。見表2。

2.3 各組患者的血清、關(guān)節(jié)液IL-35水平與RA疾病活動(dòng)度的相關(guān)性

相關(guān)性分析結(jié)果表明，所有早期RA患者、中后期RA患者及OA患者，其血清IL-35水平與CRP水平、DAS28值均無相關(guān)性。而關(guān)節(jié)液IL-35水平與CRP水平及DAS28值分別呈現(xiàn)中等相關(guān)。見表3、表4。

2.4 IL-35促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖能力，并呈現(xiàn)劑量依賴性

用梯度濃度的IL-35刺激成骨細(xì)胞，72h后，25ng/mL的IL-35刺激的成骨細(xì)胞增殖能力顯著高于無IL-35刺激的成骨細(xì)胞（P<0.05），成骨細(xì)胞的增殖能力隨著濃度升高而升高，其差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。見圖1。

3 討論

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）是一種慢性自身免疫性疾病，其特點(diǎn)是炎癥和關(guān)節(jié)惡化，可導(dǎo)致功能喪失，降低生活質(zhì)量，并提高發(fā)病率和死亡率[4-5]，本研究利用來氟米特對(duì)RA進(jìn)行周期為8周的治療，觀察治療前后相關(guān)炎癥因子的變化。

通過對(duì)臨床上確診為RA不同時(shí)期患者的觀察研究，發(fā)現(xiàn)RA患者血清IL-35水平有很強(qiáng)的相關(guān)性。推測(cè)IL-35的內(nèi)源性升高可能參與炎癥因子激活的負(fù)反饋免疫反應(yīng)，而負(fù)反饋免疫反應(yīng)可能參與炎癥因子激活的負(fù)反饋免疫反應(yīng)，對(duì)抗過度炎癥反應(yīng)，最終對(duì)RA患者起到保護(hù)作用，IL-35水平變化可能反映疾病的活動(dòng)度而不反映治療的類型，這對(duì)了解RA的致病機(jī)制具有重要作用。

綜上所述，本研究顯示，血清、關(guān)節(jié)液中的IL-35在RA疾病的進(jìn)展和控制中發(fā)揮著重要作用。這對(duì)于RA的診斷有著重要的臨床意義。但是本研究仍然存在一定的局限性，觀察到IL-35在RA治療前后的變化，但是對(duì)其在RA中發(fā)揮的作用機(jī)制卻未進(jìn)行研究，這將在接下來的研究中進(jìn)行設(shè)計(jì)并實(shí)施。

參考文獻(xiàn)

[1] 粟深偉，陸進(jìn)明，盛君，等.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清白介素-33、白介素-35表達(dá)及其臨床意義[J].皖南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，31（06）：450-452.

[2] 王小茜，邢陳，黎燕，等.IL-12家族在自身免疫性疾病中的免疫調(diào)節(jié)作用[J].軍事醫(yī)學(xué)，2015，39（08）：637-640.

[3] 李澤，韓崇旭.IL-35在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中抗炎促炎作用及與疾病指標(biāo)的關(guān)系[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床，2019，16（09）：1299-1301.

[4] 鄧代華.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血白細(xì)胞介素-35的表達(dá)及臨床意義[D].2011，瀘州醫(yī)學(xué)院.

[5] 孟博，謝而付，周春剛.類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清IL-35的水平及其與疾病活動(dòng)度的關(guān)系[J].臨床檢驗(yàn)雜志，2016，34（04）：277-280.