TIP30、Vav3的表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)及預(yù)后的相關(guān)性

孫明炯 尚占民

胃癌是最常見的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，易侵襲和轉(zhuǎn)移，進展期胃癌5年生存率約為30%，預(yù)后極差［1］。分子生物學(xué)研究表明，胃癌發(fā)病受原癌基因、抑癌基因、凋亡基因等多種基因調(diào)控［2］。隨著基因研究的深入，人們期望胃癌相關(guān)基因的研究，能夠為胃癌的早期診斷、靶向治療和預(yù)后判斷提供依據(jù)。Vav3是原癌基因Vav家族成員，在胃癌組織中異常高表達(dá)，參與胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移通路，介導(dǎo)疾病進展［3］。TIP30是國外學(xué)者新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，具有絲氨酸/蘇氨酸激酶活性，通過調(diào)節(jié)RNA聚合酶Ⅱ的活化和轉(zhuǎn)錄影響細(xì)胞增殖與分化［4］。Liu 等［5］研究發(fā)現(xiàn)，TIP30 可通過抑制胃癌血管生成，抑制胃癌進展，但TIP30在胃癌組織中異常低表達(dá)。本研究分析了胃癌組織中TIP30、Vav3的表達(dá)與胃癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系，以期為胃癌的侵襲轉(zhuǎn)移和預(yù)后判斷提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 基本資料 選擇我院于2015年1月至2016年1月收治的120例行胃癌切除的胃癌病人（術(shù)后進行常規(guī)化療）作為研究對象。其中，男82例，女38例；年齡 60～85歲，平均（68.2±4.5）歲；分化程度G1期12例，G2期27例，G3期81例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期38例，Ⅲ～Ⅳ期82例；腫瘤直徑≥5 cm 66例，＜5 cm 54例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移72例，血管浸潤73例。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）經(jīng)病理確診為胃癌；（2）有完整的臨床資料；（3）術(shù)前未進行化療或生物治療；（4）原發(fā)性胃癌；（5）無免疫治療史；（6）年齡 ＞60歲。病人均知情同意，并簽署知情同意書。

1.3 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）手術(shù)未能切除病灶；（2）合并其他類型腫瘤；（3）腫瘤復(fù)發(fā)；（4）圍手術(shù)期因其他原因?qū)е滤劳?；?）因腫瘤破裂出血、腸梗阻、穿孔等行急診手術(shù)者。

1.4 研究方法

1.4.1 TIP30、Vav3表達(dá)測定：采用免疫組化法定量檢測癌組織和癌旁組織中TIP30、Vav3的表達(dá)情況。收集癌組織和癌旁組織（鏡檢無癌細(xì)胞，距離腫瘤邊緣＞3 cm），4%多聚甲醛固定，常規(guī)石蠟切片，脫蠟至水，3%雙氧水孵育，高溫抗原修復(fù)后，切片。置于內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑中放置10 min，PBS洗滌，依次加入一抗、二抗，滴加二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色，蘇木精復(fù)染，封片，閱片。具體操作按照試劑盒說明書進行（試劑盒購于北京博奧森生物公司）。

1.4.2 結(jié)果判定：由2名病理專業(yè)醫(yī)生按照半定量積分法進行評分，計算平均值。Vav3以細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜染成黃色或棕黃色為陽性表達(dá)，TIP30以細(xì)胞質(zhì)染成棕褐色團塊或顆粒為陽性表達(dá)。陽性染色細(xì)胞百分比評分：陽性細(xì)胞染色百分比＜25%記1分，25%～49%記2分，50%～74%記3分，＞75%記4分；染色強度評分：染色為棕褐色記2分，棕黃色記1分，未著色或淡黃色計0分。每張切片選擇5個高倍視野觀察，計算陽性染色細(xì)胞百分比評分與染色強度評分的和，0～3分為陰性，4～8分為陽性。

1.5 預(yù)后評價 所有病人隨訪3年，記錄病人預(yù)后。依據(jù)預(yù)后將病人分為存活組和死亡組，比較2組臨床特征以及癌組織TIP30、Vav3的表達(dá)情況。

1.6 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 19.0進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析。計數(shù)資料以例數(shù)表示，TIP30、Vav3的表達(dá)與病理參數(shù)的關(guān)系及預(yù)后的單因素分析采用χ2檢驗，預(yù)后的多因素分析采用Cox比例風(fēng)險回歸模型，TIP30、Vav3預(yù)測胃癌病人預(yù)后的敏感性與特異性采用ROC曲線分析。以P＜0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

隨訪截止時間為2019年2月，所有病人均獲得隨訪，中位隨訪時間為35個月（2～46個月）。48例病人在隨訪期內(nèi)死于胃癌，其余72例在最后一次隨訪時仍存活，作為截尾數(shù)據(jù)處理。存活組男50例，女22例；年齡 60～84歲，平均（67.6±4.9）歲；分化程度G1期7例，G2期17例，G3期48例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期29例，Ⅲ～Ⅳ期43例；腫瘤直徑≥5 cm 46例，＜5 cm 2例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移56例；死亡組男32例，女16例，年齡 60～85歲，平均（69.1±4.9）歲；分化程度G1期5例，G2期10例，G3期33例；TNM分期Ⅰ～Ⅱ期9例，Ⅲ～Ⅳ期39例；腫瘤直徑≥5 cm 20例，＜5 cm 28例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移16例。

2.1 癌組織與癌旁組織TIP30、Vav3的表達(dá)陽性率比較 癌組織的TIP30表達(dá)陽性率低于癌旁組織，Vav3表達(dá)陽性率高于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表 1。

表1 癌組織與癌旁組織Tip30、Vav3表達(dá)陽性率比較（n，%，n=120）

2.2 TIP30、Vav3表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系 TIP30陽性表達(dá)組和Vav3陽性表達(dá)組病人的性別與陰性表達(dá)組比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤與陰性表達(dá)組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.01），見表 2。

表2 Tip30、Vav3表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系（n）

2.3 存活組與死亡組各項指標(biāo)比較 單因素分析顯示，胃癌病人的預(yù)后與腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤、TIP30、Vav3有關(guān)（P ＜ 0.05），與性別、年齡無關(guān)（P＞0.05）。見表3。

2.4 胃癌預(yù)后的COX比例風(fēng)險回歸分析 以TIP30表達(dá)、Vav3表達(dá)、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤6項指標(biāo)進行COX比例風(fēng)險回歸分析，結(jié)果顯示，TIP30陰性表達(dá)、Vav3陽性表達(dá)、TNM分期是影響預(yù)后的獨立危險因素（P＜0.05）。見表4。

2.5 TIP30、Vav3及聯(lián)合應(yīng)用預(yù)測胃癌預(yù)后的ROC曲線分析 TIP30、Vav3及聯(lián)合應(yīng)用預(yù)測胃癌預(yù)后的敏感度分別為95.8%、93.8%、84.3%，特異度為72.2%、27.8%、81.1%，AUC 為 0.834、0.712、0.893。

3 討論

胃癌是惡性程度最高的消化系統(tǒng)腫瘤，其早期篩查難度高，大部分胃癌確診時已至晚期，部分已經(jīng)侵襲轉(zhuǎn)移至腹腔、淋巴結(jié)、血行等部位，治療難度高，預(yù)后極差。胃癌相關(guān)基因研究已成為當(dāng)代醫(yī)學(xué)研究的重大課題，研究腫瘤基因的致病機制和相互作用，有望從分子水平靶向治療胃癌，減緩胃癌進展時間，提高生存期和生活質(zhì)量，改善預(yù)后。

表3 胃癌病人預(yù)后影響因素的單因素分析（n）

表4 胃癌預(yù)后的COX比例風(fēng)險回歸分析

TIP30是King等［6］新發(fā)現(xiàn)的抑癌基因，也稱NTA TIP2、CC3等，由6個外顯子構(gòu)成，可編碼242個氨基酸殘基。TIP30在腦、肌肉、胰腺、腎臟等部位高表達(dá)，但在惡性腫瘤中低表達(dá)或缺失，如甲狀腺癌［7］、腸癌［8］、肝癌［9］等。高亞麗等［10］發(fā)現(xiàn) TIP30 在乳腺癌中低表達(dá)，與乳腺癌的臨床分期、病理分級、淋巴轉(zhuǎn)移及血管浸潤有關(guān)。研究顯示，TIP30不但在非小細(xì)胞肺癌中表達(dá)降低，還與病人復(fù)發(fā)率和轉(zhuǎn)移率密切相關(guān)，能夠預(yù)測病人生存率［11］。另有資料顯示，TIP30陰性與血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）-C陽性共表達(dá)的小細(xì)胞肺癌病人預(yù)后極差［12］。體外研究顯示，TIP30基因能夠抑制肝癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移能力［13］。程智勇等［14］發(fā)現(xiàn)，TIP30 在胃癌組織中低表達(dá)，參與胃癌的發(fā)展和轉(zhuǎn)移。本研究觀察發(fā)現(xiàn)，胃癌病人TIP30低表達(dá)，與腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤密切相關(guān)，表明TIP30低表達(dá)誘導(dǎo)癌組織擴散和轉(zhuǎn)移，與前人研究一致［14］。隨訪期間，死亡組TIP30表達(dá)陰性率明顯高于存活組，是影響預(yù)后的獨立危險因素，TIP30陽性表達(dá)病人死亡風(fēng)險是陰性表達(dá)病人的0.306倍。TIP30具有促進細(xì)胞凋亡、抑制血管生成的作用，其低表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞凋亡減少，新生血管生成增加，因而預(yù)后變差［15］。另外，TIP30表達(dá)降低，導(dǎo)致正常組織凋亡抑制基因bcl-xL的基因蛋白、抗凋亡bcl-2蛋白及細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白D1的表達(dá)上調(diào)，使得半胱天冬酶3和9、p27蛋白、p53蛋白和bcl-2 相關(guān) X 蛋白（bax）表達(dá)降低［16］，從而減弱對腫瘤細(xì)胞凋亡和胃癌侵襲轉(zhuǎn)移的抑制作用。

Vav3是Vav家族蛋白的成員，也是Rho家族鳥苷酸交換因子，主要在造血系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、胃等組織中表達(dá)，在不同信號通路中具有激活自然殺傷細(xì)胞的作用。新近研究顯示，Vav3在乳腺癌、前列腺癌、直腸癌、胃癌等多種惡性腫瘤組織中高表達(dá)［17］。Boesch等［18］發(fā)現(xiàn)，Vav3在前列腺癌中的表達(dá)率為23%，在乳腺癌組織中的表達(dá)率為81%。本研究顯示，Vav3在胃癌組織中高表達(dá)，且與腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤密切相關(guān)，表明Vav3高表達(dá)與胃癌進展密切相關(guān)，可能具有促進胃癌組織惡性發(fā)展的作用。胃癌高度的侵襲力和轉(zhuǎn)移力是導(dǎo)致預(yù)后變差的重要原因。隨訪結(jié)果顯示，死亡病人的Vav3表達(dá)陽性率高，是影響預(yù)后的獨立危險因素，Vav3陽性表達(dá)病人死亡風(fēng)險是陰性表達(dá)病人的2.155倍。Vav3能夠促進三磷酸鳥苷（GTP）酶活化和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，從而促進基因轉(zhuǎn)錄和細(xì)胞轉(zhuǎn)化，誘導(dǎo)癌細(xì)胞產(chǎn)生［19］。然后，癌細(xì)胞反過來通過Rho、Ras、NF-κB等效應(yīng)分子促進腫瘤細(xì)胞增殖、抑制細(xì)胞凋亡、促進血管生成，從而導(dǎo)致胃癌惡化［20］。因此，Vav3可能是治療胃癌和改善預(yù)后的一個新靶點。

總之，胃癌組織中TIP30、Vav3表達(dá)異常，與腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、血管浸潤等病理參數(shù)存在相關(guān)性，是預(yù)測不良預(yù)后的有效指標(biāo)。