長鏈非編碼RNA作為食管癌潛在的預后生物標志物的系統(tǒng)評價及薈萃分析△

楊俊強，李文耀，張策，楊義平，高社干

河南科技大學臨床醫(yī)學院/河南科技大學第一附屬醫(yī)院腫瘤內科/河南科技大學腫瘤研究所/河南省腫瘤表觀遺傳重點實驗室，河南 洛陽4710030

食管癌的發(fā)病率居全部惡性腫瘤的第8位，病死率居全部惡性腫瘤的第6位[1]。食管癌的病理類型主要包括鱗狀細胞癌和腺癌，中國約90%的食管癌為食管鱗狀細胞癌[2]。目前主要通過臨床分期和病理分級判斷食管癌患者的預后，但相同臨床病理特征的食管癌患者也可能出現(xiàn)不同的預后[3]。因此尋找食管癌潛在的預后生物標志物顯得尤為重要。長鏈非編碼RNA（long noncoding RNA，lncRNA）是一類轉錄本超過200個堿基的RNA分子，且不能編碼蛋白質[4]。最初lncRNA被當作轉錄過程中的“噪聲”未受到關注。隨著研究的不斷深入，研究者們發(fā)現(xiàn)lncRNA參與了腫瘤細胞的增殖、凋亡、侵襲和轉移等生物學過程[5]。因此lncRNA可能在惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著重要作用[6]。盡管目前不少研究表明lncRNA可能作為食管癌潛在的預后生物標志物，但這些研究存在樣本量小、數(shù)據離散等局限性。本研究采用系統(tǒng)評價和薈萃分析的方法，評估lncRNA表達情況與食管癌患者預后的關系，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 檢索策略

在PubMed、Embase、Web of Science、中國知網和萬方數(shù)據庫中檢索相關文獻。檢索日期截至2019年9月10日。檢索關鍵詞為“l(fā)ncRNA”“食管癌”。

1.2 納入和排除標準

納入標準：①病理診斷為食管癌；②lncRNA的檢測樣本來源于組織或血清；③研究分析了lncRNA表達水平與食管癌患者預后的關系；④具有生存分析相關的風險比（hazard ratio，HR）及95%置信區(qū)間（confidence interval，CI）。排除標準：①綜述、評論、信件；②不同研究但入組患者相同。

1.3 文獻篩選和質量評估

兩位研究者根據納入和排除標準完成文獻篩選。Meta分析參考流行病學中觀察性研究的Meta分析指南（Meta-analysis of observational studies in epidemiology，MOOSE）。納入研究的質量評估包括以下6點：①描述入組患者的人種和國家；②具有清晰的研究設計；③具有完整的生存分析；④描述lncRNA的檢測方法；⑤報道lncRNA的cut-off值。未滿足上述條件的文獻將被剔除。

1.4 數(shù)據提取

兩位研究者進行數(shù)據提取工作。提取的數(shù)據包括作者姓名、國家、lncRNA名稱、患者人種、病例數(shù)、病理類型、樣本類型、lncRNA檢測方法、HR值及95%CI、P值。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用Stata 15.0軟件對數(shù)據進行統(tǒng)計分析。采用Cochran’sQ檢驗和HigginsI2檢驗分析異質性。基于合并效應量的異質性，選擇固定效應模型或隨機效應模型。當異質性明顯（I2＞50%或P＜0.05）時采用隨機效應模型，反之則采用固定效應模型。HR值及95%CI用于分析lncRNA表達情況與食管癌患者預后的關系。合并的HR值大于1表示高表達的lncRNA與較差的預后有關。

2 結果

2.1 文獻篩選結果

根據上述檢索策略，共檢出1217篇文獻。刪除重復文獻后剩余606篇文獻。

通過瀏覽標題、摘要和全文，最終篩選出25篇滿足納入、排除標準和質量評估的文獻用于后續(xù)的系統(tǒng)評價[7-31]。此外，5篇文獻用于薈萃分析[7-9,12,18]。（圖1）

2.2 lncRNA表達情況與食管癌患者預后的關系

圖1 文獻篩選流程

納入的文獻共包含3830例食管癌患者，報道了22個與食管癌患者預后相關的lncRNA。其中在食管癌中高表達的為 HOTAIR[7-9]、SPRY4-IT1[11]、MALAT1[12,18]、NEAT1[13]、PCAT-1[14]、ZEB1-AS1[15]、uc002yug.2[16]、 CCAT2[17]、 TUG1[19]、 BANCR[20]、BC200[21]、AFAP1-AS1[22]、ATB[23]、FOXD2-AS1[24]、LINC01296[25]、XIST[26]和 NORAD[27]，低 表 達 的 為LOC285194[10]、LINC00675[28]、LINC01133[29]、MEG3[30]和GAS5[31]。在研究文獻中，實時定量聚合酶鏈反應（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）用于檢測lncRNA的表達水平。大部分文獻中，研究者在食管癌與癌旁組織中均檢測了lncRNA的表達，1篇文獻中，研究者檢測了食管癌組織、癌旁組織和血漿中的lncRNA的表達。根據總生存期的HR值及95%CI，食管癌患者中過表達的HOTAIR、SPRY4-IT1、MALAT1、NEAT1、PCAT-1、ZEB1-AS1、uc002yug.2、CCAT2、TUG1、BANCR、BC200、 AFAP1-AS1、 ATB、FOXD2-AS1、LINC01296、XIST和 NORAD預示著較差的生存期。然而，低表達的LOC285194、LINC00675、LINC01133、MEG3和 GAS5預示著較差的生存期。（表 1）

2.3 HOTAIR、MALAT 1表達情況與食管癌患者預后的關系

在納入的文獻中，共有5篇文獻多次報道了食管癌患者中HOTAIR、MALAT1的表達情況及患者預后。其中3篇文獻報道了食管癌患者中HOTAIR的表達情況及患者的生存情況，Cochran’sQ和HigginsI2異質性檢驗結果顯示，各個研究間無明顯異質性（I2=0%，P=0.606）。采用固定效應模型進行薈萃分析，結果顯示，HOTAIR高表達與食管癌患者較短的生存期有關（HR=2.404，95%CI：1.661～3.479，P＜0.01）（圖 2）。2篇文獻報道了食管癌患者中MALAT1的表達情況及患者的生存情況，異質性檢驗結果顯示，2個研究間存在異質性（I2=84.1%，P=0.012）。采用隨機效應模型進行薈萃分析，結果表明，MALAT1表達水平與食管癌患者的預后無明顯相關性（HR=3.384，95%CI：0.948～12.082，P=0.060）（圖3）。由于薈萃分析的文獻數(shù)少于10篇，因此無法評估發(fā)表偏倚。

表1 食管癌患者lncRNA表達情況及預后的回顧性研究

3 討論

圖2 HOTAIR表達與食管癌患者總生存期的森林圖

圖3 MALAT 1表達與食管癌患者總生存期的森林圖

近年來，越來越多的研究證實了lncRNA參與腫瘤細胞的增殖、凋亡、侵襲、轉移等過程，并在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演重要角色[32]。先前的研究已經報道了一些lncRNA可能與食管癌的預后具有相關性。但由于樣本量小等局限性，這些研究的結論可能存在爭議。因此，本研究采用系統(tǒng)評價和薈萃分析的方法，評估lncRNA表達情況與食管癌患者預后的相關性。通過檢索和篩選共納入25篇原始文獻，包含3830例患者。通過系統(tǒng)評價發(fā)現(xiàn)，食管癌患者中高表達的HOTAIR、SPRY4-IT1、MALAT1、NEAT1、PCAT-1、ZEB1-AS1、uc002yug.2、 CCAT2、 TUG1、 BANCR、BC200、AFAP1-AS1、ATB、FOXD2-AS1、LINC01296、XIST和NORAD預示著較差的生存期，低表達的LOC285194、LINC00675、LINC01133、MEG3和GAS5預示著較差的生存期。

雖然經系統(tǒng)評價發(fā)現(xiàn)了多個與食管癌預后相關的 lncRNA，但僅有兩個 lncRNA（HOTAIR 和MALAT1）及其生存數(shù)據可以用于薈萃分析。薈萃分析結果顯示，HOTAIR高表達與食管癌患者較短的生存期有關（HR=2.404，95%CI：1.661～3.479，P＜0.01）。值得注意的是，盡管Huang等[18]研究顯示MALAT1的表達與食管癌患者預后有關（HR=6.638，95%CI：2.948～14.497，P＜0.01），但薈萃分析結果表明MALAT1的表達水平與食管癌患者的預后無明顯相關性（HR=3.384，95%CI：0.948～12.082，P=0.060）。

HOTAIR可能作為一種促癌基因在多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮作用[33]。研究表明，在多種腫瘤中高表達的HOTAIR預示著較差的生存期（HR=2.00，95%CI：1.77～2.27，P＜0.01）[34]，與本研究結果一致。此外，HOTAIR在細胞水平和分子水平上的功能可能解釋了HOTAIR與食管癌預后的相關性。研究表明，HOTAIR可以促進食管癌細胞的侵襲和轉移，并通過啟動子甲基化下調WNT抑制因子 1（WNT inhibitory factor 1，WIF1）的表達，從而活化 WNT/β-聯(lián)蛋白（β-catenin）信號通路[8]。另一項研究發(fā)現(xiàn)，敲除小鼠模型的HOTAIR基因可以抑制食管癌細胞的增殖[35]。

盡管本研究制訂了嚴格的檢索策略及納入和排除標準，但仍存在一些局限性：①由于缺乏相關的研究數(shù)據，僅有5篇原始文獻中的生存數(shù)據可以進行薈萃分析，這可能降低了研究結果的統(tǒng)計學效力；②納入文獻中l(wèi)ncRNA的表達水平的界定存在差異，這可能增加了lncRNA的檢測難度；③所有的入組病例均為亞洲人群，且食管癌病理類型均為鱗狀細胞癌。但目前亞洲，尤其是中國為世界食管癌的高發(fā)區(qū)域，且絕大多數(shù)為食管鱗狀細胞癌，這一不足似乎無法避免。

綜上所述，系統(tǒng)評價和薈萃分析表明，多種lncRNA與食管癌患者的預后具有相關性，因此lncRNA可能成為食管癌患者潛在的預后生物標志物，這一結論也需要更多的數(shù)據來證明。