HPLC法檢測(cè)海水魚中組胺含量

孫晶

摘 要：為了更好地保護(hù)人們的身體健康，減輕海水魚腐爛對(duì)人體造成的影響，設(shè)置各種不同的方式來(lái)檢測(cè)海水魚中的組氨含量，在本次的實(shí)驗(yàn)中，主要是檢測(cè)海水魚中組胺的含量，采用的方式是高效液相色譜法。這種方式可以提高實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的準(zhǔn)確性，并且進(jìn)行快速而有效的定量。

關(guān)鍵詞：HPLC;組胺;海水魚

生物胺是生物活性物質(zhì)中含氮的低分子有機(jī)化合物的總稱，生物胺一般包括脂肪類、芳香類和雜環(huán)類3大類，組胺是其中的一種雜環(huán)類生物胺，存在在各種動(dòng)物和植物當(dāng)中。海水魚體內(nèi)含有一定的游離組氨酸，如果海水魚新鮮，就不會(huì)受細(xì)菌污染，但是，當(dāng)海水魚腐爛變質(zhì)時(shí)，會(huì)受到大量微生物感染，這時(shí)在一定條件下就會(huì)產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，分解組氨酸形成組胺。

組胺在正常情況下是無(wú)色無(wú)味的，人的肉眼是無(wú)法分辨出組胺的。組胺是一種不發(fā)揮的有機(jī)胺，如果人體食入了不新鮮腐爛變質(zhì)的海水魚，就會(huì)出現(xiàn)相對(duì)應(yīng)的中毒癥狀，并且會(huì)引起一系列的慢性病變，從而影響人的各大神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)以及心血管系統(tǒng)，嚴(yán)重的還會(huì)導(dǎo)致水腫、皮膚發(fā)紅、頭暈頭痛等各種中毒癥狀，甚至?xí)霈F(xiàn)呼吸困難、發(fā)熱、死亡，對(duì)于人體健康有非常大的影響。由于海水魚是人們?nèi)粘Ｉ町?dāng)中經(jīng)常使用的食物，經(jīng)常被人們搬上餐桌，所以重視海水魚中組胺含量的檢測(cè)，對(duì)于人們的身體健康具有非常重要的意義[1]。

1 海水魚中組胺的檢測(cè)方式

組胺的檢測(cè)方式主要有分光光度法、高效液相色譜法、薄層色譜法、氣相色譜法和電化學(xué)生物傳感器等方式。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，分光光度法是利用提取液進(jìn)行提取，通過(guò)顯色劑作用顯色，并與標(biāo)準(zhǔn)系列溶液進(jìn)行比較定量，從而進(jìn)行組胺的檢測(cè)。這種處理方式比較節(jié)約時(shí)間，但是重現(xiàn)性較差，線性關(guān)系也不夠穩(wěn)定。薄層色譜法檢測(cè)組胺的原理是利用吸附劑吸附能力的不同，從而達(dá)到將每一種不同的成分分離的效果，但是這種方式在高溫下容易發(fā)生各種物質(zhì)變化，整體的實(shí)驗(yàn)結(jié)果并不準(zhǔn)確。若采用氣相色譜法來(lái)進(jìn)行檢驗(yàn)，在檢測(cè)過(guò)程當(dāng)中容易出現(xiàn)峰拖尾的現(xiàn)象，整體的靈敏度較低。如果采用電化學(xué)生物傳感器的方式進(jìn)行分析，速度比較快，靈敏度高，但是生物固定化膜不夠穩(wěn)定。采用高效液相色譜法來(lái)進(jìn)行分析的話，分析速度更快，重現(xiàn)性比較高，靈敏度和柱效都比較好，擁有定量分析準(zhǔn)確的優(yōu)點(diǎn)，比較適合日常的海水魚組胺檢測(cè)[2]。

2 海水魚組胺檢測(cè)過(guò)程

2.1 材料與方式

主要樣品為市面上售賣的海水魚，所需要的儀器包括液相色譜儀、色譜柱、離心器、渦旋振蕩器與電子天平。主要所使用的試劑包括三氯乙酸、氯化鈉、正已烷、鹽酸丙酮、氯化鈉、乙醚、甲醛、碳酸氫鈉溶液以及氫氧化鈉溶液等。

2.2 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，需要配置衍生劑溶液。想要制作衍生劑溶液，首先需要稱取一定量的丹磺酰氯，加入丙酮，配制成相應(yīng)濃度的衍生液。隨后配置流動(dòng)相，接著配制內(nèi)標(biāo)液，在上述過(guò)程完成之后，再配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制方法如下，將相應(yīng)的組氨溶解在一定量的鹽酸溶液當(dāng)中，然后轉(zhuǎn)至容量瓶定容至相應(yīng)刻度，配制成相應(yīng)濃度的儲(chǔ)存溶液，精密吸取儲(chǔ)存液并進(jìn)行稀釋，在臨用前配置。

在溶液配制結(jié)束之后，需要依次進(jìn)行組胺標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制、精密度實(shí)驗(yàn)分析、重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)分析與加標(biāo)回收率測(cè)定。具體的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：首先在規(guī)定的色譜條件下，將組胺標(biāo)準(zhǔn)溶液依次進(jìn)樣，并將組胺標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸收峰面積作為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度作為橫坐標(biāo)制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，按照上述步驟依次測(cè)定不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，并記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程當(dāng)中，為了提高檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，可以取同一批次6份供試樣，經(jīng)樣品處理后，進(jìn)行重復(fù)性考察，記錄結(jié)果，分析重復(fù)性，計(jì)算相對(duì)偏差，從而確保檢測(cè)的重復(fù)性。在重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后，需要取不同的樣品加入已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)中，進(jìn)行回收率考察。確?；厥章试诠潭ǚ秶畠?nèi)，保障實(shí)驗(yàn)方準(zhǔn)確性[3]。

3 結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)當(dāng)中采用了HPLC來(lái)檢測(cè)海水魚中的組胺含量，具體的操作步驟包括試劑調(diào)配、組氨標(biāo)準(zhǔn)曲線制作、精密度實(shí)驗(yàn)、重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)與回收率測(cè)定。在本次實(shí)驗(yàn)過(guò)程當(dāng)中，采用丹磺酰氯制作延伸劑。通過(guò)最終的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，可以明確這種方式在一定的線性范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，實(shí)驗(yàn)的精準(zhǔn)性和重復(fù)性都有較高保障，回收率在合理范圍內(nèi)，方法整體來(lái)說(shuō)操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確度高、回收率較高，適用于一般情況下的海水魚組胺檢測(cè)。

4 結(jié)語(yǔ)

現(xiàn)在越來(lái)越多的人們的生活品質(zhì)得到了提高，餐桌上的海鮮也越來(lái)越多。海水魚作為現(xiàn)階段餐桌上使用較為廣泛的海鮮之一，應(yīng)確保其沒(méi)有腐爛變質(zhì)，保證海水魚當(dāng)中的組氨含量在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，減輕由于食用海水魚導(dǎo)致的各種中毒癥狀及慢性病變，確保人們的生活健康，提高人們的生活質(zhì)量。

參考文獻(xiàn)

[1]梁立廣，李綺敏，雷艷.HPLC法檢測(cè)海水魚中組胺的含量[J].食品安全導(dǎo)刊，2019（3）：179-181.

[2]譚彥君，彭接文，陳子慧，等.魚類罐頭相關(guān)食品標(biāo)準(zhǔn)法規(guī)中組胺指標(biāo)探討[J].中國(guó)食品衛(wèi)生雜志，2019，31（4）：389-393.

[3]張金彪.常見野雜魚中的生物胺分析及其對(duì)中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）存活、生長(zhǎng)和體內(nèi)累積的影響[D].上海海洋大學(xué)，2012.