一例豬流行性腹瀉病毒與豬傳染性胃腸炎病毒混合感染的診斷與思考

張賀敏

[摘 要] 2019年8月初，河南省遂平縣某規(guī)模化豬場(chǎng)產(chǎn)房仔豬出現(xiàn)嚴(yán)重的腹瀉、嘔吐現(xiàn)象，最終因脫水而死亡。為探究豬群發(fā)病原因，對(duì)發(fā)病嚴(yán)重豬群進(jìn)行臨床解剖，結(jié)合分子生物學(xué)診斷技術(shù)，最終確診為豬流行性腹瀉病毒和豬傳染性胃腸炎病毒混合感染所致。經(jīng)過(guò)緊急疫苗接種、實(shí)施其他防控措施，2周后疫情得到有效控制，仔豬腹瀉情況不再發(fā)生。

[關(guān)鍵詞] 仔豬腹瀉;豬流行性腹瀉病毒;豬傳染性胃腸炎病毒;混合感染

[中圖分類號(hào)] S858.28 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)]1674-7909（2020）06--2

在生豬養(yǎng)殖過(guò)程中，仔豬腹瀉是比較常見(jiàn)的臨床疾病，嚴(yán)重時(shí)導(dǎo)致患畜因脫水或心力衰竭而死亡，給豬場(chǎng)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。引發(fā)仔豬腹瀉的病原較多，包括細(xì)菌、寄生蟲(chóng)和病毒，其中導(dǎo)致仔豬腹瀉的腸道病毒有豬流行性腹瀉病毒（PEDV）、豬傳染性胃腸炎病毒（TGEV）、豬輪狀病毒（PoRV）和豬德塔冠狀病毒（PDCoV）等，這些病毒感染仔豬所引發(fā)的臨床癥狀及病理變化類似，依靠傳統(tǒng)的臨床診斷鑒別較為困難[1]。此外，在某些疫情復(fù)雜的豬場(chǎng)，不同腹瀉病毒混合感染的現(xiàn)象較為常見(jiàn)，這使得準(zhǔn)確診斷疫病的難度更大[2，3]。筆者曾經(jīng)對(duì)一例仔豬PEDV和TGEV混合感染案例進(jìn)行診斷，下面將其診斷過(guò)程進(jìn)行詳細(xì)闡述。

1 發(fā)病情況

河南省遂平縣某規(guī)?；i場(chǎng)飼養(yǎng)繁殖母豬200余頭，采取自繁自養(yǎng)模式，主要對(duì)外銷售育肥豬和保育豬。2019年8月初，該豬場(chǎng)10日齡內(nèi)少量新生仔豬出現(xiàn)腹瀉，同時(shí)母豬有輕微腹瀉。豬場(chǎng)飼養(yǎng)員在飼料中添加適量氟苯尼考與阿莫西林對(duì)母豬進(jìn)行拌喂，同時(shí)對(duì)仔豬灌喂抗生素，但情況未見(jiàn)好轉(zhuǎn)。截至8月中旬，已經(jīng)有800多頭仔豬發(fā)病，300余頭仔豬因腹瀉死亡，死亡率接近40%。

2 臨床癥狀

觀察發(fā)病豬群臨床癥狀，發(fā)現(xiàn)發(fā)病仔豬腹瀉嚴(yán)重，其糞便顏色為黃綠色，性狀為水樣狀，甚至部分發(fā)病嚴(yán)重仔豬呈噴射狀腹瀉。發(fā)病豬群整體消瘦、精神反應(yīng)遲鈍，其中仔豬腹瀉情況隨日齡越低而發(fā)病越嚴(yán)重;部分母豬精神沉郁，采食量下降，但未發(fā)現(xiàn)母豬死亡現(xiàn)象。

3 病理變化

對(duì)發(fā)病嚴(yán)重仔豬進(jìn)行解剖，主要病理癥狀集中表現(xiàn)在腸道部位，其腸系膜淋巴結(jié)腫大，腸道表面出血，且腸壁變薄，腸道內(nèi)有未消化的凝乳塊物質(zhì)，且其含有較重的腥臭味。

根據(jù)病豬的臨床表現(xiàn)、病理變化及豬場(chǎng)用藥情況，我們初步判定該病的發(fā)生可能由豬腸道腹瀉病毒感染所致。但由哪一種病毒感染引起尚不清楚，需實(shí)驗(yàn)室診斷確定。

4 實(shí)驗(yàn)室診斷

4.1 細(xì)菌檢測(cè)

無(wú)菌采集病豬淋巴結(jié)、肺臟、肝臟和腸道內(nèi)容物，將其勻漿后，取適量上清接種于鮮血瓊脂培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基置于37 ℃無(wú)菌培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)36 h，其后觀察培養(yǎng)基表面是否存在菌落，并對(duì)菌株種類進(jìn)行鑒定。結(jié)果顯示，培養(yǎng)36 h培養(yǎng)基表面均未觀察到菌落生長(zhǎng)情況，同時(shí)染色鏡檢未檢測(cè)到細(xì)菌存在。

4.2 病毒檢測(cè)

無(wú)菌取3頭發(fā)病仔豬的適量病變明顯的小腸組織樣品，將組織樣品勻漿后，低溫（4 ℃）高速（1.3萬(wàn)r/min）離心15 min，取上清采用Trizol法提取組織RNA，按照說(shuō)明書(shū)將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA，以cDNA樣品為模板，采用RT-PCR法檢測(cè)PEDV、TGEV、PoRV和PDCoV病原是否存在，然后對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行凝膠電泳觀察條帶。檢測(cè)結(jié)果顯示，3份樣品均被檢測(cè)出PEDV和TGEV陽(yáng)性，PoRV和PDCoV均為陰性，提示豬群腹瀉是PEDV和TGEV混合感染所致。

5 防控措施

5.1 提高飼養(yǎng)管理水平

通過(guò)對(duì)發(fā)病豬群進(jìn)行臨床癥狀及實(shí)驗(yàn)室技術(shù)檢測(cè)，最終確診為PEDV和TGEV混合感染所致，降低仔豬發(fā)病率和死亡率主要依靠提高豬群飼養(yǎng)管理水平。一是將腹瀉豬和健康豬隔離飼養(yǎng)，使腹瀉豬群獲得含有PED和TGE母源抗體的初乳，提高豬群抵抗病毒腹瀉的能力;二是在仔豬飲水中添加多維和適量食鹽，防止發(fā)病豬群因過(guò)度腹瀉脫水死亡;三是將豬舍內(nèi)溫度提高，防止仔豬因寒冷扎堆，同時(shí)降低豬舍內(nèi)濕度[4]。

5.2 開(kāi)展消毒工作

對(duì)發(fā)病豬群進(jìn)行隔離，對(duì)其所在欄舍進(jìn)行消毒，可使用高壓水槍對(duì)欄舍進(jìn)行沖洗，同時(shí)進(jìn)行熏蒸消毒，同時(shí)在走道兩邊鋪適量濃度的石灰乳;對(duì)發(fā)病豬群排出的糞污進(jìn)行及時(shí)清除與無(wú)害化處理，以切斷病原的傳播途徑;做好飼養(yǎng)人員的培訓(xùn)工作，專人負(fù)責(zé)腹瀉豬群的飼養(yǎng)管理工作，不能讓飼養(yǎng)員在不同欄舍之間穿梭。

5.3 緊急疫苗接種與用藥

對(duì)全群母豬免疫接種豬流行性腹瀉和豬傳染性胃腸炎二聯(lián)疫苗（ZJ08和HB08豬）免疫接種（2頭份/頭），仔豬肌肉注射1頭份/頭;為了防止發(fā)病仔豬繼發(fā)感染其他疫病，在仔豬飼料中添加適量阿莫西林和電解多維等，連續(xù)用藥5 d后停藥。

嚴(yán)格執(zhí)行以上防治措施后，2周后回訪，該豬場(chǎng)疫情得到有效控制，豬場(chǎng)仔豬發(fā)病率明顯下降，無(wú)大規(guī)模仔豬死亡情況發(fā)生。

6 討論

PEDV感染豬只后，主要在小腸黏膜上皮細(xì)胞中進(jìn)行復(fù)制，受到侵染的小腸上皮細(xì)胞正常的結(jié)構(gòu)被破壞，腸壁細(xì)胞發(fā)生死亡，腸絨毛脫落，從而腸壁變薄，腸道的表面積減少，使小腸消化吸收功能降低;另外，腸黏膜上皮細(xì)胞內(nèi)的雙糖酶、氨基肽酶等活性降低或者缺乏，因而導(dǎo)致腸腔小分子物質(zhì)得不到進(jìn)一步分解、吸收，使腸腔內(nèi)的膠體滲透壓升高，又因ATP酶活性降低或者缺乏，腸上皮細(xì)胞內(nèi)鈉泵失活，晶體滲透壓也升高，從而引發(fā)仔豬滲透性腹瀉，嚴(yán)重時(shí)脫水甚至死亡。

在仔豬生長(zhǎng)過(guò)程中發(fā)生腹瀉十分常見(jiàn)，導(dǎo)致仔豬腹瀉的病因較多，其中病毒感染是常見(jiàn)的原因，很多腸道病毒均可以導(dǎo)致仔豬腹瀉，而且其臨床及病理變化相似，導(dǎo)致傳統(tǒng)的臨床與病理診斷已經(jīng)無(wú)法滿足對(duì)病原精確診斷的要求。本次接診的案例中仔豬腹瀉是由PEDV和TGEV混合感染所致，PEDV和TGEV均可導(dǎo)致仔豬腹瀉，而且其發(fā)病癥狀一致，如果沒(méi)有豐富的臨床經(jīng)驗(yàn)很容易誤診或漏診，延誤疫病的治療。本次研究通過(guò)分子診斷技術(shù)最終確定為PEDV和TGEV混合感染，對(duì)豬群進(jìn)行緊急免疫接種疫苗及提高飼養(yǎng)管理水平后疫情得到有效控制。故而，當(dāng)豬場(chǎng)發(fā)生疫情后，應(yīng)及時(shí)將病料樣品送往專業(yè)檢測(cè)機(jī)構(gòu)進(jìn)行病原檢測(cè)，根據(jù)檢測(cè)結(jié)果實(shí)施相應(yīng)的防控措施，以減少經(jīng)濟(jì)損失。

參考文獻(xiàn)

[1]張利衛(wèi)，曹貝貝，李炳曉，等.新發(fā)豬Delta冠狀病毒和豬流行性腹瀉病毒SYBR Green I雙重?zé)晒釸T—PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2018（4）：618-624.

[2]滑翔，胡中凱，黃小波，等.檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒和豬輪狀病毒的cDNA芯片的構(gòu)建[J].畜牧獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2015（12）：2235-2242.

[3]陳志雄，王洪海，張峰.規(guī)模豬場(chǎng)哺乳仔豬混合感染PEDV和PDCoV暴發(fā)腹瀉的綜合防控[J].中國(guó)豬業(yè)，2019（5）：85-88.

[4]馬壽福.仔豬流行性腹瀉病的診斷與防治措施[J].國(guó)外畜牧學(xué)（豬與禽），2019（8）：19-20.