布拉酵母菌聯(lián)合核黃素磷酸鈉對(duì)小兒輪狀病毒性腸炎外周血IL-8、TGF-β1及T淋巴細(xì)胞亞群的影響

黃 金，高若飛，于 靜，李小芹

(鄭州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院(河南省兒童醫(yī)院, 鄭州兒童醫(yī)院)消化內(nèi)科，鄭州 450000)

輪狀病毒(rotavirus，RV)極易導(dǎo)致輪狀病毒性腸炎(rotavirus enteritis，RVE)，屬于RNA病毒，是全世界兒童感染性腸炎的主要致病原[1]。RVE占小兒腹瀉病的40%～60%，RV是引起嬰幼兒腹瀉病中最常見最重要的一類病毒[2]。RVE以每年的冬末、初春或者深秋季節(jié)易發(fā)?。黄鋫鞑ネ緩揭约S口傳播為主。RVE的發(fā)病機(jī)制為：① RV病毒侵犯十二指腸及空腸，與上皮細(xì)胞結(jié)合，使絨毛膜變短變粗，細(xì)胞腫脹空泡變性壞死，導(dǎo)致小腸功能喪失，引起腹瀉；② 上皮細(xì)胞雙糖酶分泌不足使食物中雙糖消化不完全，導(dǎo)致腸腔滲透壓增高[3]。RVE的臨床癥狀可表現(xiàn)為大便次數(shù)增多、量大、水分多、呈水樣或蛋花樣，常常并發(fā)脫水、發(fā)熱及上呼吸道感染等癥狀。若治療不及時(shí)，RV侵犯進(jìn)入淋巴、血液循環(huán)，可引起輪狀病毒血癥，使心、肝、腎等多器官系統(tǒng)受損[4]。目前，在臨床上暫無特效藥治療RVE，以抗病毒、胃黏膜保護(hù)及微生態(tài)制劑等對(duì)癥治療為主[5]。其中，微生態(tài)制劑以布拉酵母菌治療為主，其對(duì)腸道菌群調(diào)節(jié)具有顯著作用。有相關(guān)研究指出，核黃素磷酸鈉具有促進(jìn)腸道黏膜修護(hù)、恢復(fù)消化功能的作用[6]。我院研究發(fā)現(xiàn)布拉酵母菌聯(lián)合核黃素磷酸鈉治療應(yīng)用效果良好。本研究通過對(duì)小兒輪狀病毒性腸炎患兒分別予以布拉酵母菌治療以及布拉酵母菌聯(lián)合核黃素磷酸鈉治療兩種方法來分析對(duì)外周血IL-8、TGF-β1及T淋巴細(xì)胞亞群的影響?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年9月～2019年11月我院收治的80例小兒輪狀病毒性腸炎患兒。所有患兒均符合臨床上小兒輪狀病毒性腸炎診斷標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)對(duì)患兒治療方案不同，分為對(duì)照組及研究組各40例。納入標(biāo)準(zhǔn)：① 患兒發(fā)病時(shí)間不超過3天；② 患兒大便呈水樣或蛋花樣，RV檢測(cè)抗原陽性；③ 患兒家屬均知情此研究并簽署同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：① 患兒重度脫水及嚴(yán)重電解質(zhì)紊亂；② 治療前曾使用過激素藥物或者本次研究使用的藥物；③ 先天性胃腸道畸形、胃腸道外科手術(shù)者；④ 合并嚴(yán)重心、肝、腎等功能不全或者存在免疫缺陷等患兒；⑤ 不能配合的患兒；⑥ 存在意識(shí)障礙或精神疾病等患兒?；純和庵苎狪L-8指標(biāo)檢測(cè)試劑盒由法國(guó)CIS公司提供，TGF-β1試劑盒由上海心語生物科技有限公司提供，T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)由流式細(xì)胞儀測(cè)定，由上海谷研科技有限公司提供。兩組患兒的性別、年齡、病程及脫水情況等基線資料比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表1。

組別n男/女年齡(月)病程(天)脫水情況(例)輕度中度對(duì)照組4020/2013.43±3.161.51±0.342317研究組4019/2112.03±3.421.56±0.412515χ2/t值—0.0501.9010.5930.208P值—0.8230.6090.5540.648

1.2 治療方法

兩組患者均予以糾正脫水、調(diào)節(jié)酸堿平衡等對(duì)癥支持治療。對(duì)照組予以布拉酵母菌[生產(chǎn)廠家：法國(guó)百科達(dá)制藥廠，批準(zhǔn)文號(hào)：注冊(cè)證號(hào)S20150051，規(guī)格：0.25 g(菌粉)/袋]治療：根據(jù)患兒年齡，12個(gè)月以下患兒予以每天口服0.125 g，bid；12個(gè)月～3歲內(nèi)患兒予以每天口服0.25 g，bid。研究組予以布拉酵母菌聯(lián)合核黃素磷酸鈉(生產(chǎn)廠家：山東方明藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，生產(chǎn)批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字號(hào)H20066158，規(guī)格：10 mg/支)治療，予以 5 mg+0.9%NaCl溶液或者5 mg+5%GS溶液靜滴。3天為一個(gè)療程。

1.3 檢測(cè)方法

治療前后抽取所有受檢者5 ml清晨空腹靜脈血。離心處理5 min后(轉(zhuǎn)速3500轉(zhuǎn)/min)，取上層血清，放置于-80 ℃恒溫箱中冷藏待檢。IL-8水平采用放射免疫分析法進(jìn)行測(cè)定，試劑盒由法國(guó)CIS公司提供，具體實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按試劑盒上說明書進(jìn)行。TGF-β1采用酶聯(lián)吸附法(ELISA法)進(jìn)行檢測(cè)，試劑盒由上海心語生物科技有限公司生產(chǎn)，嚴(yán)格按試劑盒上的說明書進(jìn)行。T淋巴細(xì)胞亞群(CD8+、CD4+、CD3+)使用流式細(xì)胞檢測(cè)儀來進(jìn)行檢測(cè)。首先對(duì)受試兒童進(jìn)行空腹采血，采血2 ml，樣本需要在4 h內(nèi)進(jìn)行處理。處理流程：刺激細(xì)胞-標(biāo)記管-固定、破膜及細(xì)胞打孔-進(jìn)行膜內(nèi)免疫熒光標(biāo)記，然后進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 觀察指標(biāo)及判定標(biāo)準(zhǔn)

① 對(duì)比兩組患兒炎性因子IL-8和TGF-β1指標(biāo)水平；② 比較T淋巴細(xì)胞亞群指標(biāo)；③ 對(duì)比兩組患兒的臨床療效。臨床療效根據(jù)患兒的癥狀及檢查情況來判定[7]，顯效：經(jīng)治療后患兒癥狀消失，大便常規(guī)未見明顯異常；有效：經(jīng)治療后患兒癥狀較前好轉(zhuǎn)，每天腹瀉情況降低到3次以下，大便常規(guī)未見明顯異常；無效：經(jīng)治療后患兒癥狀無變化甚至較前加重。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 炎性因子TGF-β1和IL-8水平比較

治療后，兩組患兒IL-8均較治療前降低，TGF-β1水平較前升高；且研究組TGF-β1水平較對(duì)照組升高更為明顯，IL-8水平較對(duì)照組明顯降低(P<0.05)，見表2。

表2 炎性因子TGF-β1和IL-8水平

與同組治療前比較，a：P<0.05；下同

2.2 T淋巴細(xì)胞亞群水平比較

治療前，兩組患兒T淋巴細(xì)胞亞群CD8+、CD4+、CD3+比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。治療后，兩組患兒CD4+、CD3+較前升高，CD8+較前降低，且研究組CD4+、CD3+升高較對(duì)照組明顯，CD8+降低較對(duì)照組更顯著(P<0.05)，見表3。

表3 T淋巴細(xì)胞亞群水平

2.3 臨床療效比較

治療后，研究組患兒總有效率顯著高于對(duì)照組(97.50%vs77.50%，P<0.05)。詳情見表4。

表4 臨床療效 n(%)

3 討論

腹瀉，是一個(gè)公共健康問題，全世界每年發(fā)病人數(shù)高達(dá)1.5億人，是導(dǎo)致嬰幼兒死亡的第二大病因[8]。全世界每年因RV感染而導(dǎo)致死亡的兒童約90萬人；每年我國(guó)3歲以下的嬰幼兒感染RV的人數(shù)達(dá)1000萬人，占全國(guó)嬰幼兒總數(shù)的1/4[9]。RV感染不僅對(duì)腸道內(nèi)有影響，還可引起呼吸系統(tǒng)、中樞神經(jīng)及循環(huán)系統(tǒng)等病變，嚴(yán)重威脅患兒的身體健康[10]。因此，對(duì)于嬰幼兒感染RV引起小兒RVE后進(jìn)行及時(shí)有效的治療是十分重要的[11]。

腸道是細(xì)菌定植的主要場(chǎng)所，腸道定植細(xì)菌具有數(shù)量大、多樣化、復(fù)雜性及動(dòng)態(tài)性的特點(diǎn)[12]。布拉酵母菌作為一種真菌制劑，屬于超高溫酵母菌，其耐酸、耐堿及耐膽汁等作用，在體內(nèi)37 ℃的環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖，且存活率高、穩(wěn)定性好，還具有對(duì)抗抗生素天然耐藥性的功效[13-14]。核黃素磷酸鈉屬于維生素類藥物，在能量代謝中起到較為關(guān)鍵的作用[15]。黃素酶具有維護(hù)胃腸黏膜完整、促進(jìn)腸上皮細(xì)胞再生的作用[16]。同時(shí)，還可在提高機(jī)體抗氧化能力的同時(shí)，加快修復(fù)受損腸道黏膜，促進(jìn)恢復(fù)腸道黏膜消化、吸收及分泌的作用[17]。本研究結(jié)果顯示，布拉酵母菌聯(lián)合核黃素磷酸鈉治療小兒RVE較單用布拉酵母菌的總有效率顯著提高(P<0.05)。說明聯(lián)合治療臨床效果較單一治療顯著，聯(lián)合治療可在調(diào)節(jié)腸道菌群的同時(shí)對(duì)腸道菌群具有良好的保護(hù)效果[18]。

有報(bào)道顯示，布拉酵母菌聯(lián)合核黃素磷酸鈉治療RV感染可在抑制炎性因子IL-8的同時(shí)提升TGF-β1的水平[19]。由于RV感染會(huì)刺激淋巴細(xì)胞，使其釋放IL-8及TGF-β1，激活免疫細(xì)胞，影響恢復(fù)[20]。本研究以IL-8和TGF-β1作為觀察指標(biāo)，結(jié)果顯示，聯(lián)合治療后IL-8較對(duì)照組明顯降低，TGF-β1較對(duì)照組明顯升高。這說明，布拉酵母菌聯(lián)合核黃素磷酸鈉治療可針對(duì)性調(diào)節(jié)炎性因子，對(duì)RV感染具有良好的治療作用[21]。

對(duì)CD8+、CD4+、CD3+進(jìn)行相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，布拉酵母菌聯(lián)合核黃素磷酸鈉治療小兒RVE，可在外周血循環(huán)的作用下，恢復(fù)T淋巴細(xì)胞亞群免疫細(xì)胞的平衡。這可能與聯(lián)合治療有關(guān)，布拉酵母菌調(diào)節(jié)腸道菌群的同時(shí)促進(jìn)巨噬細(xì)胞吞噬，而核黃素磷酸鈉可抑制RV的傳播，兩者聯(lián)合治療具有抗炎、增強(qiáng)機(jī)體免疫的作用[22]。

綜上所述，布拉酵母菌聯(lián)合核黃素磷酸鈉治療臨床療效佳，可有效調(diào)節(jié)外周血IL-8、TGF-β1水平，對(duì)T淋巴細(xì)胞具有促進(jìn)作用，是患兒RVE的有效治療方案。影響CD8+、CD4+、CD3+的病理機(jī)制尚未明確，因此后期需繼續(xù)開展臨床研究加以證明。