利用高效價(jià)Bartha-K61株疫苗防控凈化豬偽狂犬病的研究與實(shí)踐

陳 耀 楊傲冰 白挨泉 林德銳 馬春全

（1佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院生命科學(xué)與工程學(xué)院，廣東佛山 528200；2廣東永順生物制藥股份有限公司，廣東廣州 510700）

偽狂犬病（PR）是由偽狂犬病毒（PRV）引起的豬和其他多種動(dòng)物共患的一種以發(fā)熱、奇癢及腦脊髓炎為主要癥狀的急性傳染病[1]。2011年底以來，豬偽狂犬病在我國豬場流行明顯增多，發(fā)病豬群主要表現(xiàn)為母豬流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、產(chǎn)木乃伊胎增多，同時(shí)引起大量初生仔豬、生長育肥豬死亡，給養(yǎng)豬場帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[2]。部分規(guī)模豬場雖然注重偽狂犬疫苗免疫，但仍然發(fā)生豬偽狂犬病，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大損失。血清學(xué)檢測調(diào)查顯示許多豬場偽狂犬gE抗體由陰性轉(zhuǎn)為陽性，甚至較大一部分種豬場也成為野毒陽性豬場[3,4]。大量研究表明PRV流行毒株發(fā)生了變異，毒力增強(qiáng)，同時(shí)免疫原性基因發(fā)生改變，使得原來常用的疫苗免疫保護(hù)效果相對(duì)減弱。原有的疫苗毒株能否控制凈化偽狂犬病，在業(yè)內(nèi)一直存在爭議[5-7]。本團(tuán)隊(duì)用高效價(jià)Bartha-K61毒株疫苗在多個(gè)豬場開展豬偽狂犬病控制及凈化技術(shù)研究。探索了保持豬群gE抗體陰性，偽狂犬病凈化，及在種豬陽性場穩(wěn)定生產(chǎn)出陰性后備豬等系列技術(shù)。結(jié)合生產(chǎn)案例總結(jié)如下。

1 研究與實(shí)踐

1.1 利用高效價(jià)Bartha-K61毒株疫苗免疫，凈化種豬群及穩(wěn)定維持gE抗體陰性的案例

廣東某原種豬場存欄原種豬1 500頭，2012—2014年該場采用國產(chǎn)Bartha-K61毒株疫苗免疫。種豬免疫程序?yàn)椋汉髠湄i配種前間隔1個(gè)月免疫2次；種豬（包括公豬、母豬）每3個(gè)月肌肉注射免疫中等效價(jià)偽狂犬疫苗1頭份。

該豬場于2014年初出現(xiàn)PRV野毒感染豬群的現(xiàn)象，在種豬群出現(xiàn)個(gè)別種豬gE抗體陽性（表1）。

根據(jù)豬場種豬群出現(xiàn)偽狂犬野毒轉(zhuǎn)陽情況，調(diào)整免疫程序：采用高效價(jià)Bartha-K61疫苗（每頭份病毒含量在106.5TCID50以上）緊急免疫，所有種豬肌肉注射高效價(jià)豬偽狂犬疫苗2頭份；2個(gè)月后全群種豬檢測gE抗體，淘汰gE抗體陽性種豬；調(diào)整種豬免疫程序，后備豬配種前間隔1個(gè)月免疫2次，肌肉注射免疫2頭份，種豬（包括公豬、母豬）每3個(gè)月肌肉注射免疫2頭份；2014年9月之后每4個(gè)月進(jìn)行種豬gE抗體檢測。

表1 2014年6月某場種豬群血清抗體檢測結(jié)果

從2015年1月份抽檢該豬場的gE抗體結(jié)果，均為陰性（表2）。表明，該豬場已經(jīng)成功控制PRV野毒感染。該場于2016年通過廣東省農(nóng)業(yè)廳偽狂犬凈化場驗(yàn)收。至2019年12月該豬場均為PRV野毒陰性豬場。

表2 2015年1月某場種豬血清抗體檢測結(jié)果

1.2 利用高效價(jià)Bartha-K61毒株疫苗使gE抗體陽性種豬群穩(wěn)定生產(chǎn)出陰性后備豬的案例

2016年7月，廣東某豬場的豬群出現(xiàn)PRV野毒感染現(xiàn)象，經(jīng)抽檢發(fā)現(xiàn)該豬場中種公豬的gE陽性率為66.7%；母豬gE陽性率為100%；仔豬、生長育肥豬各階段均有g(shù)E抗體陽性豬（表3）。豬群繁殖性能及仔豬生長各階段都不穩(wěn)定。豬場的整體生產(chǎn)成績不理想，平均每頭母豬年上市商品豬13.5頭。

2016年8月，建議該豬場調(diào)整PRV疫苗的免疫方案。調(diào)整后方案具體如下：①緊急免疫接種，全群豬只注射高效價(jià)豬偽狂犬Bartha-K61毒株活疫苗2頭份/頭；②調(diào)整免疫程序，建議種豬每3個(gè)月注射高效價(jià)豬偽狂犬Bartha-K61毒株活疫苗1.5頭份/頭；③仔豬在緊急接種疫苗30 d后加強(qiáng)免疫一次；④在種豬調(diào)整免疫程序4個(gè)月后，檢測仔豬及生長育肥各階段豬的gB抗體水平（表4）。

表3 2016年7月15日某場種豬血清偽狂犬病毒gE抗體檢測結(jié)果

表4 2017年2月仔豬及生長豬群偽狂犬病毒gB抗體檢測結(jié)果

根據(jù)檢測結(jié)果調(diào)整仔豬及生長豬群免疫程序，方案如下：①3日齡滴鼻免疫高效價(jià)豬偽狂犬Bartha-K61毒株活疫苗1頭份/頭；②70日齡肌肉注射高效價(jià)豬偽狂犬Bartha-K61毒株活疫苗1.5頭份/頭；③105日齡肌肉注射高效價(jià)豬偽狂犬Bartha-K61毒株活疫苗1.5頭份/頭；④168日齡肌肉注射高效價(jià)豬偽狂犬Bartha-K61毒株活疫苗1.5頭份/頭。⑤免疫效果監(jiān)測：間隔4個(gè)月后對(duì)全群種豬、60日齡仔豬、120日齡、180日齡豬只采血，檢測豬群的豬偽狂犬病毒gE抗體（表5），評(píng)估免疫效果。

2017年7月對(duì)該豬場的豬群進(jìn)行豬偽狂犬病毒gE抗體抽檢，結(jié)果表明，該種豬場出產(chǎn)的后備種豬均能達(dá)到豬偽狂犬病毒gE抗體陰性（表5）。至2019年3月為止，該豬場的PRV較穩(wěn)定，沒有出現(xiàn)PRV野毒感染現(xiàn)象。

2 討論與結(jié)論

2.1 豬偽狂犬經(jīng)典毒株疫苗阻斷流行變異毒株的感染

豬偽狂犬病的防控與凈化，種豬群是關(guān)鍵。2012年后，我國很多豬場感染偽狂犬野毒，生產(chǎn)不穩(wěn)定。主要與流行毒株變異，包括毒力增強(qiáng)和抗原性變異有關(guān)。但利用傳統(tǒng)經(jīng)典疫苗毒株（如Bartha-K61疫苗株），加大免疫疫苗含毒量或增加免疫頻率，也可以很好地保護(hù)豬群。案例1采用種豬群1年免疫4次高效價(jià)Bartha-K61疫苗，可以產(chǎn)生較高的中和抗體，減少和阻止母豬的排毒，將除嗅球和三叉神經(jīng)節(jié)以外的所有PRV中和掉，使PRV處于潛伏感染狀態(tài)，雖然短期內(nèi)沒有消滅傳染源，但相當(dāng)于控制住了傳染源，即帶毒生產(chǎn)，穩(wěn)定產(chǎn)能。而后，再通過gE抗體陰性后備種豬的替換，使種豬群gE抗體陽性比例不斷下降，直至凈化種豬群。通過“免疫—檢測—淘汰”策略和綜合生物安全措施及合理的疫苗免疫保持種豬核心群野毒抗體陰性。

表5 2017年7月偽狂犬病毒gE抗體檢測結(jié)果

2.2 豬偽狂犬野毒陽性豬場生產(chǎn)陰性后備種豬技術(shù)

對(duì)于后備種豬和育肥豬的PRV免疫程序，一定要根據(jù)種豬免疫情況和母源抗體規(guī)律來確定。首先在仔豬出生后3日齡內(nèi)進(jìn)行豬偽狂犬疫苗滴鼻免疫，免疫劑量1頭份，該免疫主要是激活仔豬的黏膜免疫，增強(qiáng)口、鼻局部免疫保護(hù)，提高仔豬對(duì)病毒的感染閾值。但局部黏膜免疫保護(hù)有限，要形成比較堅(jiān)強(qiáng)的保護(hù)，還需要激活全身免疫反應(yīng)。

肌肉注射免疫是激活全身免疫的主要方法。在仔豬、生長育肥豬偽狂犬病防控中首免日齡（第1次肌肉注射免疫）的確定是最關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。筆者在多個(gè)豬場實(shí)踐中發(fā)現(xiàn)，許多豬場中生長育肥豬的野毒抗體轉(zhuǎn)陽性，都與首次肌肉注射免疫日齡選擇不當(dāng)有關(guān)。疫苗首免的免疫效果受母源抗體影響大。而母源抗體的高低，持續(xù)時(shí)間取決于種豬的疫苗免疫效果。種豬免疫抗原量越高，產(chǎn)生的抗體水平越高，則母源抗體持續(xù)時(shí)間越長。

案例2中的豬場為原種豬場，由于原來選用的是中等抗原含量的疫苗，再加上免疫程序的不合理和生物安全措施不到位等情況，使得種豬群及生長育肥各階段的豬均出現(xiàn)PRV野毒感染，生產(chǎn)成績不穩(wěn)定。鑒于該豬場的情況，建議其全場豬群先進(jìn)行緊急免疫接種，全群豬只注射高效價(jià)豬偽狂犬Bartha-K61毒株活疫苗（每頭份病毒含量在106.5TCID50以上）2頭份/頭，其目的是為了先控制該豬場的PRV病毒，使豬群生產(chǎn)先趨于穩(wěn)定。然后，再根據(jù)不同的豬群，有針對(duì)性地調(diào)整免疫程序。如調(diào)整種豬免疫程序，采用高效價(jià)疫苗1.5頭份間隔3個(gè)月注射免疫種豬。在種豬免疫程序固定4個(gè)月，豬群的母源抗體水平穩(wěn)定后。再根據(jù)母源抗體檢測結(jié)果，調(diào)整仔豬的免疫程序，將仔豬第1次注射免疫日齡確定在10周齡，在14周齡時(shí)加強(qiáng)免疫，免疫劑量1.5頭份/頭。值得注意的是在方案執(zhí)行過程中發(fā)現(xiàn)，有的批次在170～200日齡有g(shù)E抗體轉(zhuǎn)陽的情況。因此，選擇在160～170日齡第3次注射PRV疫苗，每頭1.5頭份。該豬場在運(yùn)用方案后的3年時(shí)間里，一直保持豬群各階段未出現(xiàn)gE抗體陽性豬只。目前，利用方案2中的技術(shù)，已經(jīng)培育出8個(gè)偽狂犬病凈化場。