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    近紅外光譜結(jié)合二維相關(guān)技術(shù)對(duì)玉米F1代雜交種的快速篩選

    2020-07-08 14:31:22李夢(mèng)婷朱文碧劉冬梅牟美睿劉海學(xué)
    光譜學(xué)與光譜分析 2020年7期
    關(guān)鍵詞:雜交種品系農(nóng)藝

    丁 璐, 李夢(mèng)婷, 劉 洋, 朱文碧, 劉冬梅, 牟美睿, 劉海學(xué)*

    1. 天津農(nóng)學(xué)院農(nóng)學(xué)與資源環(huán)境學(xué)院, 天津 300384 2. 云南農(nóng)業(yè)大學(xué)稻作物研究所, 云南 昆明 650201 3. 天津市第一中心醫(yī)院心內(nèi)科, 天津 300192

    引 言

    我國(guó)是糧食生產(chǎn)大國(guó)。 玉米是我國(guó)重要的糧食和飼料作物, 于2012年成為我國(guó)產(chǎn)量第一的糧食作物。 根據(jù)國(guó)家統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示, 2015年我國(guó)玉米的種植面積約3 812萬(wàn)hm2, 產(chǎn)量2.2億t, 占作物栽培總面積的22.91%, 占作物總產(chǎn)量的36.15%。 玉米生產(chǎn)研究重要的目標(biāo)之一是獲得高產(chǎn), 雜種優(yōu)勢(shì)是目前農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上提高產(chǎn)量和改進(jìn)品質(zhì)的重要措施之一。 但雜種優(yōu)勢(shì)的田間檢測(cè)需要耗費(fèi)大量的人力、 物力和時(shí)間, 且限于條件因素的影響, 不能一次測(cè)驗(yàn)多個(gè)組合, 所以雜種優(yōu)勢(shì)的預(yù)測(cè)問(wèn)題一直是育種工作者進(jìn)行探求的問(wèn)題之一。

    與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比, 近紅外光譜技術(shù)具有快速、 便捷等優(yōu)點(diǎn), 已被應(yīng)用于玉米雜交種篩選, 使得玉米育種更加方便、 快捷[1-5]。 Cui等[2]將近紅外光譜與模式識(shí)別相結(jié)合, 實(shí)現(xiàn)了不同玉米種子的識(shí)別, 識(shí)別正確率超過(guò)90%。 Jia等[3]對(duì)帶種衣的玉米種子進(jìn)行近紅外光譜分析, 所建立的SIMCA模型的判別正確率為97.5%。 彭城[5]等應(yīng)用近紅外光譜技術(shù)實(shí)現(xiàn)了轉(zhuǎn)雙價(jià)基因玉米的快速鑒別。 李夢(mèng)婷[5]等利用近/中紅外光譜結(jié)合聚類(lèi)分析快速篩選玉米自交系組合。 二維相關(guān)譜技術(shù)具有高的光譜分辨率, 特別適合復(fù)雜體系相似樣品的分析, 已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用于復(fù)雜生物體系的研究中[6-13]。 本文將近紅外光譜技術(shù)與二維相關(guān)譜技術(shù)相結(jié)合實(shí)現(xiàn)玉米雜交種的快速篩選, 并通過(guò)田間實(shí)地測(cè)量的玉米農(nóng)藝性狀數(shù)據(jù)驗(yàn)證了方法的有效性, 所提出的方法國(guó)內(nèi)外尚未見(jiàn)相關(guān)報(bào)道。 本研究對(duì)于玉米雜交種的篩選工作具有重要的參考意義。

    1 實(shí)驗(yàn)部分

    1.1 試驗(yàn)地概況

    試驗(yàn)在內(nèi)蒙古奈曼旗享禾種業(yè)有限公司進(jìn)行, 試驗(yàn)田地形規(guī)整、 地勢(shì)平坦、 地力均勻、 排灌方便, 歷年無(wú)異?;蛱厥獾臍庀髼l件。

    1.2 材料

    對(duì)照品種: 當(dāng)?shù)赝茝V品種 京科958(JK958)。

    供試玉米(F1代): 品系489, 品系9, 品系10, 品系14, 品系16, 品系24, 品系26, 品系57, 品系84, 品系107, 品系109, 品系110, 品系112, 品系121, 品系147, 品系157, 品系263, 品系264, 品系284, 品系314, 品系317, 品系320, 品系542, 品系541, 品系582。

    1.3 儀器及方法

    1.3.1 光譜分析

    室溫下, 從各品系完全成熟的玉米果穗上剝?nèi)?0個(gè)籽粒, 粉碎研磨后過(guò)篩(80目), 樣品一式兩份存放于密封袋。 使用PE公司的Spectrum GX型FT-IR光譜儀(配置銦砷化鎵檢測(cè)器和穩(wěn)壓空氣冷卻光源), 儀器自帶積分球附件。 近紅外光譜波數(shù)采集范圍是4 000~10 000 cm-1。 每個(gè)樣品掃描次數(shù)為16, 掃描間隔為4 cm-1。 為減少基線漂移對(duì)分析的影響, 采用OMNIC軟件對(duì)所有的光譜進(jìn)行基線校正、 平滑處理、 歸一化光譜, 然后對(duì)這些數(shù)據(jù)進(jìn)行多變量分析。

    1.3.2 農(nóng)藝性狀

    試驗(yàn)于2017年4月—2017年10月進(jìn)行, 實(shí)驗(yàn)區(qū)長(zhǎng)6 m, 寬4 m, 面積24 m2, 采用完全隨機(jī)區(qū)組排列, 設(shè)3次重復(fù), 共計(jì)78個(gè)實(shí)驗(yàn)小區(qū), 試驗(yàn)總面積1 872 m2, 試驗(yàn)田按行距60 cm, 株距25 cm進(jìn)行種植, 5 050株/667 m2, 按照當(dāng)?shù)卮筇锷a(chǎn)水平進(jìn)行管理, 四周設(shè)有保護(hù)行。

    玉米成熟后收獲前在田間使用卷尺測(cè)量其株高和穗位高, 統(tǒng)計(jì)單株葉數(shù); 室內(nèi)考種使用直尺測(cè)量穗長(zhǎng), 使用游標(biāo)卡尺測(cè)量穗粗、 禿尖程度、 軸粗, 統(tǒng)計(jì)穗行數(shù)、 行粒數(shù); 烘干后脫粒, 統(tǒng)計(jì)軸色(軸色分為紅色和白色), 使用天平稱(chēng)量穗重、 穗粒重、 百粒重。

    2 結(jié)果與討論

    2.1 不同玉米品系的近紅外光譜分析——一級(jí)篩選

    26個(gè)玉米品系的近紅外光譜如圖1所示, 所有品系光譜曲線的重合度極高, 在4 327, 4 754, 5 181, 5 630, 6 858以及8 309 cm-1處出現(xiàn)特征峰。 從光譜圖直接得出的信息相當(dāng)粗略, 無(wú)法實(shí)現(xiàn)各品系的鑒別和篩選, 因此需要借助多元統(tǒng)計(jì)方法。

    圖1 不同玉米品系的近紅外光譜

    對(duì)圖1中26個(gè)玉米品系的近紅外光譜進(jìn)行聚類(lèi)分析, 其結(jié)果見(jiàn)圖2, 當(dāng)類(lèi)間距=10時(shí), 26個(gè)品系被聚成3類(lèi)。 第一類(lèi)是: 10, 489, 263, 320, 147, 26, 314, 110, 107, JK958(對(duì)照品種), 24, 84, 14, 112, 109以及541; 第二類(lèi)是9, 542, 16, 121以及57; 第三類(lèi)是317, 582, 284, 264以及157。 根據(jù)對(duì)照品系在品系譜圖中的位置, 可以得到與該品系大致相似的品系, 包括品系320, 26, 107, 34等。

    圖2 近紅外光譜聚類(lèi)分析結(jié)果

    2.2 二維近紅外相關(guān)分析

    二維相關(guān)譜表征的是外擾變化的特征光譜信息, 若兩個(gè)樣品完全相同, 則兩樣品相關(guān)圖譜上不會(huì)體現(xiàn)任何的信息; 兩個(gè)樣品越相似, 其相關(guān)強(qiáng)度就越小, 反之成立, 所以可通過(guò)相關(guān)譜技術(shù)實(shí)現(xiàn)樣品相似性的判別。

    在上述近紅外光譜聚類(lèi)分析不同玉米品系一級(jí)篩選的基礎(chǔ)上, 選出了品系14, 26, 9和157進(jìn)行二維相關(guān)性分析, 對(duì)其進(jìn)行二級(jí)篩選。 其中, 品系14和26是聚類(lèi)分析中與對(duì)照品種JK958相似的品系, 而品系157和541在品系譜圖中與JK958相距相對(duì)較遠(yuǎn), 即相差比較大的品系。 圖3(a)—(d)分別是品系14, 26與JK958相關(guān)計(jì)算對(duì)應(yīng)的自相關(guān)譜, 圖3(a)中, 品系14和JK958在4 337, 4 701, 5 085和6 270 cm-1等處出現(xiàn)較強(qiáng)的自相關(guān)峰, 其強(qiáng)度的范圍在0.000 0~0.000 2 a.u., 大小為10-4數(shù)量級(jí); 圖3(b)中, 品系26和JK958在4 010, 5 021, 5 812和8 395 cm-1等處出現(xiàn)較強(qiáng)的自相關(guān)峰, 其強(qiáng)度的范圍為: 0.000 00~0.000 10 a.u., 大小為10-5數(shù)量級(jí)。 圖3(c)中, 品系9與JK958在4 380, 4 754和5 203 cm-1等處出現(xiàn)較強(qiáng)的自相關(guān)峰, 其自相關(guān)強(qiáng)度范圍: 0.000 0~0.001 6, 大小為10-4數(shù)量級(jí)。 圖3(d)中, 品系157與JK958在4 327, 4 711和5 191 cm-1等處出現(xiàn)較強(qiáng)的峰, 其強(qiáng)度約為0.000 4~0.002 0 a.u., 大小為10-4數(shù)量級(jí)。 故, 相比較之下, 前者的自相關(guān)強(qiáng)度小于后者。 因此, 這兩個(gè)品系中, 品系9可能與對(duì)照組更為相似。 從自相關(guān)強(qiáng)度整體來(lái)看四個(gè)品系與JK958品種的自相關(guān)強(qiáng)度由大到小的排列順序?yàn)?57>9>14>26, 表明: 品系26與對(duì)照品種JK958最相似。

    圖3 品系14(a), 26(b), 9(c)和157(d)的自相關(guān)譜

    2.3 農(nóng)藝性狀相關(guān)分析

    為了驗(yàn)證上述方法分析結(jié)果的有效性, 采集了田間實(shí)地測(cè)量的玉米15個(gè)主要農(nóng)藝性狀數(shù)據(jù)(見(jiàn)表1), 15個(gè)主要農(nóng)藝性狀分別為穗長(zhǎng)、 穗行數(shù)、 行粒數(shù)、 穗粗、 禿尖程度、 穗重、 穗粒重、 出籽率、 百粒重、 軸粗、 軸色(軸色分為紅色和白色)、 株高、 穗位高、 單株葉數(shù)、 畝產(chǎn)量。

    表1 26個(gè)玉米品系的15個(gè)農(nóng)藝性狀

    續(xù)表1

    10719.020.038.062.90.0413.0318.577.143.339.8紅250.0120.017.0708.010923.020.048.061.90.5509.5389.376.448.141.9紅280.0120.015.0865.011020.016.042.055.50.0342.1281.482.344.629.4紅260.0134.014.0625.511219.020.040.053.90.0354.6293.582.839.029.7紅270.0120.014.0652.012123.018.048.049.10.5312.1276.788.732.227.4紅275.0125.015.0615.014722.418.043.059.50.5479.4373.677.949.835.0紅276.0146.018.0830.015720.016.041.056.50.0373.0319.385.651.029.5紅260.0100.013.0709.526322.418.037.061.40.0506.3379.775.058.338.1紅260.0120.015.0844.026424.216.045.016.90.0565.5428.375.744.933.5紅295.0135.015.0952.028421.424.047.065.902.2467.8362.777.534.940.9白235.0115.014.0806.031420.022.044.059.90.6388.9324.383.435.934.5紅250.0120.013.0720.531724.018.043.057.20.0508.2381.975.253.836.5白275.0125.015.0848.532024.018.045.060.530.2504.6405.380.353.540.6紅275.0115.015.0900.554119.222.041.060.10.2401.3333.883.242.135.4紅220.0100.016.0742.054219.022.046.063.40.2456.4382.483.837.735.7白260.0150.016.0850.058224.516.052.051.30.0442.5344.377.844.130.3紅260.0130.017.0765.0JK95822.216.051.055.90.0437.0393.990.142.031.5白290.0140.014.0875.5

    將統(tǒng)計(jì)所得的農(nóng)藝性狀進(jìn)行系統(tǒng)聚類(lèi)分析。 在系統(tǒng)聚類(lèi)分析的譜系(圖4)中可以看出: 當(dāng)類(lèi)間距=10時(shí), 26個(gè)玉米品系(品種)被聚類(lèi)2類(lèi): 第一類(lèi)包含對(duì)照品種JK958以及品系582, 320, 26, 264, 57, 284, 24, 147, 542, 16, 109, 317和263, 第二類(lèi)包括品系110, 121, 112, 489, 10, 541, 14, 314, 157, 9, 107和84。 其中, 品系110, 121, 112和489, 產(chǎn)量在畝產(chǎn)1 200 kg左右, 其單位面積產(chǎn)量在所有品系中最低; 而品系10, 541等8個(gè)品系的株高和穗位高相對(duì)較低。 結(jié)合農(nóng)藝性狀和近紅外光譜分析結(jié)果, 得到品系320, 26, 24, 147, 109和263是二者的交叉結(jié)果。 當(dāng)自相關(guān)強(qiáng)度在10-5時(shí), 品系26和JK958聚為一類(lèi), 而品系14, 9和157在10-4時(shí)聚為同一類(lèi)。 上述研究表明, 基于近紅外光譜和二維相關(guān)譜技術(shù)對(duì)玉米品系進(jìn)行初步快速篩選的方法是可行且有效的。

    圖4 農(nóng)藝性狀聚類(lèi)分析結(jié)果

    3 結(jié) 論

    提出了一種基于近紅外光譜結(jié)合二維相關(guān)譜技術(shù)快速篩選玉米雜交種的方法, 并通過(guò)田間26個(gè)品系15個(gè)農(nóng)藝性狀數(shù)據(jù)的聚類(lèi)分析, 驗(yàn)證了所提出快速篩選方法的有效性和可靠性。 所提出的方法可以為其他作物(水稻、 小麥等)的雜交種篩選提供新思路。

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